一种应用悬浮芯片技术检测霍乱弧菌O1方法技术

本发明专利技术涉及一种用于霍乱弧菌Ｏ１检测的悬浮芯片及其检测方法，该悬浮芯片包括微球载体和固定在载体上的寡聚核苷酸探针，其中该寡聚核苷酸探针是从霍乱弧菌Ｏ－抗原基因簇筛选的霍乱弧菌Ｏ１特异性基因ｒｆｂ中的一段ＤＮＡ序列。利用设计的引物将待检样品基因组ＤＮＡ扩增并标记后，利用上述悬浮芯片进行杂交，根据杂交荧光强度，可判断待检样品中是否含有霍乱弧菌Ｏ１。悬浮芯片检测灵敏度高，可达到ｆｇ级基因组ＤＮＡ水平，可满足临床样本和环境样本检测需要，并具特异性高、操作简单、成本低等特点，易于推广。并采用ＵＮＧ－Ｔａｑ酶ＰＣＲ反应体系，大大降低了ＰＣＲ假阳性结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种分子生物学检测芯片，具体的是一种应用悬浮芯片技术 对霍乱弧菌Ol进行检测。
技术介绍
悬浮芯片技术是将基因芯片技术与流式细胞仪技术结合产生的一种新 技术，是一种多重数据获取和分析平台，全名为多功能多指标同步分析体系(Flexible Multiple Analyte Profiling, xMap )， 也禾尔为Multi-Analyte Suspension Array,有机整合了荧光编码微球、激光技术、微流体技术、快速 信号处理和数据分析系统，即保证了信号质量，又提供高通量的新一代分子 检测技术平台。悬浮芯片与传统的基因芯片最大不同之处在于，传统的基因 芯片点样在玻片或尼龙膜上，依靠坐标定位进行寻址，而悬浮芯片将检测探 针共价交联到不同的色标微球上，根据色标微球上所带的荧光素进行区分。悬浮芯片系统主要由三部分组成1、微球直径5.6pm左右，由聚苯乙 烯构成的，表面带有约108个羧基位点，可与寡核苷酸探针和蛋白以肽键耦 联；2、荧光素微球中标记了红色和橙色荧光素，每种分成10个浓度梯度， 将微球分成可被识别的100种微球，当微球被635nm激光激发后，能发射 6本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于霍乱弧菌Ｏ１检测的悬浮芯片，包括诊断微球和与诊断微球耦联的寡聚核苷酸探针，其特征在该寡聚核苷酸探针是霍乱弧菌Ｏ１Ｏ－抗原合成酶基因ｒｆｂ上的一段序列。

【技术特征摘要】
1. 一种用于霍乱弧菌O1检测的悬浮芯片，包括诊断微球和与诊断微球耦联的寡聚核苷酸探针，其特征在该寡聚核苷酸探针是霍乱弧菌O1O-抗原合成酶基因rfb上的一段序列。2. 根据权利要求1所述霍乱弧菌Ol检测的悬浮芯片，其中寡聚核苷酸探针 是序列如序列表中序列3所示，在其5'进行NH2-(CH2:h2修饰。3. 根据权利要求1或2所述霍乱弧菌Ol检测的悬浮芯片，其特征是该芯片 可鉴定和检测霍乱弧菌Ol。4. 根据权利要求1或2所述霍乱弧菌01检测的悬浮芯片，其特征在于包括 一对特异性引物，引物序列如序列表中序列1和2所示，并对序列1进行5'Biotin 修饰。5. 权利要求1或2所述用于志贺氏菌检测的悬浮芯片的制备方法，包括如 下步骤制备寡聚核苷酸探针；用纯水稀释氨基修饰的探针；将储备的微球振 荡，然后转移到棕色EP管中；离心收集微球，加入MES液进行振荡；向悬浮 微球中加入上述探针，并振荡；在微球溶液中加入新配制的EDC溶液，振荡； 然后进行温育；再次向微球溶液中加入新配置的10mg/ml EDC，振荡，然后进 行温育；向微球溶液中加0.02。/。Tween-20,离心收集微球；用0.1。/。SDS重悬微 球，离心收集微球；用TE悬浮微球；用血球计数板计算微球的个...

【专利技术属性】
技术研发人员：王景林，赵金银，高姗，刘艳华，康琳，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]