通过金属离子亲和层析法的肽纯化制造技术

一种聚合物底物，其用含有至少一个环状、金属离子配位配体基团的官能团官能化，所述环状配体基团含有至少３个独立地选自氮、氧或硫的金属离子配位供电子原子。将大环配体置于金属离子配位球的“折叠”面，形成对加入的经“标记”的蛋白（融合蛋白）之寡肽“标记”的一种单一方向的途径和排列。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术尤其涉及通过固定化金属离子亲和层析法的肽的分离和纯化领域，所述肽 特别为多肽，如重组蛋白。
技术介绍
重组(基因工程化)肽包括寡肽和多肽，特别是人类和动物中倾向于治疗用途的 蛋白，其生产的一个重要部分是所述肽的纯化，以至达到足够高水平的纯度，尤其是使得所 需蛋白基本上不含污染物，其中的污染物特别带有(a)在生产过程(典型的，发酵过程或使 用适当微生物的选择或基因修饰菌株的类似方法)中可能出现的任何外源蛋白和(b)在生 产过程中可能被引入的不希望的金属离子(特别是重金属离子)。固定化金属离子亲和层析法(IMAC)是利用许多生物聚合物所表现出来的与金属 离子在亲和力上的差别的一种通用分离方法。这种技术包括在表面预先被多齿配体化学 修饰的固体载体基质上合适的金属离子的螯合。所得的固定化金属离子螯合复合物从而 具有与相作用的蛋白表面上一个或多个电子供体基团配位的潜力(Sulkowski，Ε. Trends in Biotechnology,3(1985) 1-6 ；Porath, J.，Carlsson, I.，01s-son,1. and Belfrage, G. , Natu本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种官能化聚合物底物，该聚合物底物用含有至少一个环状、金属离子配位配体基团的官能团官能化，所述环状配体基团含有至少３个独立地选自氮、氧和硫的金属离子配位供电子原子。

【技术特征摘要】
DK 2001-11-12 PA200101681一种官能化聚合物底物，该聚合物底物用含有至少一个环状、金属离子配位配体基团的官能团官能化，所述环状配体基团含有至少3个独立地选自氮、氧和硫的金属离子配位供电子原子。2.根据权利要求1的官能化聚合物底物，其中所述环状配体基团中的至少1个金属离 子配位供电子原子是环原子。3.根据权利要求1或2的官能化聚合物底物，其中所述聚合物基本上不溶于水。4.根据权利要求1-3中任一项的官能化聚合物底物，其中所述聚合物选自多糖类及 其衍生物；聚亚烷基二醇类及其衍生物；聚乙烯醇类及其衍生物；聚丙烯酰胺类；表面改性 的二氧化硅类；和表面改性的金属氧化物。5.根据前述权利要求中任一项的官能化聚合物底物，其中所述聚合物选自琼脂糖及其 衍生物；葡聚糖及其衍生物；和纤维素及其衍生物。6.根据前述权利要求中任一项的官能化聚合物底物，其中所述的环状、金属离子配位 配体基团是在具有至少6个环原子的环中含有至少3个金属离子配位供电子原子的杂环基 团。7.根据前述权利要求中任一项的官能化聚合物底物，所述环状、金属离子配位配体基 团是来自具有至少六个环原子的三氮杂环烷的基团。8.根据前述权利要求中任一项的官能化聚合物底物，其中所述官能团具有通式(I)9.根据权利要求8的官能化聚合物底物，其中取代环-CH2-基团中氢原子的任选取代10.根据权利要求8或9的官能化聚合物底物，其中取代环-NH-基团中氢原子的任选 取代基选自任选的经取代的低级烷基基团和任选的经取代的芳基基团，所述低级烷基基团 或芳基基团上的任选的取代基任选的含有一个或多个金属离子配位供电子原子。11.根据权利要求8-10中任一项的官能化聚合物底物，其中所述的聚合物底物是琼脂糖； η 为 0，1，2 或 3 ；每个三氮杂环烷环中的a，b和c为2 ； 当η为0时，R是H;当η为1时，R选自-[CH2]m-，其中m为2，3或4X是可衍生自表氯醇的基团，其是通过表氯醇和琼脂糖反应，随后将所得产物与待结合 到X上的三氮杂环烷环的环-NH-基团反应。12.根据前述权利要求中任一项的官能化聚合物底物，其还含有配位到所述官能团中 至少一个所述环状配体基团上的金属离子。13.根据权利要求12的官能化聚合物底物，其中所述配位的金属离子是二价或三价金 属离子。14.根据权利要求13的官能化聚合物底物，其中所述的金属离子选自Ca2+、Mg2+、Cu2+、 Zn2+、Ni2+、Mn2+、Co2+、Fe3+ 和 Cr3+。15.一种制备权利要求1所述的官能化聚合物底物的方法，包括如下步骤选择具有活性官能团的聚合物底物，该活性官能团能够与具有第一和第二官能团的双 官能试剂之第一官能团发生第一次反应；16.根据权利要求15的方法，其中所述环状配体基团中的金属离子配位供电子原子中 的至少一个为环原子。17.根据权利要求15或16的方法，其中所述聚合物基本上不溶于水。18.根据权利要求15-17中任一项的方法，其中所述的聚合物选自多糖类及其衍生物； 聚亚烷基二醇类及其衍生物；聚乙烯醇类及其衍生物；聚丙烯酰胺类；表面改性的二氧化 硅类；和表面改性的金属氧化物。19.根据权利要求15-18中任一项的方法，其中所述聚合物选自琼脂糖及其衍生物；葡 聚糖及其衍生物；和纤维素及其衍生物。20.根据权利要求15-19中任一项的方法，其中所述的环状、金属离子配位配体基团是 在具有至少6个环原子的环中含有至少3个金属离子配位供电子原子的杂环基团。21.根据权利要求15-20中任一项的方法，其中所述的环状、金属离子配位配体是衍生 自具有至少6个环原子的三氮杂环烷的基团。22.根据权利要求15-21中任一项的方法，其中所述的含有该环状、金属离子配位配体 基团的物质是通式(II)的物质23.根据权利要求22的方法，其中取代环-CH2-基团中氢原子的任选取代基选自任选 的经取代的低级烷基基团和任选的经取代的芳基基团。24.根据权利要求22或...

【专利技术属性】
技术研发人员：T克里斯坦森，MTW赫恩，L斯比希亚，姜炜，JT穆尼，B格拉汉姆，
申请(专利权)人：诺沃挪第克公司，莫纳什大学，
类型：发明
国别省市：DK[]