【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种适用于髙GC含量基因的PCR 扩增体系及扩增方法。
技术介绍
PCR (Polymerase Chain Reaction)全称聚合酶链式反应，是广泛用于诊断 学、分子生物学、微生物学、遗传学的一项特定DNA体外扩增技术。虽然1988 年以来人们用基本的PCR程序已经成功扩增出了大量的基因片段，但是非特异 性的结果和耗时的过程也开始渐渐无法满足更加广泛的需求。特别是面对具有 特殊二级结构的高GC含量基因，包括一些引物、增强子和其他控制元件，人 们往往束手无策。于是多年来，人们对常规的PCR程序做了很多的改进，也尝 试了很多可以提髙产物特异性的方法，包括热启动、两步PCR、 slowdown PCR 和某些添加剂的应用等。热启动是用95C先使具有复杂二级结构的模板DNA充分变性，再加入Taq 酶，这样做可以避免操作过程中产生非特异性序列的扩增，并将DNA聚合酶与 其他反应物隔绝，避免在未达到设定温度前就开始反应。slowdown PCR是Ulrich H Frey等人于2003年首次报道的，它通过在PCR 的前几个循环使...
【技术保护点】
一种用于高ＧＣ含量基因的ＰＣＲ扩增体系，所述ＰＣＲ扩增体系包括：ＤＮＡ聚合酶、ＭｇＣｌ↓［２］、ｄＮＴＰ、上游引物、下游引物、ＤＮＡ模板、二次蒸馏水；其特征在于：所述ＰＣＲ扩增体系还包括：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，二硫苏糖醇，牛血清白蛋白和添加剂； 所述添加剂选自：甘油、甘露醇、山梨醇、聚乙二醇、正丙砜、二乙砜、甲基磺酰甲烷、二甲亚砜、２，４－二甲基噻吩烷、３－环丁烯砜、甜菜碱、１，５，６－三氢－２－甲基－４－羧基嘧啶、１，６－二氢－２－甲基－４－羧基－５羟基嘧啶、１，４，５ ，６－四氢－２－甲基－嘧啶或４，５，６，７－四氢－２－甲基－１氢－１，３－二氮杂卓－４－羧酸中的一...
【技术特征摘要】
1.一种用于高GC含量基因的PCR扩增体系，所述PCR扩增体系包括DNA聚合酶、MgCl2、dNTP、上游引物、下游引物、DNA模板、二次蒸馏水；其特征在于所述PCR扩增体系还包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，二硫苏糖醇，牛血清白蛋白和添加剂；所述添加剂选自甘油、甘露醇、山梨醇、聚乙二醇、正丙砜、二乙砜、甲基磺酰甲烷、二甲亚砜、2，4-二甲基噻吩烷、3-环丁烯砜、甜菜碱、1，5，6-三氢-2-甲基-4-羧基嘧啶、1，6-二氢-2-甲基-4-羧基-5羟基嘧啶、1，4，5，6-四氢-2-甲基-嘧啶或4，5，6，7-四氢-2-甲基-1氢-1，3-二氮杂卓-4-羧酸中的一种或一种以上的混合物；其中，每25μL PCR扩增体系包括DNA聚合酶1U～2.5U，MgCl2 2.5×10-5mmol～6.25×10-4mmol，dNTP 5×10-6mmol～1×10-5mmol，上游引物2.5×10-5μmol～5×10-5μmol，下游引物2.5×10-5μmol～5×10-5μmol，DNA模板10～100ng，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐1×10-3mmol～1.5×10-3mmol，二硫苏糖醇2×10-6mmol～3×10-6mmol，牛血清白蛋白0.5μg～0.7μg，添加剂0.2μL～0.3μL。2. 根据权利要求1所述的用于高GC含量基因的高效PCR扩增体系，其 特征在于，所述髙GC含量基因中GC含量髙达85%。3. 根据权利要求1所述的用于高GC含量基因的高效PCR扩增体系，其 特征在于，所述髙GC含量基因选自人类与动物基因组中的原癌基因、疾病 相关基因的调控序列、与植物生长、分化相关的调控序列或微生物代谢途径中 关键酶的基因中的一种。4. 根据权利要求1所述的用于高GC含量基因的高效PCR扩增体系，其 特征在于，所述高GC含量基因的长度的最大值达1.5Kb。5. 根据权利要求1所述的用于高GC含量基因的高效PCR扩增体系，其 特征在于，所述髙效PCR扩增体系适用范围为所有生物的基因扩增。6. 根据权利要求1所述的用于高GC含量基因的高效PCR扩增体系，其 特征在于，所述DNA聚合酶选自Taq DNA聚合酶、KoD DNA聚合酶、Pwo DNA ...
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