从林蛙油中提取多糖的方法技术

本发明专利技术公开了从林蛙油中提取多糖的方法，通过林蛙油用水发制、Ｃｏ６０辐照、乙醇醇沉、有机脱肽液脱多肽和ＤＥＡＥ层析柱层析纯化；这样有利于多糖的提取，有利于多糖与蛋白质之间连接断开，有利于肽段与多糖的分离，有利于提高多糖的纯度，且提取过程对多糖的生物活性影响较少，多糖提取率可以达到３４％，多糖的纯度可以达到９８．２６％；因此本发明专利技术是一种多糖提取率较高，提取的多糖纯度较高、生物活性较好的从林蛙油中提取多糖的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多糖的提取，具体涉及。
技术介绍
林蛙油俗称田鸡油、哈什蟆油、蛤蚂油，系蛙科动物中国林蛙雌蛙的输卵管经采制 干燥得到。主要含有蛋白质、水分、糖类(包括多糖)、脂肪，还有蛙醇、胆固醇、磷脂、维生 素、脂肪酸、人体必需的10种氨基酸、微量元素及激素等，多糖是林蛙油的重要成分之一， 具有抗衰老、抗氧化、提高免疫及抗肿瘤等多种生物功效。目前，提取多糖的常用方法有热 水浸提法、稀酸浸提法、稀碱浸提法和酶解法等。热水浸提法提取效率不高；用稀酸浸提时， 要求时间短、温度低，条件控制不好易使多糖发生降解；稀碱提取，虽然可以提高多糖的得 率，但对多糖的生物活性有很大影响。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种多糖提取率较高，提取的多糖纯度较高、 生物活性较好的。 本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为，包 括下述步骤 1)发制在每克林蛙油中加入100 150ml去离子水，搅拌后在40 55。C温度条 件下发制9 12小时，得到发制液；发制后糖蛋白被水包围，有利于提取，使多糖的提取率 得到提高； 2)辐照将上述发制液装入塑料袋中并封口，然后用照射剂量为10 15Kgy的 Co60辐照该塑料袋，得到辐照液；用10Kgy以上辐照基本上可以使糖与蛋白质之间连接断 开，让蛋白质分子断裂为肽段，断链效果优于酶解法、酸或碱浸提法，且对多糖的生物活性 影响较小； 3)醇沉按体积比2 : 1在上述辐照液中加入浓度为95%的乙醇醇沉，离心过滤 得到沉淀物； 4)脱肽按重量比1 : 50在上述沉淀物中加水溶解配成水溶液，按体积比4 : 1 比例由氯仿和正丁醇配成有机脱肽液，脱多肽方法为按体积比5 : 2在所述水溶液中加入 所述有机脱肽液，振荡20 40min，静置让水溶液与有机脱肽液分层，取上层的水溶液重复 上述用有机脱肽液脱多肽方法，脱多肽4 5次后脱肽完毕，最后取得上层的水溶液为多 糖溶液；用该有机脱肽液经4 5次脱肽，一般能把断开的肽段与多糖分离，使多糖纯度提 高； 5)纯化将上述多糖溶液用二乙氨乙基纤维素(DEAE)-52层析柱层析，层析后用 水、0. lmol/LNaCl溶液、0. 3mol/L的NaCl溶液依次梯度洗脱，混合各次洗脱液，洗脱液用旋 转蒸发仪减压浓縮后，用去离子水透析36小时除去洗脱液中NaCl，然后真空干燥洗脱液得 到多糖；纯化使多糖的杂质降低，多糖的纯度较离。3 与现有技术相比，本专利技术的优点在于，通过林蛙油用 水发制、Co6°辐照、乙醇醇沉、有机脱肽液脱多肽和DEAE层析柱层析纯化；这样有利于多糖 的提取，有利于多糖与蛋白质之间连接断开，有利于肽段与多糖的分离，有利于提高多糖的 纯度，且提取过程对多糖的生物活性影响较少，多糖提取率可以达到34%，多糖的纯度可以 达到98. 26%。因此本专利技术是一种多糖提取率较高，提取的多糖纯度较高、生物活性较好的 。具体实施例方式以下结合实施例对本专利技术作进一步详细描述。 实施例 ，在每克林蛙油中加入100 150ml去离子水，搅拌后 在40 55t:温度条件下发制9 12小时，得到发制液，将发制液装入塑料袋中并封口，然 后用照射剂量为10 15Kgy的CcT辐照该塑料袋，得到辐照液，对辐照液进行光谱分析， 只有-0H的官能团的特征峰，说明蛋白质断链效果明显，按体积比2 : l在辐照液中加入浓 度为95%的乙醇醇沉，离心过滤得到沉淀物，按重量比1 : 50在沉淀物中加水溶解配成水溶液，然后按体积比5 : 2在水溶液加入有机脱肽液(4氯仿l正丁醇配制)，振荡20 40min，静置让水溶液与有机脱肽液分层，取上层的水溶液重复用有机脱肽液脱多肽，脱多 肽4 5次后脱肽完毕，最后取得上层的水溶液为多糖溶液，多糖溶液用色谱或核磁分析， 有三个组份的多糖，主要组份由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、果糖和半乳糖组成；将多 糖溶液用DEAE-52层析柱层析，层析后用水、0. lmol/LNaCl溶液、0. 3mol/L的NaCl溶液依 次梯度洗脱，混合各次洗脱液，洗脱液用旋转蒸发仪减压浓縮后，浓縮程度可以根据各技术 人员习惯，以目测到合适的透析浓度即可，用去离子水透析36小时除去洗脱液中NaCl，然 后真空干燥洗脱液得到多糖；用蒽酮_硫酸法检测多糖含量，多糖提取率可以达到34% ，多 糖的纯度可以达到98. 26%。本文档来自技高网...

【技术保护点】
从林蛙油中提取多糖的方法，其特征在于包括下述步骤：　　１）发制：在每克林蛙油中加入１００～１５０ｍｌ去离子水，搅拌后在４０～５５℃温度条件下发制９～１２小时，得到发制液；　　２）辐照：将上述发制液装入塑料袋中并封口，然后用照射剂量为１０～１５Ｋｇｙ的Ｃｏ６０辐照该塑料袋，得到辐照液；　　３）醇沉：按体积比２∶１在上述辐照液中加入浓度为９５％的乙醇醇沉，离心过滤得到沉淀物；　　４）脱肽：按重量比１∶５０在上述沉淀物中加水溶解配成水溶液，按体积比４∶１比例由氯仿和正丁醇配成有机脱肽液，脱多肽方法为按体积比５∶２在所述水溶液中加入所述有机脱肽液，振荡２０～４０ｍｉｎ，静置让水溶液与有机脱肽液分层，取上层的水溶液重复上述用有机脱肽液脱多肽方法，脱多肽４～５次后脱肽完毕，最后取得上层的水溶液为多糖溶液；　　５）纯化：将上述多糖溶液用二乙氨乙基纤维素（ＤＥＡＥ）－５２层析柱层析，层析后用水、０．１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ溶液、０．３ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ溶液依次梯度洗脱，混合各次洗脱液，洗脱液减压浓缩后用去离子水透析３６小时除去洗脱液中ＮａＣｌ，然后真空干燥洗脱液得到多糖。

【技术特征摘要】
从林蛙油中提取多糖的方法，其特征在于包括下述步骤1)发制在每克林蛙油中加入100～150ml去离子水，搅拌后在40～55℃温度条件下发制9～12小时，得到发制液；2)辐照将上述发制液装入塑料袋中并封口，然后用照射剂量为10～15Kgy的Co60辐照该塑料袋，得到辐照液；3)醇沉按体积比2∶1在上述辐照液中加入浓度为95％的乙醇醇沉，离心过滤得到沉淀物；4)脱肽按重量比1∶50在上述沉淀物中加水溶解配成水溶液，按体积比4∶1比例由氯仿和正丁醇配成有机脱肽液，脱多肽方...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏秀榕，王日昕，李妍妍，史戈，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：97[中国|宁波]