一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法技术

本发明专利技术提供一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，包括以下制备步骤：1）选取，粉碎；2）脱脂；3）碱提；4）分离；5）提取银耳多糖；6）提取银耳蛋白，本发明专利技术提供的这种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，提取简便，提取效率高，能有效的提高提取的纯度，增强提取后物质的功能性。

【技术实现步骤摘要】
一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法
本专利技术涉及生物工程
，尤其是一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法。
技术介绍
银耳(Tremellafuciformls)是一种经济价值高，营养丰富的药食两用菌，具有滋补生津、润肺养胃之功效。银耳多糖是银耳的主要活性成分，具有提高机体免疫能力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗溃疡、抗血栓形成、抗突变等作用。目前，银耳多糖的常用提取方法是热水浸提法，但这种传统的提取方法存在着提取率低、耗时、造成了资源浪费等问题。银耳多糖分为胞外多糖和胞壁多糖，胞壁多糖用水很难提取完全，即使是稀酸或稀碱提取法，又由于部分多糖易发生水解，破坏多糖的活性结构，导致多糖损失和提取率减少。现有在银耳中提取的技术，例如一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，该专利技术涉及一种银耳多糖和银耳蛋白的提取方法，包括：（1）银耳菌的活化培养和发酵培养；（2）超滤膜浓缩和破碎银耳孢子；（3）聚乙二醇/无机盐双水相体系的配制；（4）聚乙二醇/无机盐双水相体系提取；（5）冷冻干燥制备银耳多糖；（6）聚乙二醇/无机盐双水相体系二次提取，超滤膜过滤，冷冻干燥制备银耳蛋白。该专利技术可以实现银耳孢子生产和多糖提取的连续化、规模化，便于银耳多糖的工业化生产；得到的产物中既有银耳孢子的胞内多糖，又有银耳孢子液体发酵产生的胞外多糖，极大提高了银耳多糖的产率；并且使银耳多糖和蛋白质得到同时分离，避免了现有sevag法去除蛋白质的复杂操作和机溶剂污染的弊端，提高了多糖的纯度。该专利技术的这种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，提取较为复杂，提取时间久，且提取的银耳多糖和银耳蛋白相对纯度较差。专利
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种提高多糖提取效率，产量高，提高提取纯度，提取简便的提取银耳多糖和银耳蛋白的方法。为解决上述现有的技术问题，本专利技术采用如下方案：一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，包括以下制备步骤：1）选取银耳用清水清洗，微波干燥15-23min，粉碎至100-150目，得银耳粉末；2）在银耳粉末中加入1.2-1.7倍的乙醇乙醚混合液，回流1-3h后过滤取滤渣；3）在滤渣中加入2-3倍的清水，搅拌，超声波助溶浸泡，再加入氢氧化钠浓度1-2%的氢氧化钠水溶液调节pH值至10-11后浸泡，回流浸提2-3次，合并得浸提液；4）在浸提液中加入饱和度为95-98%的乙醇，搅拌，浸泡，得沉淀物；5）在沉淀物中加入去离子水和0.01-0.02%的助滤剂后超滤膜浓缩，干燥，得银耳多糖；6）在银耳多糖中加入2-3倍的蒸馏水，依次加入氯仿和正丁醇，振摇20-35min，离心，取水层和溶液层交界处的液体，超滤膜浓缩，干燥，得银耳蛋白。作为优选，步骤2中乙醇乙醚混合液中乙醇与乙醚的比例:1-1.2：1，加入乙醇乙醚混合液时温度加热至52-61℃，使银耳在乙醇乙醚中有效的脱脂，为提高提取多糖和蛋白提供便捷。作为优选，步骤3中加入氢氧化钠水溶液浸泡时还需加入复合酶，酶解1-2.3h，后灭酶10-17min，采用复合酶将液浸泡成分酶解，通过复合酶破坏细胞壁，提高提取多糖和蛋白的纯度。作为优选，复合酶为纤维素酶和果胶酶按1：3-4.6的比例混合而成，按一定的比例调节使用酶，提高酶解质量和酶解效率。作为优选，步骤5中助滤剂的成分及其重量份为：蒙脱石4-10份,六偏磷酸钠0.1～0.5份,碳酸钠4.2～6.3份,硅溶胶5～8.4份,氢氧化铝1.8～2.2份，玛雅蓝0.01-0.02份、硫氰酸胍0.02-0.04份，通过助滤剂将不需要的杂质充分吸附，提高提取纯度。作为优选，步骤5中超滤膜浓缩时采用截留分子量为3000～6000Dal的超滤膜浓缩，干燥方式为冷冻干燥，干燥时有效的保护多糖的组织，提高提取多糖的功效。作为优选，步骤6中银耳多糖溶于蒸馏水后还需加入0.02-0.04%的蛋白酶抑制剂，防止在提取蛋白时蛋白降解，保证提取蛋白的纯度。作为优选，步骤6中氯仿的加入量为银耳多糖溶液的20-30%，正丁醇的加入量为氯仿溶液的25-38%。作为优选，步骤6中超滤膜浓缩时采用截留分子量为6000～10000Dal的超滤膜浓缩，干燥方式为冷冻干燥。有益效果：本专利技术提供的这种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，提取简便，提取效率高，能有效的提高提取的纯度，增强提取后物质的功能性。可能是叠加产生了意想不到的有益成分或协同交互作用，玛雅蓝和硫氰酸胍通过氢氧化铝、六偏磷酸钠促进多糖的溶解，从而提高其产量，本专利技术采用了上述技术方案提供一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。具体实施方式结合以下实施例作进一步详细描述：实施例1：一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，包括以下制备步骤：1）选取银耳用清水清洗，微波干燥15min，粉碎至100目，得银耳粉末；2）在银耳粉末中加入1.2倍的乙醇乙醚混合液，回流1h后过滤取滤渣；3）在滤渣中加入2倍的清水，搅拌，超声波助溶浸泡，再加入氢氧化钠浓度1%的氢氧化钠水溶液调节pH值至10后浸泡，回流浸提2次，合并得浸提液；4）在浸提液中加入饱和度为95%的乙醇，搅拌，浸泡，得沉淀物；5）在沉淀物中加入去离子水和0.01%的助滤剂后超滤膜浓缩，干燥，得银耳多糖；6）在银耳多糖中加入2-3倍的蒸馏水，依次加入氯仿和正丁醇，振摇32min，离心，取水层和溶液层交界处的液体，超滤膜浓缩，干燥，得银耳蛋白。步骤2中乙醇乙醚混合液中乙醇与乙醚的比例1.2：1，加入乙醇乙醚混合液时温度加热至52℃，使银耳在乙醇乙醚中有效的脱脂，为提高提取多糖和蛋白提供便捷。步骤3中加入氢氧化钠水溶液浸泡时还需加入复合酶，酶解2.3h，后灭酶17min，采用复合酶将液浸泡成分酶解，通过复合酶破坏细胞壁，提高提取多糖和蛋白的纯度。复合酶为纤维素酶和果胶酶按1：4.6的比例混合而成，按一定的比例调节使用酶，提高酶解质量和酶解效率。步骤5中助滤剂的成分及其优选重量份为：蒙脱石10份,六偏磷酸钠0.5份,碳酸钠6.3份，硅溶胶8.4份,氢氧化铝2.2份，玛雅蓝0.02份、硫氰酸胍0.04份，通过助滤剂将不需要的杂质充分吸附，提高提取纯度。步骤5中超滤膜浓缩时采用截留分子量为4000Dal的超滤膜浓缩，干燥方式为冷冻干燥，干燥时有效的保护多糖的组织，提高提取多糖的功效。步骤6中银耳多糖溶于蒸馏水后还需加入0.04%的蛋白酶抑制剂，防止在提取蛋白时蛋白降解，保证提取蛋白的纯度。步骤6中氯仿的加入量为银耳多糖溶液的30%，正丁醇的加入量为氯仿溶液的25-38%。步骤6中超滤膜浓缩时采用截留分子量为8000Dal的超滤膜浓缩，干燥方式为冷冻干燥。实施例2：一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，包括以下制备步骤：1）选取银耳用清水清洗，微波干燥15min，微波频率为3000MHz，粉碎至100目，得银耳粉末；2）在银耳粉末中加入1.2倍的乙醇乙醚混合液，乙醇与乙醚的比例为1.2：1，加入乙醇乙醚混合液时温度加热至52℃，使银耳在乙醇乙醚中有效的脱脂，为提高提取多糖和蛋白提供便捷，回流1h后过滤取滤渣；3）在滤渣中加入2倍的清水，搅拌，超声波助溶浸泡，再加入氢氧化钠浓度1%的氢氧化钠水溶液调节pH值至11后浸泡，加入氢氧化钠水溶液浸泡时还需加入复合酶，酶解2.3h，后灭酶17m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，其特征在于，包括以下制备步骤：1）选取银耳用清水清洗，微波干燥15‑23min，粉碎至100‑150目，得银耳粉末；2）在银耳粉末中加入1.2‑1.7倍的乙醇乙醚混合液，回流1‑3h后过滤取滤渣；3）在滤渣中加入2‑3倍的清水，搅拌，超声波助溶浸泡，再加入氢氧化钠浓度1‑2%的氢氧化钠水溶液调节pH值至10‑11后浸泡，回流浸提2‑3次，合并得浸提液；4）在浸提液中加入饱和度为95‑98%的乙醇，搅拌，浸泡，得沉淀物；5）在沉淀物中加入去离子水和0.01‑0.02%的助滤剂后超滤膜浓缩，干燥，得银耳多糖；6）在银耳多糖中加入2‑3倍的蒸馏水，依次加入氯仿和正丁醇，振摇20‑35min，离心，取水层和溶液层交界处的液体，超滤膜浓缩，干燥，得银耳蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，其特征在于，包括以下制备步骤：1）选取银耳用清水清洗，微波干燥15-23min，粉碎至100-150目，得银耳粉末；2）在银耳粉末中加入1.2-1.7倍的乙醇乙醚混合液，回流1-3h后过滤取滤渣；3）在滤渣中加入2-3倍的清水，搅拌，超声波助溶浸泡，再加入氢氧化钠浓度1-2%的氢氧化钠水溶液调节pH值至10-11后浸泡，回流浸提2-3次，合并得浸提液；4）在浸提液中加入饱和度为95-98%的乙醇，搅拌，浸泡，得沉淀物；5）在沉淀物中加入去离子水和0.01-0.02%的助滤剂后超滤膜浓缩，干燥，得银耳多糖；6）在银耳多糖中加入2-3倍的蒸馏水，依次加入氯仿和正丁醇，振摇20-35min，离心，取水层和溶液层交界处的液体，超滤膜浓缩，干燥，得银耳蛋白。2.根据权利要求1所述的一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，其特征在于：所述步骤2中乙醇乙醚混合液中乙醇与乙醚的比例:1-1.2：1，加入乙醇乙醚混合液时温度加热至52-61℃。3.根据权利要求1所述的一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，其特征在于：所述步骤3中加入氢氧化钠水溶液浸泡时还需加入复合酶，酶解1-2.3h，后灭酶10-17min。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：施春华，张美芬，
申请(专利权)人：嵊州市派特普科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33