一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法。该制备方法包括：ＳＴ细胞或ＩＢＲＳ－２细胞的复苏培养；ＳＴ细胞或ＩＢＲＳ－２细胞的生物反应器微载体培养；ＳＴ细胞或ＩＢＲＳ－２细胞的生物反应器微载体的连续培养；接种猪细小病毒培养；收集病毒液，灭活病毒，制成猪细小病毒灭活疫苗。本发明专利技术的猪细小病毒灭活疫苗的制备方法，为采用反应器微载体培养ＳＴ细胞的猪细小病毒工艺，微载体提供了更大的表面积，不仅能提高ＳＴ细胞密度，提高病毒滴度，而且反应器能自动监控细胞生长或病毒繁殖时的最适生化条件，每批反应器生产上清的病毒滴度均一批间小、质量稳定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种疫苗的制备方法，尤其涉及一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方 法。
技术介绍
利用猪睾丸(ST)传代细胞系生产猪细小病毒灭活疫苗是一种常用猪细小病毒灭 活疫苗的生产工艺。目前，该生产工艺是采用传统的转瓶培养ST细胞工艺，即采用种毒接 种已形成单层的转瓶ST细胞或采用细胞传代时同时接入种毒来生产猪细小病毒灭活疫 苗，因各个转瓶都是独立的细胞元，所以每瓶的细胞质量、病毒产量和滴度都不同，直接导 致产生疫苗批间差大和隐性污染引起高内毒素等缺点，同时劳动强度大。
技术实现思路
专利技术目的针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供一种猪细小病毒灭 活疫苗的制备方法，以实现制备出的猪细小病毒灭活疫苗质量均一。技术方案为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为，包括以下步骤(1) ST细胞或IBRS-2细胞的复苏培养；用方瓶培养从液氮中复苏的ST细胞或IBRS-2细胞，培养条件包括pH值7. 0 7. 3、温度35 37°C，培养基为DMEM ；培养48 72h，培养至细胞浓度为3 6 X IO5Cells/ ml，即可；(2) ST细胞或IBRS-2细胞的生物反应器本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（１）ＳＴ细胞或ＩＢＲＳ－２细胞的复苏培养；用方瓶培养从液氮中复苏的ＳＴ细胞或ＩＢＲＳ－２细胞，培养条件包括：ｐＨ值７．０～７．３、温度３５～３７℃，培养基为ＤＭＥＭ；培养４８～７２ｈ，培养至细胞浓度为３～６×１０↑［５］ｃｅｌｌｓ／ｍｌ，即可；（２）ＳＴ细胞或ＩＢＲＳ－２细胞的生物反应器微载体培养；细胞接种密度为１～２×１０↑［５］ｃｅｌｌｓ／ｍｌ，微载体浓度为３～５ｇ／Ｌ，溶氧为３０％～６０％，ｐＨ值７．０～７．３，温度３５～３７℃，转速４０～６０ｒ／ｍｉｎ，培养基为ＤＭＥＭ；培养至细胞浓度为３～５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ；其中，...

【技术特征摘要】
一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)ST细胞或IBRS 2细胞的复苏培养；用方瓶培养从液氮中复苏的ST细胞或IBRS 2细胞，培养条件包括pH值7.0～7.3、温度35～37℃，培养基为DMEM；培养48～72h，培养至细胞浓度为3～6×105cells/ml，即可；(2)ST细胞或IBRS 2细胞的生物反应器微载体培养；细胞接种密度为1～2×105cells/ml，微载体浓度为3～5g/L，溶氧为30％～60％，pH值7.0～7.3，温度35～37℃，转速40～60r/min，培养基为DMEM；培养至细胞浓度为3～5×106cells/ml；其中，微载体为球状载体Cytodex1或片状载体；(3)ST细胞或IBRS 2细胞的生物反应器微载体的连续培养；以一定速度向生物反应器中连续添加新鲜的DMEM培养基，同时用相同的速度向外排出培养好的ST细胞或IBRS 2细胞，保证ST细胞或IBRS 2细胞在反应器中停留时间内扩增至浓度为3～5×106cells/ml，即可；(4)接种猪细小病毒培养；将猪细小病毒接种于连续...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉和，史春云，刁文华，潘杰，傅元华，
申请(专利权)人：扬州优邦生物制药有限公司，扬州威克生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]