一种应用生物反应器及片状载体大规模扩增猪圆环病毒2型的方法技术

本发明专利技术涉及一种应用生物反应器及片状载体扩增猪圆环病毒2型的方法，属于生物制品技术领域，所述方法包括：1）种细胞的制备，2）生物反应器的准备，3）PK-15细胞悬浮培养，4）PK-15细胞悬浮培养病毒，5）细胞悬浮病毒培养及连续收获，6）病毒液培养周期及收获量。本发明专利技术逾越了转瓶生产工艺存在的多种技术瓶颈，提供了一种利用片状载体悬浮培养PK15细胞，获得高效、可持续性、大规模生产高滴度圆环病毒2型（PCV2）病毒液的工艺。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种应用生物反应器及片状载体扩增猪圆环病毒2型的方法，属于生物制品
。
技术介绍
圆环病毒病感染是近年来发现的一种比较难控制的传染病。该疾病主要侵害哺乳仔猪和育肥猪，及怀孕母猪。其特征性临床症状为患猪体质不良，皮肤苍白。引起的疫病包括猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)，增生性坏死性肺炎(PNP)、猪皮炎与肾病综合征(TONS)、猪呼吸系统疾病综合征(PRDC)、繁殖障碍、先天性震颤及肠炎等。同时PCV-2感染产生的免疫抑制极易引发其它病原混合感染或继发感染。2006、2007年，猪圆环病毒在中国猪“无名高热症”发生中起着重要的诱因作用。目前，圆环病毒病在我国已普遍发生，表现为流行范围广、阳性率高、混合感染严重、种猪感染率高等特点，给我国养猪业造成严重的经济损失。由于本病的危害日益严重，已引起人们的密切关注，养猪行业人士更将其列为当前危害养猪业发展的头号疫病。疫苗免疫是预防该病发生的最有效方法之一。使用生物反应器大规模培养细胞，获得高病毒含量抗原，是当前生物制品生产和疫苗行业发展的主流模式和 必然趋势。使用生物反应器比传统的转瓶培养工艺具有不可比拟的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种应用生物反应器及片状载体大规模扩增猪圆环病毒2型的方法，包括以下步骤：1）使用转瓶培养制备密度为2～3×105个/mL的PK?15细胞液；2）于生物反应器内接种所述细胞液，加入片状微载体，补充体积百分比为5%的牛血清的DMEM培养基，进行细胞悬浮培养，其中：每接种1L的所述细胞液，加入所述片状微载体250g，然后补充体积百分比为5%的牛血清的DMEM培养基至4～5L；3）接种细胞24小时后进行灌注培养，设定搅拌转速为85～100转/分，溶氧为40～50%，pH为7～7.2，温度为36.8～37.3℃；4）所述PK?15细胞悬浮培养至72小时接入猪圆环病毒2型（PCV2），病毒接种量为生物反...

【技术特征摘要】
1.一种应用生物反应器及片状载体大规模扩增猪圆环病毒2型的方法，包括以下步骤: O使用转瓶培养制备密度为2~3X IO5个/mL的PK-15细胞液； 2)于生物反应器内接种所述细胞液，加入片状微载体，补充体积百分比为5%的牛血清的DMEM培养基，进行细胞悬浮培养，其中:每接种IL的所述细胞液，加入所述片状微载体250g，然后补充体积百分比为5%的牛血清的DMEM培养基至4~5L ; 3)接种细胞24小时后进行灌注培养，设定搅拌转速为85~100转/分，溶氧为40~50%, pH 为 7 ~7.2，温度为 36.8 ~37.3°C ; 4)所述PK-15细胞悬浮培养至72小时接入猪圆环病毒2型(PCV2)，病毒接种量为生物反应器培养基8% (V/V)，并同时加入终浓度为2mmol/L的D-氨基葡萄糖，所述生物反应器参数设置为90~100转/分，溶氧为50~55%，pH为7.2~7.4，温度为36.4~36.8V ； 5)所述猪圆环病毒2型(PCV2)病毒接种24小时后至240小时采用灌注工艺培养，使用体积百分比为1%的牛血清培养基进行灌注，生物反应器参数与步骤4...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱钟，潘杰，宋庆庆，李群，徐萍，
申请(专利权)人：扬州优邦生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：