本发明专利技术公开了一株猪支原体肺炎疫苗株，其分类命名为猪肺炎支原体（Mycoplasma?hyopneumoniae），菌株号为NJ，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC?NO:M2012286，保藏日期：2012年7月16日。本发明专利技术的猪支原体肺炎疫苗株对猪有一定的致病性，具有良好的免疫原性。
【技术实现步骤摘要】
猪支原体肺炎疫苗株
本专利技术涉及一种猪支原体肺炎疫苗株，属于兽用生物制品领域。技术背景猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae, Mhp)是引起猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumoniae of swine, Mps又称猪气喘病)的主要病原，也是猪呼吸道疾病综合症的一种重要的原发性病原。Mhp主要感染猪呼吸道，本身致病力不强，临床症状主要以咳嗽和气喘为主，病变特征主要是肺的尖叶、心叶、中间叶和隔叶前缘呈“肉样”或“虾肉样”实变。Mhp感染机体后主要与呼吸道内壁的纤毛黏附，引起纤毛细胞病变和凋亡，导致纤毛断裂和脱落，引 起机体发病，并且会严重影响猪的生长发育和饲料转化率，或者破坏粘膜-纤毛屏障，容易继发其他致病菌的感染(特别是对青年猪)，提高致死率，因而给养猪业造成巨大的经济损失。目前猪支原体肺炎的主要防治措施是疫苗和药物，但有效的药物较缺乏，因此，进行该病的疫苗研制将为本病的预防和控制具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种猪支原体肺炎疫苗株，该疫苗株对猪有一定的致病性，培养滴度高且具有良好的免疫原性。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下:—株猪支原体肺炎疫苗株，其分类命名为猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae),菌株号为NJ,已保藏于中国典型培养物保藏中心,地址:中国.武汉.武汉大学，邮编430072，保藏编号=CCTCC N0:M2012286，保藏日期:2012年7月16日。该菌株是专利技术人于2004年8月于南京某猪场自行采集筛选鉴定获得一株猪支原体肺炎疫苗株。有益效果:本专利技术具有下列突出的优点:I)新菌株免疫原性好:本专利技术的猪支原体肺炎疫苗株为从国内分离培养选育的新菌株，具有良好的免疫原型，保证了疫苗的特异性和免疫效力。2)新菌株生产疫苗简便:本专利技术的猪支原体肺炎疫苗株为经过培育的地方分离菌株，具有高滴度的培养特性，保证了制苗用抗原的高滴度，减少了浓缩步骤；同时该菌株可用硫柳汞灭活，硫柳汞本身是一种防腐剂，用其来灭活兼顾了灭活和防腐，减少了用量，减少了对动物的不良反应；由于本专利技术的菌株具有良好的免疫原性，使的制备的灭活疫苗中免疫佐剂成分简单，制苗方法简便，简化了生产工艺，降低了生产污染的风险。3)新菌株生产的疫苗安全高效:本专利技术的猪支原体肺炎疫苗株为经培育的地方分离株，具有培养滴度高、免疫原性好的特点，使用的佐剂为经过筛选获得的油佐剂具有良好的免疫保护性，水性佐剂具有具有良好的安全性，保证了疫苗的安全和高效。总之，本专利技术的灭活疫苗生产简便、疫苗安全高效，能较好的满足目前猪场的迫切需要，易于大范围推广应用，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。【附图说明】图1猪支原体肺炎灭活疫苗(NJ株)制备流程图。图2猪肺炎支原体NJ株与其他菌株16s rRNA基因相似度比较。图3猪肺炎支原体NJ株与其他菌株16s rRNA基因进化树。图4猪肺炎支原体NJ株与其他菌株P46基因相似度比较。图5猪肺炎支原体NJ株与其他菌株P46基因进化树。【具体实施方式】 下面的实施例将进一步说明本专利技术，而不限制本专利技术的范围。实施例1:猪肺炎支原体NJ株的选育I菌株分离培养将病肺组织进行研磨后，加入液体培养基(pH值7.4~7.6)中，置37°C培养3~10日后pH值降为6.6~7.0，轻度均一混浊。再接种固体培养基置37°C培养3~10日后，可见油煎蛋样菌落，在固体培养基上传代3次后，接种液体培养基，获得猪肺炎支原体。2 鉴定将分离的猪肺炎支原体株置37°C培养3~10日后pH值降为6.6~7.0，轻度均一混浊，进行涂片，染色镜检见典型的猪肺炎支原体菌体。再接种固体培养基置37°C培养3~10日后，可见油煎蛋样菌落。符合猪肺炎支原体的培养特性。根据Genbank报道的猪肺炎支原体16s rRNA和P46基因序列分别设计引物，PCR扩增后，测序，测定的序列与已公布的全基因组序列进行ClustalW比对。对于16s rRNA基因，NJ株与GenBank报道其他菌株的相似度为99.7%~100.0%,相似度比较见图2，进化树如图3所示，NJ株16s rRNA序列见序列表SEQ ID No:1所示。对于P46基因，NJ株与GenBank报道其他菌株的相似度为98.7%~99.9%，相似度比较见图4，进化树如图5所示，NJ株P46序列见序列表SEQ ID No:2所示。这说明猪肺炎支原体NJ株为猪肺炎支原体，且与其他菌株不同。经培养特性、PCR和测序鉴定(序列见序列表SEQ ID No:1 )，分离获得了猪肺炎支原体NJ株。3菌株传代分离获得的猪肺炎支原体NJ株，经液体传代培养，每隔3代进行含量测定。结果含量从 105CCU/mL 上升到 101QCCU/mL。4免疫原性测定猪肺炎支原体NJ株的不同代次制备疫苗，然后各肌肉注射免疫7~15日龄健康易感猪，14日后再加强免疫；首免35日后，连同条件相同的对照猪，用猪肺炎支原体Js组织强毒气管内注射攻毒，攻毒28日后剖检，计算免疫组猪支原体肺炎肺病变指数减少率。结果各代次菌株制备的疫苗免疫组猪支原体肺炎肺病变指数减少率无差异。由此获得的具有培养滴度高，免疫原性好的猪肺炎支原体NJ株。实施例2:猪支原体肺炎灭活疫苗(NJ株)的制备方法。I菌株培养菌株选用猪肺炎支原体NJ株，该菌株由我们分离鉴定，传代培育后获得，本菌株已于2012年7月16日送中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为:CCTCCM2012286。2菌株特性2.1形态和生化特性本菌为革兰氏阴性多形态微生物，有环状、球状、点状、杆状和两极状，不易着色，无细胞壁。生化特性应符合细菌分类学中本菌的特性。2.2培养特性在液体培养基(pH值7.4~7.6)中，置37°C培养3~7日后pH值降为6.6~7.0，轻度均一混浊，活菌滴度可达到IOkiCXUAiL以上。接种固体培养基，置37°C培养3~10日后,可见油煎蛋样菌落。液体培养基配方为=Eagles氏液1000mL,水解乳蛋白10.0g，猪血清200~400mL，鲜酵母浸出汁10~20mL，磷酸盐缓冲液600mL，青霉素200~1000万单位，0.4%酚红3.5mL，用 10g/L NaOH 调 pH 值为 7.4 ~7.6。固体培养配方:在液体培养基中添加Noble Agar。2.3血清学特性用代谢抑制试验鉴定，接种到加有抗猪肺炎支原体血清的液体培养基中，在37°C下培养10日，与培养基对照相比不变色。2.4毒力将菌株培养物经气管内注射7~15日龄健康易感5mL，28日后剖检，可见接种猪肺部出现典型的猪支原体肺炎病变。2.5免疫原性按本专利技术制成疫苗，肌肉注射免疫7~15日龄健康易感猪，14日后再加强免疫；首免35日后，连同条件相同的对照猪，用猪肺炎支原体Js组织强毒气管内注射攻毒，攻毒28日后剖检，可`见免疫猪可显著减少猪支原体肺炎肺病变。3生产菌种的制备取猪肺炎支原体NJ株冻干菌种，用液体培养基稀释后，接种固体培养基，在37°C下培养3~10日，选择生长良好的菌落，纯粹检验合格后，作为一级种子。再取一级种子接种液体培养基，在37°C下培养3~7日后pH值降为6.本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株猪支原体肺炎疫苗株，其分类命名为猪肺炎支原体（Mycoplasma?hyopneumoniae），菌株号为NJ，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC?NO:M2012286，保藏日期：2012年7月16日。
【技术特征摘要】
1.一株猪支原体肺炎疫苗株，其分类命名为猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae),菌株号为N...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘茂军，邵国青，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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