本发明专利技术提供在抗体微阵列系统中识别异嗜性抗体干扰的方法，主要是在制作抗体微阵列芯片时，增加异嗜性抗体识别点。这个识别点的抗体是由各种指标的固相抗体的相似物组成。通过对具有统计学意义数量的样品进行检测后建立异嗜性抗体阳性干扰的判断标准，根据该标准判断以后的针对同种指标的临床样品是否存在异嗜性抗体阳性干扰。该方法是在不增加现有的工作量和试剂的情况下，对异嗜性抗体进行识别；不需要对每一份样品都添加阻断剂，节省了很多的阻断剂的用量，因此可以降低成本并减少未知的干扰；同时可以通过生物芯片阅读仪自动识别，客观判断，而不需要对病人的临床症状进行分析。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及在抗体微阵列系统中识别异嗜性抗体干扰的方法及应用其检测目标 抗原的抗体微阵列芯片。
技术介绍
分析病人血清中的多种蛋白质从而指导诊断、治疗和预后，促进了蛋白质并行分 析方法的发展(Expert Rev Mol Diag 2007 ；7 =87-98.) 0这种多种蛋白并行分析的方法称 为蛋白质芯片，蛋白质微阵列芯片等。目前的多指标分析方法主要是基于传统的免疫学原 理，将抗原或抗体以阵列的形式固定在固相表面，与血清中的相应的靶物质特异性的结合， 并与标记的抗体相结合，标志物能够被蛋白质芯片阅读仪拍摄或扫描，计算机软件对扫描 或拍摄的结果进行分析，得出各种蛋白质的分析结果。多指标分析的方法可以用于早期诊 断、鉴别诊断、疾病分期以及预后(Clin chem_56 :2，186，2010)。到目前为止主要应用的是 抗体微阵列芯片技术。除了蛋白质芯片本身遇到的新的技术挑战，传统的免疫学方法所遭 遇的很多技术问题，也必将在蛋白质芯片中体现，如异嗜性抗体的干扰。异嗜性抗体存在于血清中，能够与动物来源的免疫球蛋白结合，从而干扰基于双 抗体夹心法的免疫学检测(Clin chem. 34/1，27-33，1988)。在血清中如果不存在被检测的 特异性抗原，而存在这种能够结合动物(尤其是小鼠)免疫球蛋白的抗体，就会导致假阳性 的结果(Lancet 1980 ；ii :1136，clin chem. 1986 ；32 :476，1986 ；32 :1491，1987 ；33 414)。目前临床实验室和诊断试剂生产厂商普遍采取了好多措施来警示这种异嗜性抗 体的存在，并采用相应的封闭方法。这些方法包括1)采用其他的方法作对照，是否出现结 果的差异(Clin chem. 2000 ；46 :1037，clin chem. ；1999 ；45 :942，Ann clin bio 1999 ； 36:704-21) ；2)对血清样品进行系列稀释，看信号是否呈现线形(clin chem. ； 1999 ；45 942, Ann clin bio 1999;36:704-21) ；3)用特殊的试剂筛选血清中是否存在抗小鼠的抗 体(clin chem. ；1999 ;45 :942，)，或者用封闭试剂对样品进行预处理(clin chem. 2001 47 1332,clin chem. 1998 44 1942)。但是以上各种方法不能完全消除异嗜性抗体的影响。如 果要对每一分血清进行筛选和封闭，存在工作量翻备，试剂成本提高的问题。并且由于异嗜 性抗体干扰的多样化，以及各种产品所使用的抗体不同，目前尚未有一种方法可以有效的 消除所有的异嗜性抗体的干扰。在抗体微阵列系统中，一个产品中通常含有十几到二十几对单克隆抗体。被异嗜 性抗体干扰的几率要比普通的免疫学检测产品要高的多。对每个抗体进行人源化改造是不 可行的。对每一份血清在检测前进行预处理工作量会很大，如PEG处理。根据我们通常的 经验是在每一份血清中添加阻断剂如HBR或mac33，大部分的样品中的干扰会被消除，但是 剩余的一些顽固的样品中的干扰就很难判断是异嗜性抗体干扰还是指标的真阳性，对于一 个肿瘤这种致死的疾病来说，肿瘤指标的假阳性所造成的负担应该尽可能的避免。因此需 要建立一种对异嗜性抗体识别的有效机制，尽可能的减少假阳性的产生。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于克服上述现有的方法不能完全消除异嗜性抗体的影响或 不能有效识别异嗜性抗体的缺陷，提供在抗体微阵列系统中识别异嗜性抗体干扰的方法。在抗体微阵列系统中识别异嗜性抗体干扰的方法，包括以下步骤(1)根据检测疾病的类型制备的抗体微阵列芯片的预定组成，对所有需要固相化 的抗体进行免疫球蛋白的型和亚型的鉴定；(2)根据步骤(1)的鉴定的所有抗体的型和亚型的种类，选择所有抗体的型和亚 型的种类相同的多种与固相化抗体、被检测的抗原、酶标抗体不发生交叉反应的单克隆抗 体进行组合得到混合物(mixture monoclonal antibodies，简称MMAB)；(3)在抗体微阵列芯片的制备过程中，在每一个检测阵列内均设置增加一个用于 对照控制的识别异嗜性抗体干扰的识别点，所述识别点中的点样样品为步骤(2)的混合 物；(4)取步骤(3)制作完成的抗体微阵列芯片检测系统(包括标准品和酶标二抗，以 及相关各种试剂)检测若干份血清。将每一份血清分成两份，在其中的一份血清中添加所 述步骤(2)的混合物，另一份血清中不添加所述步骤(2)的混合物，对所述血清采用生物芯 片阅读仪进行检测，当有血清在添加所述步骤(2)的混合物后出现阳性指标转阴的结果则 该样品判断为异嗜性抗体干扰阳性，去除异嗜性抗体阳性干扰的血清，对剩余血清的识别 点进行读数，根据检测结果取单侧99%可信限的读数为判断血清是否存在异嗜性抗体干扰 的标准临界值；(5)采用步骤⑷的标准临界值判断检测临床样品，当临床样品的识别点读数高 于所述标准临界值，则该血清被判断为异嗜性抗体干扰阳性。优选地，所述步骤(1)中的所 使用的固相化抗体均为单克隆抗体。优选地，所述步骤(2)中的不相关单克隆抗体的品种数量为1种以上，优选为10 种以上。优选地，所述步骤(3)中在识别点中各种单克隆抗体样品为等量混合。优选地，所述步骤(4)中的在其中一份血清中添加所述步骤(2)的单克隆抗体混 合物的量为按体积比5% (ν/ν) 0本专利技术的另一个目的在于提供一种采用上述方法检测目标抗原的抗体微阵列芯 片，所述抗体微阵列中含有识别异嗜性抗体的识别点。抗体微阵列系统的优势就是信息量大，指标之间能够互相参考。本专利技术提供了一 种完全不同于传统免疫学检测方法里消除异嗜性抗体干扰的方法，可以有效、低成本、简单 的对异嗜性抗体进行识别，然后进行阻断。本专利技术的异嗜性抗体识别点的抗体是由各种指 标的固相抗体的相似物组成，类似于质量控制点。通过对具有统计学意义数量的样品进行 检测后建立异嗜性抗体阳性干扰的判断标准，根据该标准判断以后的针对同种指标的临床 样品是否存在异嗜性抗体阳性干扰。与现有技术相比，本专利技术所述在抗体微阵列系统中识 别异嗜性抗体干扰的方法，是在不增加现有的工作量和试剂的情况下，对异嗜性抗体进行 识别；不需要对每一份样品都添加异嗜性抗体阻断剂，与各种阻断剂相比，对已经识别的少 量干扰阳性样品添加的所述多种不相关单克隆抗体的费用非常低，因此可以降低成本并减少未知的干扰；同时可以通过生物芯片阅读仪自动识别，客观判断，而不需要对病人的临 床症状进行分析。附图说明图1为实施例的抗体点样方阵示意图。图2显示了各种异嗜性抗体干扰阳性样品的不同表现形式的检测图示。图3显示了干扰阳性样品在加了 MMAB阻断剂以后出现各个指标从假阳性恢复为 阴性的对照图像。 图4为实施例的400份血清样品中每份样品的MMAB点的读数分布图。图5显示了实施例的第657号健康体检血清在不添加阻断剂、添加(V/V)阻断 剂、添加5% (V/V)阻断剂的检测结果。图6显示了实施例的P24号血清样品在添加MMAB阻断剂前后的检测结果对照。具体实施例方式基本原理1、双抗体夹心法原理将特异性抗体包被于固相载体上，形成固相抗体；加入含待测抗原的样品，使之与本文档来自技高网...
【技术保护点】
在抗体微阵列系统中识别异嗜性抗体干扰的方法，其特征在于，包括以下步骤：（１）根据需检测疾病的类型制备的抗体微阵列芯片的预定组成，对所有需要固相化的抗体进行免疫球蛋白的型和亚型的鉴定；（２）根据步骤（１）的鉴定的所有抗体的型和亚型的种类，选择与所有抗体的型和亚型的种类相同的多种与固相化抗体、被检测抗原、酶标抗体不交叉反应的单克隆抗体进行组合，得到混合物；（３）在抗体微阵列芯片的制备过程中，在每一个检测阵列内均设置增加一个用于对照控制的识别异嗜性抗体干扰的识别点，所述识别点中的点样样品为步骤（２）的混合物；（４）取步骤（３）制作完成的抗体微阵列芯片检测系统检测若干份血清，将每一份血清分成两份，在其中的一份血清中添加所述步骤（２）的混合物，另一份血清中不添加所述步骤（２）的混合物，对所述血清进行免疫学检测，当有血清在添加所述步骤（２）的混合物后出现阳性指标转阴的结果则该样品判断为异嗜性抗体干扰阳性，去除异嗜性抗体阳性干扰的血清，对剩余血清的识别点进行读数，根据检测结果取单侧９９％可信限的读数为判断血清是否存在异嗜性抗体干扰的标准临界值；（５）采用步骤（４）的标准临界值判断检测临床样品，当临床样品的识别点读数高于所述标准临界值，则该血清被判断为异嗜性抗体干扰阳性。...
【技术特征摘要】
在抗体微阵列系统中识别异嗜性抗体干扰的方法，其特征在于，包括以下步骤(1)根据需检测疾病的类型制备的抗体微阵列芯片的预定组成，对所有需要固相化的抗体进行免疫球蛋白的型和亚型的鉴定；(2)根据步骤(1)的鉴定的所有抗体的型和亚型的种类，选择与所有抗体的型和亚型的种类相同的多种与固相化抗体、被检测抗原、酶标抗体不交叉反应的单克隆抗体进行组合，得到混合物；(3)在抗体微阵列芯片的制备过程中，在每一个检测阵列内均设置增加一个用于对照控制的识别异嗜性抗体干扰的识别点，所述识别点中的点样样品为步骤(2)的混合物；(4)取步骤(3)制作完成的抗体微阵列芯片检测系统检测若干份血清，将每一份血清分成两份，在其中的一份血清中添加所述步骤(2)的混合物，另一份血清中不添加所述步骤(2)的混合物，对所述血清进行免疫学检测，当有血清在添加所述步骤(2)的混合物后出现阳性指标转阴的结果则该样品判断为异嗜性抗体干扰阳性，去除异嗜性抗体阳性干扰的血清，对剩余血清的识别点进行读数，根据检测结果取单侧99％...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨小丽，季海鹏，林晓琳，
申请(专利权)人：上海铭源数康生物芯片有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。