嗜异性抗体免疫传感器干扰的改善制造技术

本发明专利技术涉及用于减少分析物免疫测定中来自嗜异性抗体的干扰的方法和设备。在一个实施方式中，本发明专利技术涉及包括下列步骤的方法：(a)通过使干试剂溶解到生物学样品中以产生至少约20μg/mL的非人IgM浓度或等同的片段浓度，而用非人IgM或其片段修正所述生物学样品(例如全血样品)；和(b)在所述经修正的样品上进行电化学免疫测定以确定所述样品中所述分析物的浓度。优选地，除IgM或其片段之外，还用IgG或其片段修正所述样品。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在用于确定液体样品中分析物的存在或浓度的设备和方法中，减少或消除嗜异性抗体免疫传感器干扰。特别地，本专利技术涉及通过用Y球蛋白(例如IgM)及其片段修正生物学样品而减少或消除嗜异性抗体免疫传感器干扰。
技术介绍
在生物学样品上就目的分析物进行了众多的实验室免疫测试，用于诊断，筛选，疾病分期，法医分析，怀孕测试，药物测试和其它原因。虽然少数定性测试(例如怀孕测试) 被简化至简单的试剂盒用于患者在家使用，大多数定量测试仍然需要经过训练的技术人员在实验室环境中使用复杂装置的专门技术。实验室测试增加分析的成本并延迟结果。在许多情况下，延迟对于患者的病况或预后可以是有害的，例如对于表明心肌梗塞和心脏衰竭的标记物的分析。在这些以及类似的关键性情形中，以即时护理(point-of-care)准确、不昂贵并以最少的延迟进行此类分析是有利的。例如，两点免疫测定(也称为夹心型免疫测定，其通常被用于确定生物学测试样品中分析物的浓度)被用于即时护理分析物检测系统中，所述系统由AbbottPoint-of-care Inc.开发为i一Stat 系统。在典型的两点式酶联免疫吸附测定(ELISA)中，一种抗体结合到固体支持物上以形成“经固定的抗体”，而第二种抗体与产生信号的试剂(例如酶)缀合或结合以形成“信号抗体”。与含有待测量分析物的样品反应后，所述分析物被“夹”在经固定的抗体与信号抗体之间。洗掉样品和任何非特异性结合的试剂后，测量余留在固定支持物上的信号抗体的量，其应当与样品中分析物的量成比例。已描述了许多类型的免疫测定设备和方法。Lauks在U. S. Pat. No. 5，096，669中公开了一种用于成功测量血液样品中的分析物的一次性感应设备。Davis等人在U. S. Pat. Nos. 5，628，961和5，447，440中公开了其它的、用于凝固时间设备。这些设备采用了读取装置和适合于所述读取装置的盒，用于关于时间测量血液样品中分析物的浓度和粘性变化的目的。U. S. Pat. Nos. 5，096，669 ；5, 628，961和5，447，440在此以其全部通过引用而并入。电化学检测(其中分析物的结合直接或间接引起接近电极的电活性物种的活性变化)也被应用于了免疫测定。关于电化学免疫测定的综述，参见Laurell等人，Methods in Enzymology,vol. 73, Electroimmunoassay ,Academic Press,New York,339,340, 346-348(1981)。对于在受限的空间中构造多层的感应器结构而言，精密加工技术(例如光刻法和等离子体沉积)是有吸引力的。Cozzette等人的U. S. I^at. No. 5，200，051中公开了用于电化学免疫传感器精密加工的方法(例如在硅基质上)，在此以其全部通过引用而并入。 这些包括分配方法，用于将生物学试剂(例如抗体)附着于表面的方法(包括光形成层(photoformed layer)和微颗粒乳胶)，以及用于进行电化学测定的方法。在电化学免疫传感器中，分析物与其相应抗体的结合使电极处的电活性物种产生活性变化，所述电极保持合适的电化学势以引起所述电活性物种的氧化或还原。有许多用于满足这些条件配置。例如，电活性物种可被直接附着至分析物，或者抗体可被共价地附着至酶，所述酶由无电活性的底物产生电活性物种，或者破坏电活性的底物。关于电化学免疫传感器的综述，参见 M. J. Green(1987)Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 316 135-142。差示电流测量的概念是电化学领域公知的，参见例如Cozzette所共有的 U. S. Pat. No. 5，112，455。此外，差示电流传感器组合的一个版本公开于Cozzette所共有的U. S. I^at. No. 5，063，081中。此专利还公开了将选择性渗透层用于电化学传感器以及将形成膜的乳胶用于固定生物活性分子，将所述专利在此通过引用而并入。U. S. I^t. No. 6, 030, 827中描述了聚乙烯醇(PVA)在感应器制造中的应用，在此通过引用而并入。 Vikholm(U. S. 2003/0059954A1)教导了直接附着于具有排斥生物分子的涂层(例如PVA)的表面的抗体，所述表面在抗体之间的间隙中，而Johansson (U. S. Pat. No. 5，656，504)教导了其上固定有抗体的固相(例如PVA)。U. S. Pat. Nos. 6，030，827和6，379，883教导了用于使聚乙烯醇层形成图样的方法，并且以其全部通过引用而并入。US 20060160164描述了具有免疫参照电极的免疫测定设备，US20050054078描述了具有改善的样品闭合的免疫测定设备，US20040018577描述了多个混合免疫测定，且US 20030170881 (作为US7，419，821被授权)描述了用于分析物测量和免疫测定的装置和方法，这些都是共同所有的并且在此通过引用而并入。关于电流测量，有数种本领域已知的用于减少信号的非法拉第组分的重要性因而增加灵敏度的手段。这些包括较新的电化学方法(例如使用方波伏安法代替计时电流法) 和化学手段(例如烷基硫醇试剂)来钝化电极表面。然而，常规测定构造的一个限制是易于受到由可能存在于测试样品中的嗜异性抗体弓I起的干扰。参见，例如 L. Kricka, Human Anti-Animal Antibody Interferences in Immunological Assays，” Clinical Chemistry 45 :7，第 942—956 页(1999)。商业的免疫测定中所采用的抗体在许多情况下是在动物中或动物来源的介质中制备的或“产生的”。此外，许多个体具有天然存在的、动物蛋白的非特异性抗体，其为可结合至免疫测定中所采用的动物抗体试剂的“内源性抗体”，导致错误的结果。例如，能够结合一种或多种测定试剂的内源性抗体造成产生错误测试结果的可能性其通过交联所述试剂而导致假阳性结果或通过掩蔽(sequester)所述试剂而导致假阴性结果。已发现，例如用放射标记的鼠单克隆抗体进行的癌症治疗可导致在患者中产生人抗小鼠抗体(HAMA)。随后显示了 HAMA存在于取自那些患者的血清样品中，可引起在夹心型酶免疫测定中用于癌症标记物的试剂鼠单克隆抗体的交联(Boscato等人，Heterophile antibodies :A problem for all immunoassays, Clin Chem 34,27-33,1988)。此夕卜， Nicholson 等人(Immunoglobulin inhibiting reagent (IIR) -Evaluation of a new method for eliminating spurious elevation in CA125 caused by HAMA, Intl J Biol Markers 11，46-49，1996)显示了使用 IIR(Bioreclamation Inc, NY)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.03.25 US 12/411,3251.在分析物免疫测定中减少来自嗜异性抗体的干扰的方法，其包括(a)通过使干试剂溶解到全血样品中以产生至少20μ g/mL的非人IgM浓度或等同的片段浓度，而用非人IgM或其片段修正所述样品；和(b)在经修正的样品上进行电化学免疫测定以确定所述样品中所述分析物的浓度。2.权利要求1的方法，其还包括(c)用IgG或其片段修正所述全血样品。3.权利要求2的方法，其中用IgM修正所述全血样品。4.权利要求2的方法，其中用IgMF(ab' ) 2片段修正所述全血样品。5.权利要求2的方法，其中用IgMFab片段修正所述全血样品。6.权利要求2的方法，其中用IgMFc片段修正所述全血样品。7.权利要求2的方法，其中所述分析物为心血管标记物。8.权利要求2的方法，其中所述免疫测定是用于选自下列的分析物TnI，TnT，CKMBJ^ 红蛋白，BNP，NT-proBNP 和 proBNP。9.权利要求2的方法，其中以约1分钟至约30分钟范围内的预先确定的时间段修正所述样品。10.权利要求2的方法，其中所述干试剂还包含选自下列的组分缓冲剂、盐、表面活性剂、稳定剂、简单碳水化合物、复杂碳水化合物和它们的组合。11.权利要求2的方法，其中所述非人IgG和IgM是鼠的，羊的或其组合。12.权利要求2的方法，其中所述电化学免疫测定为酶联夹心免疫测定。13.权利要求2的方法，其中所述电化学免疫测定是由免疫传感器进行的。14.权利要求2的方法，其中所述电化学免疫测定是由免疫传感器和免疫参照传感器进行的。15.权利要求2的方法，其中所述干试剂还包含抗所述分析物的、经酶标记的抗体。16.权利要求2的方法，还包括(d)通过使包含抗所述分析物的经酶标记的抗体的第二干试剂溶解到所述经修正的样品中，而用所述经酶标记的抗体修正所述经修正的样品，其中所述第二干试剂与含有所述 IgM或其片段的干试剂是分离的。17.权利要求2的方法，其中在电极上用抗所述分析物的经固定的抗体进行所述电化学测定。18.权利要求2的方法，其中所述经修正的样品还包含抗所述分析物的经酶标记的抗体，并且与抗所述分析物的经固定的抗体接触以在所述经固定的抗体和经标记的抗体之间形成所述分析物的夹心，所述方法还包括下述步骤将所述样品清洗至废料室，和使所述夹心暴露于能够与所述酶反应以形成能够被电化学检测的产物的底物。19.权利要求2的方法，其中在患者即时护理时进行所述方法。20.权利要求2的方法，其中所述电化学免疫测定为酶联免疫吸附测定。21.权利要求2的方法，其中在包括下列的盒中进行所述免疫测定免疫传感器、导管、 样品入口和样品保留室。22.权利要求21的方法，其中所述样品入口、所述样品保留室、所述导管和所述免疫传感器的至少一个的至少一部分被所述干试剂涂覆。23.权利要求2的方法，其中所述干试剂还包含所述非人IgG。24.权利要求23的方法，其中所述分析物为Tnl，并且其中使所述干试剂溶解到样品中以给出约20 μ g/mL至约200 μ g/mL的IgM浓度和约50 μ g/mL至约5000 μ g/mL的IgG浓度。25.权利要求23的方法，其中所述分析物为Tnl，并且其中使所述干试剂溶解到样品中以给出约20 μ g/mL至约60 μ g/mL的IgM浓度和约500 μ g/mL至约1000 μ g/mL的IgG浓度。26.权利要求23的方法，其中所述分析物为BNP，并且其中使所述干试剂溶解到样品中以给出约20 μ g/mL至约200 μ g/mL的IgM浓度和约50 μ g/mL至约5000 μ g/mL的IgG浓度。27.权利要求23的方法，其中所述分析物为BNP，并且其中使所述干试剂溶解到样品中以给出约20 μ g/mL至约60 μ g/mL的IgM浓度和约500 μ g/mL至约1000 μ g/mL的IgG浓度。28.在心肌肌钙蛋白I免疫测定中减少来自嗜异性抗体的干扰的方法，其包括(a)用包含下列的混合物修正全血样品⑴非人IgG或IgG片段，和(ii)非人IgM或 IgM片段，其足以实质上掩蔽所述样品中的任何嗜异性抗体，其中经修正的样品中非人IgM 的浓度为至少约20 μ g/mL或等同的IgM片段浓度；和(b)在经修正的样品上进行电化学免疫测定。29.在脑利钠肽免疫测定中减少来自嗜异性抗体的干扰的方法，其包括(a)用包含下列的混合物修正样品(i)非人IgG或IgG片段，和(ii)非人IgM或IgM 片段，其足以实质上掩蔽所述样品中的任何嗜异性抗体，其中经修正的样品中非人IgM的浓度为至少约20 μ g/mL或等同的IgM片段浓度；和(b)在经修正的样品上进行电化学免疫测定。30.用于以减少的来自嗜异性抗体的干扰，在血液样品中进行分析物的免疫测定的设备，其包括壳体、电化学免疫传感器、导管和样品入口，其中所述导管允许血液样品从入口通过至所述免疫传感器，并且其中所述壳体、所述入口和所述导管中的至少一个包括包含非人IgM或其片段和任选地IgG或其片段的干试剂，所述干试剂能够溶解到所述血液样品中以产生至少约20 μ g/mL的IgM浓度或等同的片段浓度，并且实质上掩蔽所述样品中的任何嗜异性抗体。31.权利要求30的设备，其中所述干试剂包含非人IgM或其片段以及IgG或其片段。32.权利要求31的设备，其还包括用于...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·L·E·坎贝尔，J·E·奥马科，
申请(专利权)人：雅培医护站股份有限公司，
类型：发明
国别省市：