一种具有肠屏障保护功能的五肽制造技术

本发明专利技术公开了一种具有肠屏障保护功能的五肽

【技术实现步骤摘要】
metabolites》
中报道了从沙蛰蛋白酶解液中获得的活性肽
PKKVV
在
DSS
诱导结肠炎小鼠模型中具有修复肠上皮屏障损伤
、
靶向作用于
ZO
‑1的作用
。
[0006]金枪鱼为大洋性下层鱼类，具有高蛋白
、
低脂肪等特点，是非常值得推广的水产资源
。
金枪鱼蛋白是制备生物活性肽的良好来源
。
目前，已经发现并评估了金枪鱼多肽具有抗氧化
、
降血压
、
抗糖
、
减肥和降尿酸等功能
。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种筛选自金枪鱼酶解液
、
具有肠屏障保护功能
、
可以应用于肠屏障保护功能食品和慢性结肠炎缓解
/
治疗药物中的五肽
LK5。
[0008]为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：一种具有肠屏障保护功能的五肽
LK5
，所述五肽
LK5
的氨基酸序列为
LERAK
，如序列表
SEQ ID NO
：3所示
。
[0009]前述具有肠屏障保护功能的五肽
LK5
在肠屏障保护功能食品或慢性结肠炎缓解
/
治疗药物中的应用
。
[0010]当前述具有肠屏障保护功能的五肽
LK5
应用在慢性结肠炎缓解<br/>/
治疗药物中时，所述五肽
LK5
通过固相合成获得，固相合成方法具体如下：采用
Fmoc
固相合成策略，以
Fmoc
保护的氨基酸为原料，选用聚苯乙烯树脂作为固相载体，按照亮氨酸
‑
谷氨酸
‑
精氨酸
‑
丙氨酸
‑
赖氨酸的顺序，使肽链从
C
端向
N
端延伸，固相合成五肽
LK5。
[0011]当前述具有肠屏障保护功能的五肽
LK5
应用在肠屏障保护功能食品中时，所述五肽
LK5
通过酶解金枪鱼获得，酶解金枪鱼的方法具体如下：（1）取金枪鱼鱼肉，按照
0.5
％的酶底比加入复合酶进行酶解，酶解温度为
55℃
，
pH
值为8，酶解时间为
6h
，得到酶解产物，其中，所述复合酶由碱性蛋白酶和中性蛋白酶按照
1:1
的质量比混合而成；（2）酶解结束后，用八层纱布对酶解产物进行过滤，去除残渣，得到澄清的多肽酶解液；（3）冻干上述多肽酶解液，得到金枪鱼肽样品，所述金枪鱼肽样品中含有较多的五肽
LK5。
[0012]本专利技术的有益之处在于：本专利技术得到的肠屏障保护五肽
LK5
从金枪鱼酶解液中提取得到，与紧密连接蛋白1（
ZO
‑1）具有潜在相互作用，能显著降低结肠炎模型小鼠的炎症反应
、
增加肠屏障功能蛋白表达
、
保护和缓解因建模药物导致的小鼠肠道屏障损伤，可以有效地用于肠屏障保护功能食品和慢性结肠炎缓解
/
治疗药物中
。
附图说明
[0013]图1是小鼠疾病活动指数（
DAI
）变化情况图；图2是小鼠体重增量情况图；图3是小鼠结肠长度统计图；图4是小鼠血清炎症因子含量情况图，其中，
A
是小鼠血清
TNF
‑
α
含量情况图，
B
是小鼠血清
IL
‑1β
含量情况图，
C
是小鼠血清
IL
‑
10
含量情况图，
D
是小鼠血清
IL
‑
22
含量情况图；图5是小鼠结肠组织中炎症因子基因转录情况图，其中，
A
是基因
tnf
‑
α
转录情况
图，
B
是基因
il
‑1β
转录情况图，
C
是基因
il
‑
10
转录情况图，
D
是基因
il
‑
22
转录情况图；图6是小鼠结肠组织中肠屏障功能蛋白表达情况图
。
具体实施方式
[0014]以下结合附图和具体实施例对本专利技术作具体的介绍
。
[0015]一
、
制备金枪鱼肽样品将碱性蛋白酶和中性蛋白酶按照
1:1
的质量比混合，得到复合酶
。
[0016]取金枪鱼鱼肉，按照
0.5
％的酶底比加入复合酶进行酶解，酶解温度为
55℃
，
pH
值为8，酶解时间为
6h。
[0017]酶解结束后，用八层纱布对酶解产物进行过滤，去除残渣，得到澄清的多肽酶解液
。
[0018]冻干上述多肽酶解液，得到金枪鱼肽样品
。
[0019]二
、
获得金枪鱼肽样品中的多肽序列将前面得到的肽样品采用
LC
‑
MS/MS
进行质谱测定，质谱测定的结果采用质谱分析软件进行分析，获得若干多肽序列
。
[0020]LC
‑
MS/MS
测定条件为：（1）液相方法：色谱柱为
C18
，3μ
m
，
250mm
×
75
μ
m
（
Eksigent
），
A
相为水，
0.1%
甲酸；
B
相为乙腈，
0.1%
甲酸，流速为
300nL/min
，进样体积为4μ
L
，
60min
色谱梯度，具体洗脱梯度为：0‑
48min
，
A
相从
95%
均匀减少到
60%
；
48
‑
55min
，
A
相从
60%
均匀减少到
30%
，
55
‑
56min
，
A
相从
30%
均匀减少到0；
56
‑
60min
，保持
0%A
相
。
[0021]（2）质谱方法：
Orbitrap Exploris 480
（
Thermofisher
），正离子检测模式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种具有肠屏障保护功能的五肽
LK5
，其特征在于，所述五肽
LK5
的氨基酸序列为
LERAK
，如序列表
SEQ ID NO
：3所示
。2.
权利要求1所述的具有肠屏障保护功能的五肽
LK5
在慢性结肠炎缓解
/
治疗药物中的应用
。3.
根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述五肽
LK5
通过固相合成获得
。4.
根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述五肽
LK5
的固相合成方法具体如下：采用
Fmoc
固相合成策略，以
Fmoc
保护的氨基酸为原料，选用聚苯乙烯树脂作为固相载体，按照亮氨酸
‑
谷氨酸
‑
精氨酸
‑
丙氨酸

【专利技术属性】
技术研发人员：秦松，解桂珍，芦晨阳，李文军，刘超，张启华，孟鹏飞，
申请(专利权)人：烟台嘉惠海洋生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：