【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术属于植物分子生物学
,与植物转基因技术有关。专利技术目的本专利技术的目的在于克服已有技术的不足,建立一种快速获得棉花转基因植株的方法,利用该方法对棉花转基因植株进行早期快速鉴定,筛选所需要的棉花转基因植株。采用以下技术步骤(1)取棉花下胚轴,消毒,或制备无菌下胚轴切段,创造切口,将生长到对数期的农杆菌侵染10-15min,吸干菌液,共培2-3天;(2)将步骤(1)所述的材料转入加有1mg/L烟酸,20mg/L维生素B1,2mg/L维生素B6,30g/L葡萄糖,头孢噻胯(cefotaxim)和卡那霉素或加头孢噻胯和潮霉素(Hggromycin),0.1mg/L 2,4-D,0.1mg/L kinetin的MSB5培养基上进行选择培养6-8周;(3)通过荧光体视显微镜观察步骤(2)中材料的绿色荧光蛋白基因(GFP)或GUS基因的表达;(4)将步骤(3)中得到的材料在去除植物激素的改良MSB5培养基上再生培养8-12周;(5)将步骤(4)所得到的材料转移到生根培养基上诱导生根,然后移栽至田间,或将步骤(4)得到的材料嫁接到具有1-2片真叶的棉苗上;(6)将步骤(5)得到的材料进行田间鉴定。将10-50mg/L卡那霉素,或5U/L潮霉素加入到选择转化体培养基上,通过荧光显微镜观察转化体中GFP基因或GUS基因表达,快速鉴定转化体。将转基因苗转移到加有0.1mg/L IAA,0.1mg/L,,kinetin,0.1mg/L赤霉酸(GA3)的Hsu生根培养基上培养,生根后的小苗再转移到灭菌的花房土中栽培。或者,将组织培养所获得的材料通过嫁接到1-2片真叶 ...
【技术保护点】
一种快速获得棉花转基因植株的培育方法,含有MS和B5培养基,其特征在于,所述的培养基采用改良的MSB5培养基,该培养基添加有维生素B1、B6、烟酸以及植物生长激素,将无菌棉花下胚轴切段在所述的培养基上培养,通过直接诱导芽生成而不是通过诱导胚状体生成的途径,获得转基因棉花植株。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种快速获得棉花转基因植株的培育方法,含有MS和B5培养基,其特征在于,所述的培养基采用改良的MSB5培养基,该培养基添加有维生素B1、B6、烟酸以及植物生长激素,将无菌棉花下胚轴切段在所述的培养基上培养,通过直接诱导芽生成而不是通过诱导胚状体生成的途径,获得转基因棉花植株。2.根据权利要求1所述的快速棉花转基因植株的培育方法,其特征在于,采用以下技术步骤(1)取棉花下胚轴,消毒,或制备无菌下胚轴切段,创造切口,将生长到对数期的农杆菌侵染10-15min,吸干菌液,共培2-3天;(2)将步骤(1)所述的材料转入加有1mg/L烟酸,20mg/L维生素B1,2mg/L维生素B6,30g/L葡萄糖头孢噻胯(cefotaxim)和卡那霉素或加头孢噻胯和潮霉素(Hggromycin),0.1mg/L 2,4-D,0.1mg/L kinetin的MSB5培养基上进行选择培养6-8周;(3)通过荧光体视显微镜观察步骤(2)中材料的绿色荧光蛋白基因(GFP)或GUS基因的...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨业华,王学奎,
申请(专利权)人:华中农业大学,
类型:发明
国别省市:83[中国|武汉]
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