能与四氢大麻酚特异性结合的抗体或抗原结合片段及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种能与四氢大麻酚特异性结合的抗体或抗原结合片段及其应用，属于体外诊断与抗体技术领域。所述能与四氢大麻酚特异性结合的抗体或抗原结合片段为鼠源的单克隆抗体，能够应用于胶体金免疫层析的检测产品。本发明专利技术提供的能与四氢大麻酚特异性结合的抗体或抗原结合片段，在进行对THC的检测时，能够消除其他常用药物的干扰，可实现对THC高特异性、高灵敏度的快速检测。高灵敏度的快速检测。高灵敏度的快速检测。

【技术实现步骤摘要】
能与四氢大麻酚特异性结合的抗体或抗原结合片段及其应用


[0001]本专利技术属于体外诊断与抗体
，具体涉及能与四氢大麻酚特异性结合的抗体或抗原结合片段及其应用。

技术介绍

[0002]大麻是一种为桑科一年生草本植物，具有重要的农用及药用价值。大麻可用于治疗疟疾、便秘、疥疮等疾病，具有抗痉挛、消炎、镇痛、止咳等作用。然而，过量吸食大麻会产生幻觉、妄想、自我意识障碍等症状，大麻具有致瘾性。长期食用大麻会导致性情急躁、记忆力减退、免疫力下降、宜患各种疾病，吸食者具有暴力和自杀倾向。
[0003]大麻的主要成分有四氢大麻酚(THC)、大麻萜酚(CBG)、大麻二酚(CBD)、四氢大麻酚酸等，其中THC在吸食或口服后具有麻醉和致幻作用，具有成瘾性。THC是大麻中的主要精神活性物质，被列入第一类精神药品品种目录管制，其分子结构如下：
[0004][0005]检测样品中THC常用的初筛方法有液相色谱法(HPLC)、气相色谱
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质谱法(GC/MS)、酶联免疫分析法、胶体金免疫层析技术(GICA)等，其中HPLC和GC/MS测试都必须在实验室完成，需要设备并由专业技术人员操作，费用昂贵。酶联免疫分析法在灵敏度和特异性方面具有很大的优点，但操作复杂、耗时，必需专业技术人员操作。胶体金免疫层析法具有操作简单、结果准确、灵敏度和特异性较高等优点，非常适合对大批量样品进行现场筛查工作。
[0006]目前胶体金检测THC主要针对尿液检测，尿液检测取样不便，须有专门的取尿场所；另外尿液取样容易掺假、掉包，须有人对取样者进行监督取尿；由此造成检测结果不准确及人力不足。
[0007]因此，亟需开发一种取样方便、操作简单、灵敏度高、特异性高的新检测产品，并能够实现对大批量样品进行快速检测。

技术实现思路

[0008]针对现有技术的不足，本专利技术的第一个目的是提供一种能与四氢大麻酚(THC)特异性结合的抗体或抗原结合片段，能够特异性识别THC，具有较好的亲和力、特异性及活性。
[0009]一种能与THC特异性结合的抗体或抗原结合片段，包括重链可变区和轻链可变区，其中：
[0010]轻链可变区CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
[0011]轻链可变区CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
[0012]轻链可变区CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；
[0013]重链可变区CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；
[0014]重链可变区CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；
[0015]重链可变区CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；
[0016]所述能与THC特异性结合的抗体或抗原结合片段轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，重链可变区的氨基酸序列SEQ ID NO:8所示。
[0017]所述能与THC特异性结合的抗体或抗原结合片段轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，重链可变区的核苷酸序列SEQ ID NO:10所示。
[0018]作为优选，所述抗体为单克隆抗体。
[0019]作为优选，所述抗体为鼠源抗体。
[0020]本专利技术的第二个目的是提供一种核酸，所述核酸编码上述抗体或抗原结合片段。
[0021]本专利技术的第三个目的是提供一种含有上述核酸的表达载体。
[0022]本专利技术的第四个目的是提供一种含有上述表达载体的细胞。
[0023]本专利技术的第五个目的是提供上述抗体或抗原结合片段在免疫层析中的应用，能够准确、快速、高灵敏度、高特异性检测样品中是否含有THC。
[0024]本专利技术的第六个目的是提供一种免疫层析检测试剂或试剂盒，所述检测试剂或试剂盒包含上述抗体或抗原结合片段。所述检测试剂或试剂盒可用于检测唾液、尿液、血液样本，具有取样方便、操作简便、灵敏度高及特异性高等优点，并且能够实现对大批量样品进行快速检测。
[0025]本专利技术的有益效果至少在于：
[0026]本专利技术提供了一种能与THC特异性结合的抗体或抗原结合片段，能够特异性识别THC分子结构，不与其他药物交叉反应，通过HEK
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293细胞表达的THC重组单克隆抗体，具有稳定性好、批间差异小、成本低、无动物源性影响等特点。
[0027]本专利技术的THC特异性结合的抗体或抗原结合片段，可以用于制备检测唾液、尿液、血液等样本的胶体金免疫层析试纸，采用所述THC重组单克隆抗体制备的胶体金检测试纸，具有取样方便、操作简便、灵敏度高及特异性高等优点，可快速检测尿液、唾液、血液等样品中是否含有THC，并且能够实现对大批量样品进行快速检测。
附图说明
[0028]图1为本专利技术THC单克隆抗体纯化后的SDS
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PAGE图，其中M：Marker，蛋白标准分子量。
具体实施方式
[0029]为了使本专利技术的目的、技术方案、实验方法及优点更加明确，下面将结合本专利技术的实施例及附图，对本专利技术实施的技术方案进一步详细说明。实施例中如有问标注条件之处，按照实验常规条件或生产厂商说明书的条件进行。所用未注明生产厂商的试剂或实验设备，均为市售购买获得的常规产品。本专利技术实施例中使用的科学术语与所属领域的一般技术员通常理解的含义相同，若有特殊之处会标识说明。
[0030]本专利技术提供能与THC特异性结合的抗体或抗原结合片段，其中：
[0031]轻链可变区CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，具体为：
[0032]SerAlaSerSerSerIleArgSerAsnPhePheHis
[0033]轻链可变区CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，具体为：
[0034]AlaThrSerAsnIleAlaSer
[0035]轻链可变区CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，具体为：
[0036]GlnGlnGlyGlyThrLeuProLeuThr
[0037]重链可变区CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，具体为：
[0038]ArgSerValMetAsn
[0039]重链可变区CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，具体为：
[0040]ThrIleSerProGlyIleAsnThrTyrTyrProGlnSerAlaValLysGly
[0041]重链可变区CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，具体为：
[0042]GlyThrSerGlyThrTyrAlaAspVal
[0043]实施例1：THC免疫小鼠及杂交瘤细胞筛选
[0044]1)动物免疫
[0045]选择6
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8周龄的Balb/c雌鼠，将THC免疫原与弗氏完全佐剂按1:1比例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能与四氢大麻酚特异性结合的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段中：轻链可变区CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；轻链可变区CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；轻链可变区CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；重链可变区CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；重链可变区CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；重链可变区CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。2.根据权利要求1所述的能与四氢大麻酚特异性结合的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述能与四氢大麻酚特异性结合的抗体或抗原结合片段轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，重链可变区的氨基酸序列SEQ ID NO:8所示。3.根据权利要求1所述的能与四氢大麻酚特异性结合的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述能与四氢大麻酚特异性结合的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王冬冬，刘成，任秋曲，夏婉瑶，阮美丽，吴银飞，
申请(专利权)人：杭州傲锐生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：