抗硫氰酸荧光素单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种新的单克隆抗异硫氰酸荧光素(FITC)抗体、包括该抗体的试剂盒、及其相关应用。本发明专利技术的抗FITC抗体表现出针对FITC的高灵敏度和高特异性，能够用于FITC检测，并且可以作为通用指示试剂，通过FITC与其他免疫化学试剂桥联。FITC

【技术实现步骤摘要】
抗硫氰酸荧光素单克隆抗体及其应用
[0001]本申请要求申请日为2022年7月6日、申请号为202210799318.5、专利技术名称为“单克隆抗硫氰酸荧光素抗体及其应用”的中国专利技术专利申请的优先权。


[0002]本专利技术涉及荧光检测领域，并具体地涉及一种抗硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体、包括该抗体的试剂盒及相关应用。

技术介绍

[0003]异硫氰酸荧光素(FITC,Fluorescein Isothiocyanate)是一种荧光染料，能够吸收紫外光或蓝光，使得分子被激发后发出黄绿色光。一旦移除引起分子激发的紫外线或蓝光，黄绿色发光则会立刻停止。FITC的异硫氰酸基团可以与蛋白质的氨基末端或者伯胺反应，因而能够与蛋白质发生偶联，被广泛地用于抗体的标记。
[0004]FITC与抗体偶联后不丧失其抗原结合特异性，FITC偶联的抗体与待测抗原反应形成抗原
‑
抗体复合物，该复合物上带有FITC标记，通过对FITC发光的检测，则可以快速、准确的检测出待测抗原。FITC也易与抗原结合，标记率高，FITC偶联的抗原也同理地可与待测抗体反应，形成抗原
‑
抗体复合物，从而实现对抗体的检测。
[0005]目前现有的FITC抗体在灵敏度、特异性方面上都存在不足，还有较大的改善空间。因此，本领域仍需要一种具有高的特异性和灵敏度FITC抗体。

技术实现思路

[0006]如前所述，本领域需要一种具有高的特异性和灵敏度抗硫氰酸荧光素(FITC)抗体。
[0007]本专利技术人通过以FITC作为半抗原，与大分子载体蛋白偶联后诱导动物产生免疫应答，再利用杂交瘤技术获得既能无限增殖又能分泌抗FITC单抗的杂交瘤细胞株(分别命名为Y3B8
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2C8、Y3G10
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5G5和Y8D7
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6E5，其中Y8D7
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6E5于2022年06月16日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.45186)，最后通过体外转瓶培养的方法收取上清，获得大量的抗FITC单克隆抗体，经筛选得到具有高灵敏度和高特异性的抗FITC抗体。本专利技术的抗FITC抗体不仅能够用于FITC检测，而且可以作为通用指示试剂，将FITC与其他免疫化学试剂桥联。由此，实现了本专利技术。
[0008]在第一方面，本专利技术提供了一种抗硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体，所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:1
‑
3所示的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:10
‑
12所示的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3，其中，SEQ ID NO:1所示序列为GFTFX1X2F，SEQ ID NO:2所示序列为SSDSRT，SEQ ID NO:3所示序列为SRAX3YRSLX4Y，其中X1为S或I，X2为S或T，X3为F或Y，X4为E或D。
[0009]在第二方面，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞于2022年06月16日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.45186。
[0010]在第三方面，本专利技术提供了一种核酸分子，其编码第一方面所述的抗硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体。
[0011]在第四方面，本专利技术提供了一种载体，其包含第三方面所述的核酸分子。
[0012]在第五方面，本专利技术提供了一种表达细胞，其包含第三方面所述的核酸分子或第四方面所述的载体。
[0013]在第六方面，本专利技术提供了一种免疫检测方法，所述方法用于非诊断目的或诊断目的，包括使用第一方面所述的抗FITC单克隆抗体的步骤。
[0014]在第七方面，本专利技术提供了第一方面所述的抗硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体在制备用于免疫检测的检测剂中的用途。
[0015]在第八方面，本专利技术提供了一种试剂盒，其包括第一方面所述的抗硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体以及使用说明。
[0016]综上，本专利技术提供了一种具有高灵敏度和高特异性的抗FITC单克隆抗体。本专利技术的抗FITC抗体能够与FITC发生特异性结合，得到的FITC
‑
抗FITC抗体系统与生物素
‑
链霉亲和素系统具有相似的敏感性和稳定性，可用于放大免疫荧光检测信号。本专利技术的抗FITC抗体通过抗原
‑
抗体反应，可以特异性地结合与FITC偶联的抗体或抗原。由于一个抗FITC抗体可以结合多个FITC，这样可以形成多级放大效应，极大地提高检测、分析的灵敏度。本专利技术的抗体可以用于ELISA检测，细胞捕获、分选和富集，免疫印迹检测，流式检测等。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0018]图1示出了根据本专利技术的一个实施方案制备得到的Ab400、Ab401和Ab402单克隆抗体分别在1.268mg/mL、1.74mg/mL和1.941mg/mL的浓度下的SDS
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PAGE电泳结果，每孔上样8μg。
[0019]图2示出了根据本专利技术的一个实施方案制备得到的单克隆抗体Ab401的竞争抑制曲线。
[0020]图3示出了根据本专利技术的一个实施方案制备得到的单克隆抗体Ab402的竞争抑制曲线。
具体实施方式
[0021]在下文中，将结合附图对本专利技术进行详细的描述。需理解，以下描述仅以示例方式来对本专利技术进行说明，而无意于对本专利技术的范围进行限制，本专利技术的保护范围以随附权利要求为准。并且，本领域技术人员理解，在不背离本专利技术的精神和主旨的情况下，可以对本专利技术的技术方案进行修改。若并未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0022]除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所述主题所
属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在对本专利技术进行详细描述之前，提供以下定义以更好地理解本专利技术。
[0023]在提供数值范围的情况中，例如浓度范围、百分比范围或比率范围，应当理解，除非上下文另有明确规定，否则在该范围的上限与下限之间的、到下限单位的十分之一的各中间值以及在所述范围内的任何其他所述值或中间值包含在所述主题内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括在较小范围中，并且此类实施方案也包括在所述主题内，受限于所述范围中的任何特定排除的极限值。在所述范围包括一个或两个极限值的情况中，排除那些所包括的极本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体，所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:1
‑
3所示的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:10
‑
12所示的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3，其中，SEQ ID NO:1所示序列为GFTFX1X2F，SEQ ID NO:2所示序列为SSDSRT，SEQ ID NO:3所示序列为SRAX3YRSLX4Y，其中X1为S或I，X2为S或T，X3为F或Y，X4为E或D。2.根据权利要求1所述的抗硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体，其中，a)X1为S，X2为S，X3为F，X4为E，并且所述V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3分别由SEQ ID NO：4、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5表示；优选地，所述重链可变区包括SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列；b)X1为S，X2为T，X3为Y，X4为D，并且所述V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3分别由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:7表示；优选地，所述重链可变区包括SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列；或者c)X1为I，X2为T，X3为Y，X4为D，并且所述V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3分别由SEQ ID NO：8、SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：池朗山，游梅香，林育佳，
申请(专利权)人：珠海重链生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：