抗腺病毒单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种新的抗腺病毒(AdV)单克隆抗体、包括该抗体的试剂盒、及其相关应用。本发明专利技术的抗腺病毒单克隆抗体可以特异性结合多种型别的腺病毒的六邻体蛋白，表现出针对腺病毒的高灵敏度和高特异性，能够用于多种型别的腺病毒的检测，并且极大地提高了腺病毒的检测率，降低了检测成本，为呼吸道和消化道的腺病毒的快速检测提供了可行性方案。毒的快速检测提供了可行性方案。毒的快速检测提供了可行性方案。

【技术实现步骤摘要】
抗腺病毒单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，并具体地涉及一种抗腺病毒(AdV)单克隆抗体、包括该抗体的试剂盒及相关应用。

技术介绍

[0002]腺病毒颗粒呈无囊膜球形结构，直径为70～90nm，每个病毒颗粒包含一个36kb的线性双链DNA。腺病毒衣壳呈二十面体对称，由252个直径8～10nm的壳粒组成，其中二十面体顶角壳粒为12个五邻体(penton)，除五邻体外有240个非顶角壳粒，称为六邻体(Hexon)。六邻体带有主要的属和亚属特异性抗原决定簇和次要的种特异性抗原决定簇，可以作为诊断不同血清型的标准。
[0003]腺病毒在自然界分布十分广泛，能感染人的腺病毒有A
‑
G共7个组，目前已知有55个不同的血清型，其中最常见的致病型为1
‑
8型，55型腺病毒是由人11型和14型腺病毒重组产生的新型病毒。
[0004]腺病毒主要通过空气飞沫传播，多数型别的腺病毒也可通过消化道途径传播。腺病毒感染人类后会引发多种疾病，如腺病毒急性上呼吸道感染、腺病毒肺炎、暴发性眼结膜炎、急性出血性膀胱炎及婴幼儿肠胃炎等。腺病毒肺炎约占儿童期肺炎的10％，多见于6个月至2岁的婴幼儿，病情重，是目前导致婴幼儿肺炎死亡和致残的重要原因之一，其中3型和7型是导致婴幼儿腺病毒肺炎主要的型别，55型是引起成人腺病毒社区型肺炎最常见的型别。
[0005]目前诊断腺病毒感染主要有以下方法：病毒分离和血清学鉴定、病毒核酸检测及抗原检测。传统的病毒分离和血清型方法是诊断腺病毒的金标准，但不适于临床早期诊断，病毒核酸检测灵敏度高，但诊断成本较高，实验条件要求严格。针对腺病毒衣壳六邻体的抗原检测，以鼻咽拭子、痰液或粪便为标本，在发病3
‑
5天内即可高效率检测。
[0006]我国地域辽阔，腺病毒呼吸道感染一年四季均可发生。腺病毒感染的型别在时间和空间上呈现复杂化和差异化的流行病特征。不同地区流行的腺病毒优势毒株型别、时间均有所不同，在我国北方以冬春季节多见，而南方以春夏季节更加常见。北方、西北方和南方地区的优势流行株属于HAdV
‑
B组，以3型和7型为主；而东部地区的优势流行株属于HAdV
‑
C组，主要是1型和2型；同时我国南方和北方近年多地均局部发生新型腺病毒55型的感染流行。肠道腺病毒，以F亚群的40型和41型为主，是仅次于轮状病毒的，引起儿童腹泻的第二大原因。
[0007]腺病毒流行型别在地区和时间的差异化，给腺病毒感染的快速诊断带来了不便。目前一种抗体通常只能检测一种型别的腺病毒，所以在检测如咽拭子样本或粪便样本时需要使用多种抗体来提高抗体检测率，提高了检测成本，并且仍存在一定的假阴性概率。
[0008]因此，需要一种能同时检测多种型别、特异性高、灵敏度高的腺病毒检测产品和方法。

技术实现思路

[0009]如前所述，本领域需要一种具有高特异性和高灵敏度且适用于多种型别腺病毒的抗腺病毒抗体。
[0010]考虑到不同型别的腺病毒的六邻体蛋白有很高的保守性(78％～95％)，型别间与组织特异性抗原表位定位于这些保守区域，可能具有一定的抗原性，本专利技术人以六邻体蛋白作为腺病毒感染抗原诊断的靶位点，用3型腺病毒(HAdV3)六邻体蛋白(Hexon)(氨基酸序列为SEQ ID NO:62)免疫小鼠，取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，由ELISA方法筛选出对多种型别的腺病毒的六邻体蛋白均特异结合的杂交瘤细胞株，构建重组抗体，获得靶向腺病毒的六邻体蛋白的重组抗腺病毒抗体。由此，实现了本专利技术。
[0011]因此，在第一方面，本专利技术提供了一种抗腺病毒单克隆抗体，所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中，
[0012]a)所述重链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:22
‑
24所示的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:25
‑
27所示的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3；
[0013]b)所述重链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29所示的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31所示的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3；
[0014]c)所述重链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:32
‑
34所示的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:35
‑
37所示的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3；或者
[0015]d)所述重链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:38
‑
40所示的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:41
‑
43所示的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3。
[0016]在第二方面，提供了一种核酸分子，其编码第一方面所述的抗腺病毒单克隆抗体。
[0017]在第三方面，提供了一种载体，其包含第二方面所述的核酸分子。
[0018]在第四方面，提供了一种表达细胞，其包含第二方面所述的核酸分子或第三方面所述的载体。
[0019]在第五方面，提供了一种检测腺病毒的方法，所述方法用于非诊断目的或者诊断目的，包括使用第一方面所述的抗腺病毒单克隆抗体的步骤。
[0020]在第六方面，提供了第一方面所述的抗腺病毒单克隆抗体在制备用于检测腺病毒的试剂中的用途。
[0021]在第七方面，提供了一种用于检测腺病毒试剂盒，其包括第一方面所述的抗腺病毒单克隆抗体以及使用说明。
[0022]综上，本专利技术提供了一种新的抗腺病毒单克隆抗体，其能够特异性结合包括1型、2型、3型、4型、7型、40型、41型和55型在内的多种型别的腺病毒的六邻体蛋白，由此用于多种型别的腺病毒的检测，表现出针对腺病毒的高灵敏度和高特异性，可以实现如皮克级浓度的更灵敏检测，极大地提高了腺病毒的检测率，降低了检测成本，为呼吸道和消化道的腺病毒的快速检测提供了可行性方案。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗腺病毒单克隆抗体，所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中，a)所述重链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:22
‑
24所示的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:25
‑
27所示的轻链互补决定区V
L
CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3；b)所述重链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29所示的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31所示的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L
CDR2和V
L CDR3；c)所述重链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:32
‑
34所示的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:35
‑
37所示的轻链互补决定区V
L
CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3；或者d)所述重链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:38
‑
40所示的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别由SEQ ID NO:41
‑
43所示的轻链互补决定区V
L
CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3。2.根据权利要求1所述的抗腺病毒单克隆抗体，其中，a)所述重链可变区包括SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：54所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：55所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列；b)所述重链可变区包括SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列具有80％以上、85％...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁克湖，黄杏帆，武云波，曾小芬，池朗山，林育佳，
申请(专利权)人：珠海重链生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：