一种特异性针对异羟基洋地黄毒甙元的抗体及其相关应用制造技术

本发明专利技术涉及一种新的单克隆抗体、该抗体的制备方法、及其用于免疫检测的相关应用。本发明专利技术的单克隆抗体能够高灵敏度且高特异性地针对异羟基洋地黄毒甙元(DIG)或异羟基洋地黄苷(地高辛)，使其不仅能够用于经DIG标记的目标分子如核酸分子的检测，也能够用于药物分子地高辛的检测，并由此能够有助于判断地高辛中毒及指导临床用药，对保证地高辛的治疗有效性及安全性具有重要意义。安全性具有重要意义。安全性具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性针对异羟基洋地黄毒甙元的抗体及其相关应用


[0001]本专利技术涉及免疫检测领域，具体地涉及一种特异性针对异羟基洋地黄毒甙元(DIG)或异羟基洋地黄苷(地高辛)的单克隆抗体、其制备方法及其用于免疫检测的相关应用。

技术介绍

[0002]异羟基洋地黄毒甙元，即Digoxigenin(DIG)，是一种类固醇半抗原分子，可用于标记核酸和检测系统，DIG标记的核酸探针危害性较小，保质期长，具有比放射性探针更高的灵敏度，可以更快地进行检测。
[0003][0004]DIG可以与DIG抗体组成半抗原
‑
抗半抗原检测系统，检测灵敏度高，且由于哺乳动物细胞中不含有内源性DIG及DIG结合蛋白，DIG标记的核酸探针不会发生非特异性结合，该检测系统具有很高的特异性，已为人们所接受，得到广泛的应用。
[0005]因此，高特异性和高灵敏度的针对异羟基洋地黄毒甙元(DIG)的抗体是本领域的持续需求。

技术实现思路

[0006]如前所述，本领域需要一种高亲和力、高特异性和高灵敏度的针对异羟基洋地黄毒甙元(DIG)的抗体。
[0007]本专利技术人通过将异羟基洋地黄毒甙元(DIG)与大分子载体蛋白如牛血清白蛋白(BSA)偶联后作为免疫原诱导小鼠产生免疫应答，取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出抗体效价大于1000K的杂交瘤细胞株，获得了具有高亲和力、高灵敏度和高特异性的单克隆抗体。由此，实现了本专利技术。
[0008]在第一方面，本专利技术提供了一种单克隆抗体，所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:1
‑
3所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:4
‑
6所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3。
[0009]在第二方面，本专利技术提供了一种核酸分子，其编码本专利技术第一方面的单克隆抗体。
[0010]在第三方面，本专利技术提供了一种载体，其包含本专利技术第二方面的核酸分子。
[0011]在第四方面，本专利技术提供了一种表达细胞，其包含本专利技术第二方面的核酸分子或第三方面的载体。
[0012]在第五方面，本专利技术提供了一种检测异羟基洋地黄毒甙元(DIG)的方法，包括使用本专利技术第一方面所述的单克隆抗体的步骤。
[0013]在第六方面，本专利技术提供了一种检测异羟基洋地黄苷(地高辛)的方法，所述方法用于非诊断目的或者诊断目的，包括使用本专利技术第一方面所述的单克隆抗体的步骤。
[0014]在第七方面，本专利技术提供了第一方面所述的单克隆抗体在制备用于检测异羟基洋地黄毒甙元或地高辛的试剂中的用途。
[0015]在第八方面，本专利技术提供了一种用于检测异羟基洋地黄毒甙元(DIG)或异羟基洋地黄苷(地高辛)的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术第一方面所述的单克隆抗体以及用于指导如何使用所述单克隆抗体进行检测的说明书。
[0016]本专利技术提供了一种单克隆抗体，其表现出针对异羟基洋地黄毒甙元(DIG)和异羟基洋地黄苷(地高辛)的高亲和力、高灵敏度和高特异性，能够用于检测样品中存在的DIG或地高辛。因此，一方面，本专利技术的单克隆抗体能够与DIG特异性结合，并由此能够用于直接地检测DIG自身或者经由DIG标记的核酸探针，或者用于间接地检测能够与经由DIG标记的核酸探针特异性相互作用的目标核酸分子。另一方面，本专利技术的单克隆抗体能够用于测定血清中的地高辛浓度，有助于判断地高辛中毒及指导临床用药，对保证地高辛的治疗有效性及安全性具有重要意义。本专利技术的单克隆抗体及其相关检测方法用于核酸检测时具有高特异性、低危害性、且保质期长，具有比放射性探针更高的灵敏度，可以更快地进行检测。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0018]图1示出了本专利技术的单克隆抗体DIG2H1的竞争抑制曲线。
[0019]图2示出了本专利技术的单克隆抗体DIG2H1
‑
C的竞争抑制曲线。
具体实施方式
[0020]在下文中，将结合附图对本专利技术进行详细的描述。需理解，以下描述仅以示例方式来对本专利技术进行说明，而无意于对本专利技术的范围进行限制，本专利技术的保护范围以随附权利要求为准。并且，本领域技术人员理解，在不背离本专利技术的精神和主旨的情况下，可以对本专利技术的技术方案进行修改。若并未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0021]除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所述主题所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在对本专利技术进行详细描述之前，提供以下定义以更好地理解本专利技术。
[0022]在提供数值范围的情况中，例如浓度范围、百分比范围或比率范围，应当理解，除非上下文另有明确规定，否则在该范围的上限与下限之间的、到下限单位的十分之一的各中间值以及在所述范围内的任何其他所述值或中间值包含在所述主题内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括在较小范围中，并且此类实施方案也包括在所述主题内，受限于所述范围中的任何特定排除的极限值。在所述范围包括一个或两个极限值的情况中，排除那些所包括的极限值中的任一个或两个的范围也包括在所述主题中。
[0023]在本专利技术的上下文中，很多实施方案使用表述“包含”、“包括”或者“基本/主要由
……
组成”。表述“包含”、“包括”或“基本/主要由
……
组成”通常情况下可以理解为开放式表述，表示不仅包括该表述后面具体列出的各元素、组分、组件、方法步骤等外，还包括其他的元素、组分、组件、方法步骤。另外，在本文中，表述“包含”、“包括”或者“基本/主要由
……
组成”在某些情况下也可以理解为封闭式表述，表示仅包括该表述后面具体列出的各元素、组分、组件、方法步骤，而不包括任何其他的元素、组分、组件、方法步骤。此时，该表述等同于表述“由
……
组成”。
[0024]为了更好地理解本教导并且不限制本教导的范围，除非另外指出，否则在说明书和权利要求中使用的表示数量、百分比或比例的所有数字以及其他数值在所有情况下都应理解为由术语“约”进行修饰。因此，除非相反地指出，否则在以下说明书和所附权利要求书中阐述的数值参数为近似值，其可以根据寻求获得的所需性质而变化。至少，每个数值参数应该至少根据所报告的有效数字的数值并通过应用普通的舍入技术来进行解释。
[0025]如本文所用，术语“抗体”是指通常由两对多肽链(每对具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链)组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ和λ轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且可以据此分别将抗体的同种型定义为IgM、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体，所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:1
‑
3所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:4
‑
6所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L
CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3；优选地，所述重链可变区包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列。2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体为选自双功能抗体、Fab、F(ab')2、Fab'、Fd、Fv、(dsFv)2、dsFv、dsFv
‑
dsFv'、二硫键稳定的双功能抗体、scFv、scFv二聚体、多特异性抗体、纳米抗体、结构域抗体或二价结构域抗体中的任一种；优选地，所述抗体还包含恒定区；更优选地，所述恒定区为选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD中任一种的恒定区；更优选地，所述恒定区的种属来源为大鼠、小鼠、兔、山羊、绵羊、马、狗、牛、猪、鸡、鸭、鹅或人。3.一种核酸分子，其编码权利要求1或2所述的单克隆抗体。4.一种载体，其包含权利要求3所述的核酸分子；优选地，所述表达载体为质粒载体，例如pEE12、pCAGGS、pTOPO、pcDNA如pCDNA3.1、pTT、p...

【专利技术属性】
技术研发人员：李燕飞，袁丽，欧阳海桥，龚春喜，
申请(专利权)人：珠海重链生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：