本发明专利技术一些实施例提供了一种能结合卡利普多的抗体或其抗原结合片段及其应用。所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中：所述重链可变区包括：如SEQ ID NO:1所示的CDRH1的氨基酸序列、如SEQ IDNO:2所示的CDRH2的氨基酸序列RAN、如SEQ ID NO:3所示的CDRH3的氨基酸序列；所述轻链可变区包括：如SEQ ID NO:4所示的CDRL1的氨基酸序列、CDRL2的氨基酸序列、如SEQ ID NO:6所示的CDRL3的氨基酸序列。基酸序列。
【技术实现步骤摘要】
一种抗卡利普多的单克隆抗体及其应用
[0001]本说明书涉及生物工程
，特别涉及一种抗卡利普多的单克隆抗体或其抗原结合片段及相关应用。
技术介绍
[0002]卡利普多(Carisoprodol)是一种肌肉松弛剂类药物，主要用于治疗慢性背痛等症状，亦有镇静及抗焦虑作用。卡利普多在治疗背痛方面被证明很有效，但卡利普多也被认为是一种潜在的可能被滥用的药物。一些服用卡利普多的病人产生了明显的药物依赖性，甚至有成瘾倾向。调查发现，许多病人实际服用卡利普多的用量超过了医生推荐的用量。近年来，过量服用卡利普多导致中毒的事件频发，令医学界担忧。因此，需要提供一种能够特异性结合卡利普多的抗体和使用该抗体检测样品中卡利普多含量的方法。
技术实现思路
[0003]本说明书一些实施例提供了一种能结合卡利普多的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中：所述重链可变区包括：如SEQ ID NO:1所示的CDRH1的氨基酸序列、如SEQ ID NO:2所示的CDRH2的氨基酸序列RAN、如SEQ ID NO:3所示的CDRH3的氨基酸序列；所述轻链可变区包括：如SEQ ID NO:4所示的CDRL1的氨基酸序列、CDRL2的氨基酸序列、如SEQ ID NO:6所示的CDRL3的氨基酸序列。
[0004]在一些实施例中，所述重链可变区由以下任一项组成：如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；与如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列相比在框架区中具有至少85％、90％或95％同一性的氨基酸序列；以及与如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列相比在框架区中具有一个或多个氨基酸的添加、缺失和/或取代的氨基酸序列。
[0005]在一些实施例中，所述轻链可变区由以下任一项组成：如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；与如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列相比在框架区中具有至少85％、90％或95％同一性的氨基酸序列；以及与如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列相比在框架区中具有一个或多个氨基酸的添加、缺失和/或取代的氨基酸序列。
[0006]本说明书一些实施例还提供了一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码前述抗体或其抗原结合片段。
[0007]在一些实施例中，所述核酸分子包括编码所述重链可变区的如SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列，以及编码所述轻链可变区的如SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列。
[0008]本说明书一些实施例还提供了一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如前述核酸分子。
[0009]本说明书一些实施例还提供了一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括前述表达载体。
[0010]本说明书一些实施例还提供了一种用于检测卡利普多的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括前述抗体或其抗原结合片段。
[0011]在一些实施例中，所述试剂盒是用于免疫胶体金法的试剂盒。
[0012]在一些实施例中，所述试剂盒检测所述卡利普多的最低检测限为200ng/mL。
[0013]本说明书一些实施例还提供了前述抗体或其抗原结合片段在制备用于检测卡利普多的试剂盒中的用途。
[0014]本说明书一些实施例还提供了一种检测卡利普多的方法，其特征在于，包括使用前述试剂盒检测样品中卡里普多的含量。
[0015]本专利技术运用卡利普多免疫小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过特异性的高通量筛选得到具有高度特异性的杂交瘤细胞，通过培养和再免疫获得大量小鼠腹水，再经多步分离及纯化获得高纯度、高灵敏度和高特异性的抗卡利普多的单克隆抗体，为开发检测卡利普多的试剂盒提供了所需的原料。本专利技术提供的抗卡利普多的单克隆抗体经验证具有良好的特异性结合能力。可用于免疫印迹、免疫荧光等免疫学检测。
具体实施方式
[0016]如本说明书和权利要求书中所示，除非上下文明确提示例外情形，“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数，也可包括复数。一般说来，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。
[0017]除另有定义外，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。
[0018]术语“约”和“左右”可描述在某个值的一定取值范围内，例如加上或减去该值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％等。例如，术语“约10mL”可以包括9mL至11mL。
[0019]如本文所用，术语“抗体”通常是指包含通过共价二硫键和非共价相互作用保持在一起的两条重链(H)和两条轻链(L)多肽链的Y形四聚体蛋白。例如，抗体的轻链可以分为κ和λ轻链。重链可分为μ、δ、γ、α和ε，它们分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链中，可变区通过约12个或更多个氨基酸的“J”区与恒定区连接，并且重链还包含约3个或更多个氨基酸的“D”区。每条重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域(CH1，CH2和CH3)组成。每条轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。VH和VL区可以进一步分为由相对保守的区域(称为框架区(FR))间隔开的高变区(又称为互补决定区(CDR))。通常每个VH和VL由以下顺序的3个CDR和4个FR组成：从N端到C端的FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。每个重链/轻链对的可变区(VH和VL)分别形成抗原结合位点。抗体可以具有不同的类型，例如IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。
[0020]术语“抗原结合部分”或“抗原结合片段”，是指包含全长抗体的片段的多肽，其保留了与全长抗体特异性结合的抗原特异性结合的能力，和/或其与全长抗体竞争结合相同的抗原。在一些实施例中，抗原结合片段包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如scFv)、嵌合抗体，双抗体和包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的至少一部分抗体的多肽。抗体的抗原结合片段可从给定抗体(例如，在本申请中提供的抗卡利普多的单克隆抗体)通过本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组DNA技术或
酶促或化学切割方法)获得，并且可以以与完整抗体相同的方式筛选特异性。
[0021]术语“同一性”是指通过比对和比较序列确定的两个或更多个多肽分子或两个或更多个核酸分子的序列之间的关系。“百分比同一性”是指比较分子中氨基酸或核苷酸之间相同残基的百分比，并基于被比较的最小分子的大小计算。
[0022]以下将对本说明书实施例所涉及的方法进行详细说明。值得注意的是，以下实施例仅仅用以解释本说明书，并不构成对本说明书的限定。
[0023]本说明书一些实施例提供了一种能结合卡利普多的抗体本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种能结合卡利普多的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中：所述重链可变区包括：如SEQ ID NO:1所示的CDRH1的氨基酸序列、如SEQ ID NO:2所示的CDRH2的氨基酸序列、如SEQ ID NO:3所示的CDRH3的氨基酸序列；所述轻链可变区包括：如SEQ ID NO:4所示的CDRL1的氨基酸序列、CDRL2的氨基酸序列RAN、如SEQ ID NO:6所示的CDRL3的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区由以下任一项组成：如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；与如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列相比在框架区中具有至少85％、90％或95％同一性的氨基酸序列；以及与如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列相比在框架区中具有一个或多个氨基酸的添加、缺失和/或取代的氨基酸序列。3.如权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区由以下任一项组成：如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；与如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列相比在框架区中具有至少85％、90％或95％同一性的氨基酸序列；以及与如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列相比在框架区中具有一个或多个氨基酸的添加、缺失和/或取代的氨基酸序列...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏文涛，上官科科，成含锋，
申请(专利权)人：杭州旭科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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