一种抗莫西沙星单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种抗莫西沙星单克隆抗体及其制备方法和应用，属于免疫学与兽药残留检测领域。该抗莫西沙星单克隆抗体的重链可变区CDR

【技术实现步骤摘要】
一种抗莫西沙星单克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及免疫学与兽药残留检测领域，特别是涉及一种抗莫西沙星单克隆抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]氟喹诺酮类抗生素是市面上应用非常广泛的抗生素，被应用在人类与畜牧养殖中多种疾病的防治。由于药物的不规范使用，容易造成动物体内抗生素残留，进而通过食物链进入人类体内，给人类生命健康造成隐患。因此，我国农业农村部制定了一系列的抗生素残留国家限量标准，其中最新年度的兽药残留计划中对动物食品中氟喹诺酮类残留药物的最大残留限量的要求为10～500μg/kg。
[0003]莫西沙星属于第四代氟喹诺酮类抗生素，临床上主要应用于上呼吸道和下呼吸道感染。目前，根据国内外相关文献报道，检测莫西沙星的方法主要是基于荧光分析法、紫外分光光度计法、高效液相色谱法等理化分析法中延伸的各种方法。例如席会平等使用荧光分析法检测牛奶中的莫西沙星残留，其中莫西沙星检测浓度线性范围为50～400μg/L(r＝0.9991)，最低检测限为13.6μg/L；赵建晖等人提出了同时测定水产品中的加替沙星、莫西沙星和左氧氟沙星的超高效液相色谱
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串联质谱分析方法，作者对3种化合物的质谱裂解规律进行了研究，研究发现当3种化合物的质量分数在100μg/kg以内呈线性，检出限(3S/N)在3.7～4.8μg/kg。Faezeh Mohaghegh等人在克雷茨曼构型(KC)中利用表面增强拉曼光谱(SERS)检测和定量低浓度的莫西沙星，该研究表明随着莫西沙星浓度的增加，拉曼谱线的峰值强度呈强烈的非线性变化，但在饱和效应开始的约100nM～1mM的浓度范围内有明确的定义。然而，这些方法大多需要繁琐的样品准备、昂贵的仪器设备和专业的技术人员，才能实现对待测样本的检测。
[0004]关于莫西沙星免疫学检测方法的建立，目前尚未有相关文献报道。因此，本专利技术将免疫学领域与兽药残留检测领域相结合，提供了一种快速、简便、灵敏的间接竞争ELISA方法来检测莫西沙星。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种抗莫西沙星单克隆抗体及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术获得一种高滴度、高灵敏性和高亲和力的抗莫西沙星单克隆抗体，基于该单抗研制的检测产品可快速、灵敏的检测人类组织或动物食品中莫西沙星残留，为国家兽药残留检测领域提供了技术支撑。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种抗莫西沙星单克隆抗体，所述抗莫西沙星单克隆抗体的重链可变区CDR
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H1为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，CDR
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H2为SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，CDR
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H3为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列；
[0008]所述抗莫西沙星单克隆抗体的轻链可变区CDR
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L1为SEQ ID NO.14所示的氨基酸
序列，CDR
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L2为SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列，CDR
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L3为SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列。
[0009]进一步地，所述抗莫西沙星单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。
[0010]进一步地，编码所述抗莫西沙星单克隆抗体的重链可变区的核酸如SEQ ID NO.1所示，编码所述抗莫西沙星单克隆抗体的轻链可变区的核酸如SEQ ID NO.9所示。
[0011]本专利技术还提供一种如上述的抗莫西沙星单克隆抗体的制备方法，采用碳二亚胺法将莫西沙星分别与牛血清白蛋白BSA和卵清白蛋白OVA偶联，合成免疫全抗原MXF
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BSA和检测全抗原MXF
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OVA；再用MXF
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BSA免疫小鼠，得到所述抗莫西沙星单克隆抗体。
[0012]本专利技术还提供一种莫西沙星的检测产品，含有上述的抗莫西沙星单克隆抗体。
[0013]进一步地，所述检测产品包括ELISA试剂盒或免疫层析试纸。
[0014]进一步地，所述ELISA试剂盒的酶标抗体稀释倍数为1：800，检测全抗原MXF
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OVA的包被浓度为2μg/mL，包被条件为37℃2h，，封闭条件为5％脱脂奶、37℃封闭1h。
[0015]本专利技术还提供一种如上述的抗莫西沙星单克隆抗体或上述的检测产品在检测食品中莫西沙星的应用。
[0016]本专利技术还提供一种如上述的抗莫西沙星单克隆抗体在制备莫西沙星检测产品中的应用。
[0017]本专利技术公开了以下技术效果：
[0018]本专利技术采用碳二亚胺法将半抗原莫西沙星与大分子蛋白偶联，合成完全抗原，再用完全抗原免疫小鼠，通过刺激小鼠产生免疫应答反应，然后通过细胞融合技术将小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选出一株能稳定分泌抗莫西沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A3，本专利技术所获得的单克隆抗体，其效价不低于1:5.12
×
105，敏感性为0.188ng/mL，亲和常数为7.01
×
108L/mol，且与其他结构类似物交叉反应均小于0.01％，本专利技术获得了一种高滴度、高灵敏性和高亲和力的抗莫西沙星单克隆抗体。
[0019]本专利技术基于此单抗，研制竞争ELISA检测试剂盒及胶体金免疫层析试纸，本专利技术提供的检测产品可快速、灵敏的检测人类组织或动物食品中莫西沙星残留，为国家兽药残留检测领域提供了技术支撑。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为实施例1中完全抗原合成的原理示意图；
[0022]图2为实施例1中完全抗原的SDS
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PAGE鉴定，其中M：Marker，1：OVA，2：MXF
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OVA，3：BSA，4：MXF
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BSA；
[0023]图3为完全抗原的UV
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vis表征图；其中A图为MXF
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OVA，B图为MXF
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BSA；
[0024]图4为实施例2中小鼠多抗血清效价与敏感性图，其中A图为多抗血清效价测定结果，B图为多抗血清敏感性测定的标准曲线图；
[0025]图5为实施例2中杂交瘤细胞的ELISA鉴定；
[0026]图6为实施例3中1A3单克隆抗体的纯化图及效价与敏感性测定；其中A图为SDS
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PAGE鉴定结果，图中M为Marker，1：腹水纯化前，2：腹水纯化后；B图为1A3单克隆抗体效价，C图为1A3单克隆抗体敏感性；
[0027]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗莫西沙星单克隆抗体，其特征在于，所述抗莫西沙星单克隆抗体的重链可变区CDR
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H1为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，CDR
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H2为SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，CDR
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H3为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列；所述抗莫西沙星单克隆抗体的轻链可变区CDR
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L1为SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列，CDR
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L2为SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列，CDR
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L3为SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗莫西沙星单克隆抗体，其特征在于，所述抗莫西沙星单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。3.根据权利要求2所述的抗莫西沙星单克隆抗体，其特征在于，编码所述抗莫西沙星单克隆抗体的重链可变区的核酸如SEQ ID NO.1所示，编码所述抗莫西沙星单克隆抗体的轻链可变区的核酸如SEQ ID NO.9所示。4.一种如权利要求1
‑
3任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉梅，张改平，王爱萍，周景明，梁超，刘红亮，丁培阳，朱习芳，刘恩平，郭梦兰，
申请(专利权)人：河南中泽生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：