本发明专利技术涉及一种新的单克隆抗登革病毒(DENV)抗体、该抗体的制备方法、及其用于免疫检测的相关应用。本发明专利技术的单克隆抗DENV抗体靶向DENV的NS1结合蛋白，并且表现出靶向DENV NS1蛋白的高灵敏度和高特异性，由此能够满足DENV的临床检测需求。DENV的临床检测需求。DENV的临床检测需求。
【技术实现步骤摘要】
一种针对登革病毒NS1蛋白的抗体及其相关应用
[0001]本专利技术涉及病毒的检测领域，具体地涉及一种单克隆抗登革病毒(DENV)抗体、其制备方法及其用于免疫检测的相关应用。
技术介绍
[0002]登革病毒(DENV)是小型黄病毒，属于黄热病毒属，为单股正链RNA病毒。登革病毒通过节肢动物传播给哺乳动物，可导致人类隐性感染、登革热、登革出血热。全世界范围内每年发生的登革热感染例数约达5千万到1亿，死亡例数约达2万。典型的登革热临床表现为起病急骤、高热、头痛、肌肉痛、骨关节剧烈酸痛、部分患者出现皮疹、出血倾向、淋巴结肿大、白细胞计数减少、血小板减少等。
[0003]目前诊断登革病毒感染主要有以下方法：病毒分离、病毒核酸检测、血清学检查及抗原分离。病毒分离虽然是诊断登革病毒的金标准，但是诊断周期较长，病毒核酸检测通常用RT
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PCR，其诊断成本较高，实验条件要求严格，故以上两种检测均不适合于常规诊断。
[0004]登革基因组编码多种非结构(NS)蛋白，包括NS1蛋白，NS1蛋白是登革病毒中一种高度保守的非结构糖蛋白，在复制中发挥重要作用，且在登革热急性感染期即在病人血清中存在，在症状出现0
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7天内，NS1检测可以达到病毒核酸检测的灵敏度，是良好早期诊断靶标。
[0005]然而，黄病毒属NS1蛋白之间存在广泛的相似性，可能会损害测试的特异性，比如与黄热病毒(YFV)、寨卡病毒(ZIKA)、西尼罗河病毒(WNV)、蜱穿脑炎病毒(TBEV)的NS1可能有交叉反应，接种乙型脑炎病毒疫苗的人群，也可能发生假阳性反应。
[0006]因此，需要一种特异性高、灵敏度高、且交叉反应少的登革病毒检测方法和产品。
技术实现思路
[0007]如前所述，本领域需要一种高特异性和高灵敏度的单克隆抗登革病毒抗体。
[0008]本专利技术人通过将纯化的DENV NS1蛋白作为免疫原诱导小鼠产生免疫应答，取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，由ELISA方法筛选出对登革病毒1
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4型NS1蛋白均特异性结合但不与其他黄病毒NS1蛋白发生交叉反应的杂交瘤细胞株，获得了具有高灵敏度和高特异性的单克隆抗DENV抗体。由此，实现了本专利技术。
[0009]在第一方面，本专利技术提供了一种单克隆抗登革病毒(DENV)抗体，所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:1
‑
3所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:4
‑
6所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3。
[0010]在第二方面，本专利技术提供了一种核酸分子，其编码本专利技术第一方面的单克隆抗登革病毒(DENV)抗体。
[0011]在第三方面，本专利技术提供了一种载体，其包含本专利技术第二方面的核酸分子。
[0012]在第四方面，本专利技术提供了一种表达细胞，其包含第二方面的核酸分子或第三方
面的载体。
[0013]在第五方面，本专利技术提供了一种检测登革病毒(DENV)的方法，所述方法用于非诊断目的或者诊断目的，包括使用第一方面所述的单克隆抗登革病毒(DENV)抗体的步骤。
[0014]在第六方面，本专利技术提供了第一方面的单克隆抗登革病毒(DENV)抗体在制备用于检测登革病毒(DENV)的试剂中的用途。
[0015]在第七方面，本专利技术提供了一种用于检测登革病毒(DENV)的试剂盒，所述试剂盒包括第一方面的单克隆抗登革病毒(DENV)抗体以及用于指导如何检测登革病毒(DENV)的说明书。
[0016]综上，本专利技术提供了一种单克隆抗登革病毒(DENV)抗体，其表现出针对DENV NS1蛋白的高灵敏度和高特异性，能够适用于多种免疫层析检测如荧光微球层析、胶体金层析、彩色微球层析；ELISA检测如直接法、间接法、夹心法和竞争法；化学发光法；电化学发光法等，进而能够用于纳克级甚至皮克级浓度的DENV检测，极大地提高了DENV检测与分析的灵敏度，由此满足DENV临床检测的需求。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0018]图1示出了本专利技术的单克隆抗体DN 3G8与登革病毒1
‑
4型(DENV1、DENV2、DENV3、DENV4)NS1蛋白的结合反应的结果图，以寨卡病毒(ZIKA)作为对照。
[0019]图2示出了本专利技术的重组抗体DN 3G8与登革病毒1
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4型(DENV1、DENV2、DENV3、DENV4)NS1蛋白的结合反应的结果图，以寨卡病毒(ZIKA)作为对照。
[0020]图3示出了本专利技术的单克隆抗体DN3G8对不同浓度的登革病毒1型(DENV1)NS1蛋白通过双夹心ELISA法进行的检测结果。
[0021]图4示出了本专利技术的单克隆抗体DN3G8与登革病毒1
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4型(DENV1、DENV2、DENV3、DENV4)、寨卡病毒(ZIKA)、黄热病毒(YFV)、西尼罗河病毒(WNV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)和蜱传脑炎病毒(TBEV)的NS1蛋白通过双夹心ELISA法进行的检测结果。
[0022]图5示出了本专利技术的重组抗体DN3G8对登革病毒1
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4型(DENV1、DENV2、DENV3、DENV4)、寨卡病毒(ZIKA)、黄热病毒(YFV)、西尼罗河病毒(WNV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)和蜱传脑炎病毒(TBEV)的NS1蛋白的胶体金层析检测结果。
具体实施方式
[0023]在下文中，将结合附图对本专利技术进行详细的描述。需理解，以下描述仅以示例方式来对本专利技术进行说明，而无意于对本专利技术的范围进行限制，本专利技术的保护范围以随附权利要求为准。并且，本领域技术人员理解，在不背离本专利技术的精神和主旨的情况下，可以对本专利技术的技术方案进行修改。若并未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0024]除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所述主题所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在对本专利技术进行详细描述之前，提供以下定义以更好地理解本专利技术。
[0025]在提供数值范围的情况中，例如浓度范围、百分比范围或比率范围，应当理解，除非上下文另有明确规定，否则在该范围的上限与下限之间的、到下限单位的十分之一的各中间值以及在所述范围内的任何其他所述值或中间值包含在所述主题内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括在较小范围中，并且此类实施方案也包括在所述主题内，受限于所述范围中的任何特定排除的极限值。在所述范围包括一个或两个极限值的情况中，排除那些所本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗登革病毒(DENV)抗体，所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:1
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3所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:4
‑
6所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3；优选地，所述重链可变区包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列。2.权利要求1所述的单克隆抗DENV抗体，其中，所述抗体为选自双功能抗体、Fab、F(ab')2、Fab'、Fd、Fv、(dsFv)2、dsFv、dsFv
‑
dsFv'、二硫键稳定的双功能抗体、scFv、scFv二聚体、多特异性抗体、纳米抗体、结构域抗体或二价结构域抗体中的任一种；优选地，所述抗体还包含恒定区；更优选地，所述恒定区为选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD中任一种的恒定区；更优选地，所述恒定区的种属来源为大鼠、小鼠、兔、山羊、绵羊、马、狗、牛、猪、鸡、鸭、鹅或人。3.一种核酸分子，其编码权利要求1或2所述的单克隆抗登...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁克湖，邓梦林，郑伟，
申请(专利权)人：珠海重链生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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