【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫检测领域，具体地涉及一种检测寨卡病毒的单克隆抗体、其制备方法及其用于免疫检测的相关应用。
技术介绍
1、寨卡病毒(zikv)是一种通过蚊虫传播、性传播、母婴传播的病毒，与登革热病毒(dnev)、蜱传脑炎病毒tbev)、黄热病毒(yfv)、日本脑炎病毒(jev)和西尼罗河病毒(wnv)同属于黄病毒科黄病毒属。感染寨卡病毒会引起皮疹、发热、结膜炎、关节痛、肌痛等特征，但也有感染者没有明显的临床症状，这可能是由于病毒传播的主要载体不同。随着研究的深入，研究人员发现新生儿小头畸形、成人的格林-巴利综合征、心血管并发症、急性肝损伤以及凝血功能障碍均与寨卡病毒感染有关。寨卡病毒的持续传播和感染已经成为全球的健康问题，2016年，世界卫生组织(who)宣布寨卡病毒感染为国际重点关注健康事件。因此，准确诊断是否感染寨卡病毒至关重要。
2、目前诊断寨卡病毒感染的主要检测方法有病原学检测、血清学检测。病原学检测主要为核酸检测(如rt-qpcr，lamp)，其优点是精准性高、检测时间短。但是，该方法使用的设备昂贵，易出现假阳性，并且由于病毒出现的窗口期短而很难准确检出寨卡病毒。血清学检测包括：检测血清特异性igm抗体的酶联免疫吸附试验(elisa)和间接荧光抗体试验(ifa)以及检测中和抗体的蚀斑减少中和试验(prnt)。血清学检测的优点是简便、快速，但是igm/igg通常在发病后7天后才能检出，且受不同感染患者的症状发作的影响。
3、寨卡病毒是一种单股正链rna病毒，直径40～70nm，有包膜，rna被翻译
4、然而，黄病毒属病毒ns1蛋白之间存在广泛的相似性，这种病毒蛋白的高度同源性导致产生的抗体在不同病毒间存在交叉反应，有研究报道登革热病毒ns1标准诊断试剂与寨卡病毒有交叉。其次，当患者既往感染过其他黄病毒属病毒时，机体会产生大量针对初次感染的抗体，从而使血清学检测易出现假阳性结果。
5、因此，本领域需要一种特异性高、灵敏度高且与其他黄热病毒属病毒不存在交叉反应或者交叉反应少的寨卡病毒的检测试剂和相关方法，从而实现对寨卡病毒简单、快速、灵敏且特异的检测。
技术实现思路
1、本专利技术人用寨卡病毒的ns1蛋白免疫小鼠，取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，由elisa方法筛选出对寨卡病毒ns1蛋白特异结合且不与黄病毒科其他病毒ns1蛋白交叉反应的杂交瘤细胞株，构建重组抗体，获得重组抗寨卡病毒单克隆抗体。由此，实现了本专利技术。
2、因此，在第一方面，本专利技术提供了抗寨卡病毒单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括由seq id no:1、seq id no:2、或seq id no:3所示的重链互补决定区vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3，所述轻链可变区包括由seq id no:4、seq id no:5、或seq id no:6所示的轻链互补决定区vlcdr1、vl cdr2和vl cdr3。
3、在第二方面，本专利技术提供了一种核酸分子，其编码第一方面的抗寨卡病毒单克隆抗体或其抗原结合片段。
4、在第三方面，本专利技术提供了一种载体，其包含第二方面的核酸分子。
5、在第四方面，本专利技术提供了一种表达细胞，其包含第二方面的核酸分子或第三方面的载体。
6、在第五方面，本专利技术提供了第一方面的抗寨卡病毒单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于检测寨卡病毒的试剂中的用途。
7、在第六方面，本专利技术提供了一种检测寨卡病毒的方法，所述方法用于非诊断目的或诊断目的，包括使用第一方面的抗寨卡病毒单克隆抗体或其抗原结合片段的步骤。
8、在第七方面，本专利技术提供了一种用于检测寨卡病毒的试剂盒，其包括第一方面的抗寨卡病毒单克隆抗体或其抗原结合片段以及使用说明。
9、综上，本专利技术提供了一种新的抗寨卡病毒单克隆抗体或其抗原结合片段，其表现出结合寨卡病毒ns1蛋白的高灵敏度和高特异性，能够适用于多种免疫层析检测，进而能够用于纳克级甚至皮克级浓度的寨卡病毒的检测，极大地提高了寨卡病毒检测与分析的灵敏度，由此满足寨卡病毒临床检测的需求。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种抗寨卡病毒单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3所示的重链互补决定区VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述轻链可变区包括由SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、或SEQ ID NO:6所示的轻链互补决定区VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。
2.根据权利要求1所述的抗寨卡病毒单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，
3.根据权利要求1或2所述的抗寨卡病毒单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述重链可变区还包含重链框架区HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，其分别具有由SEQ ID NO:21-24所示的序列或与所述序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列；所述轻链可变区还包含轻链框架区LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，其分别具有由SEQ ID NO:25-28所示的序列或与所述序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列。
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。