一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1及其应用，其重链可变区序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO.2所示。单克隆抗体HOPE1对天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素及天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素混合物的半抑制浓度分别达到0.32ng/mL、0.07ng/mL、0.21ng/mL、103.8pg/mL，对辣椒素类物质具有强的亲和力；通过本发明专利技术提供的单克隆抗体HOPE1建立的用于检测辣椒素类物质含量的ic

【技术实现步骤摘要】
一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1及其应用。

技术介绍

[0002]辣椒素类物质是一类香兰素结构为骨架，带有长侧链基团的小分子化合物，其中三种代表性辣椒素的是天然辣椒素(CPC)、合成辣椒素(N
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V)和二氢辣椒素(DCPC)，它们的结构分别为：a.天然辣椒素b.合成辣椒素c.二氢辣椒素
[0003]辣椒素类物质已经得到了十分广泛的应用，比如：可以用作调味剂、制备药物、用作农药、作为防污涂料、还可用于电缆材料。建立高灵敏度的辣椒素类物质检测方法对于辣椒素的应用具有重要的意义。天然辣椒素和二氢辣椒素占辣椒素使用总量的90％，合成辣椒素具有与天然辣椒素类似的结构部和功能，由于合成辣椒素相对于天然辣椒素，其制作成本更低，很有可能在日后替代天然辣椒素和二氢辣椒素，被广泛应用，所以天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素能作为辣椒素类物质的代表，建立适用于天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素的检测方法即可满足现有对于辣椒素类物质的检测需求。
[0004]现有的辣椒素类物质分析检测方法包括感官鉴定法、凯氏定氮法、化学检测法(包括呋喃甲醛法、三氯化铁法和氧氯钒法)﹑分光光度法、光谱测定法、薄层色谱法、高效液相色谱法、色谱
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质谱联用和免疫分析方法等。其中免疫分析方法具有特异性强、灵敏度高、分析容量大、方便快捷、成本低廉、适于现场批量检测等优点，被广泛应用于辣椒素类物质的检测。抗体是免疫分析方法的核心试剂，制备灵敏度高、通用性好的辣椒素类物质抗体是建立良好的辣椒素类物质免疫分析方法的前提。由于辣椒素类物质属于一类小分子物质，它们能被抗体特异性识别，但其本身却不能引起机体的免疫应答反应，因此辣椒素的单克隆抗体制备必须采用人工合成抗原进行免疫。
[0005]杨青青(2016)在《食用植物油外源污染物辣椒素及黄曲霉毒素免疫检测技术研究》中制备了一种辣椒素类物质的半抗原HaptenC，随后将其与载体蛋白偶联，制成人工完全抗原，并进行小鼠免疫，通过单克隆首次制备了针对辣椒素类物质的单克隆抗体YQQD8，并基于该抗体建立了一系列的免疫分析方法(ELISA、荧光偏振及毛细管电泳免疫检测法、胶体金侧流免疫层析快速检测法、时间分辨荧光免疫层析法、免疫亲和柱
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HPLC
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MS/MS检测法)。但该抗体对天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素的IC
50
值分别只有：8.5ng/mL、5.0ng/mL、13.5ng/mL，通过抗体和辣椒素类物质的3D模型对接发现，单克隆抗体YQQD8只有1个氨
基酸残基参与与辣椒素类物质的疏水相互作用，亲和力不强，免疫分析方法中抗体与抗原的亲和力对分析方法的灵敏度有极大的影响，因此，寻找具有更高亲和力的辣椒素类物质抗体具有相当的必要性。

技术实现思路

[0006]本专利技术针对现有技术的不足，旨在提供一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1及其应用，建立灵敏度更高的辣椒素类物质分析方法。
[0007]本专利技术的首要目的在于提供一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素中的一种或多种的单克隆抗体HOPE1。
[0008]本专利技术的另一目的在于提供单克隆抗体HOPE1在天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素中的一种或多种的含量检测和/或制备天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素中的一种或多种的含量检测的试剂盒中的应用。
[0009]本专利技术的又一目的在于提供一种天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素中的一种或多种的含量检测的试剂盒。
[0010]本专利技术的又一目的在于提供一种检测天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素中的一种或多种的含量的ic
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ELISA免疫检测方法。
[0011]本专利技术的又一目的在于提供一种检测天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素中的一种或多种的含量的时间分辨荧光免疫层析法。
[0012]本专利技术的又一目的在于提供一种编码单克隆抗体HOPE1的核苷酸序列。
[0013]本专利技术的又一目的在于提供一种核苷酸序列的载体。
[0014]本专利技术的又一目的在于提供一种重组细胞。
[0015]本专利技术通过以下技术手段实现上述专利技术目的：
[0016]本专利技术提供了一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1，重链可变区序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO.2所示。
[0017]所述抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1为抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素中的一种或多种的单克隆抗体HOPE1。
[0018]优选地，所述抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1的亚型为IgG1。
[0019]上述单克隆抗体HOPE1由杂交瘤细胞株HOPE1分泌产生，具体步骤如下所述：
[0020]S1.天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用人工完全抗原Hapten C
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BSA的合成
[0021]通过香兰素胺盐酸盐与丁二酸酐反应合成半抗原Hapten C，将半抗原Hapten C与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到辣椒素类物质通用人工完全抗原Hapten C
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BSA；
[0022]S2.动物免疫及杂交瘤细胞株HOPE1的建立
[0023]将S1制得的人工完全抗原Hapten C
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BSA免疫Balb/c小鼠，收集小鼠脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合，通过ic
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ELISA法筛选产生抗体的效价与抑制率最优的细胞株即为杂交瘤细胞株HOPE1，将该细胞株进行扩孔培养，收集冻存建株；
[0024]S3.将杂交瘤细胞株HOPE1注射入Balb/c小鼠腹腔，收集小鼠腹水，通过辛酸
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硫酸铵法纯化腹水得到单克隆抗体HOPE1；
[0025]其中，步骤S1所述的半抗原Hapten C的结构式如式(II)所示：
[0026][0027]经ic
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ELISA检测，本专利技术提供的单克隆抗体HOPE1对天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素的半抑制浓度(IC
50
)分别为0.32ng/mL、0.07ng/mL、0.21ng/mL，对天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素混合物的半抑制浓度(IC
50
)为103.8pg/mL。明显低于现有技术CN201610079095.X提供的抗天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体YQQD8(单克隆抗体YQQD8对天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素的半抑制浓度分别为8.5ng/mL、13.5ng/mL、5.0ng/mL，对天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素混合物的半抑制浓度为5.8ng/mL)。可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体，其特征在于，重链可变区序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO.2所示。2.权利要求1所述的单克隆抗体在天然辣椒素、二氢辣椒素、、合成辣椒素中的一种或多种的含量检测和/或制备天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素中的一种或多种的含量检测的试剂盒中的应用。3.一种天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素中的一种或多种的含量检测的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述单克隆抗体。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包含ic
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ELISA免疫检测法所需试剂。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包含时间分辨荧光免疫层析法所需试剂。6.一种检测天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素中的一种或多种的含量的ic
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ELISA免疫检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.将样品提取液加入包被有结构式如(I)所示的天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用人工完全抗原Hapten C
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KLH的ELISA板中，同时加入权利要求1所述单克隆抗体，在35～40℃水浴...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐振林，温伟桓，陈润禧，罗林，陈子键，沈玉栋，雷红涛，王芷若，王语璞，曾海力，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：