一种抗乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种抗乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术提供了一种抗乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体，其重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的CDR2和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的CDR3，轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示的CDR2和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的CDR3。此单克隆抗体能够显著抑制HepG2.2.15细胞和HepAD38细胞的HBsAg、HBeAg以及HBV DNA表达。表达。

【技术实现步骤摘要】
一种抗乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及一种抗乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体及其应用，属于生物


技术介绍

[0002]乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）为嗜肝DNA病毒，由包膜和核壳体组成，有较强的传染性，主要侵犯部位为人体肝脏，感染后可导致急性病毒型乙型肝炎（Acute Hepatitis B, AHB）、慢性乙型病毒性肝炎（Chronic Hepatitis B, CHB）、肝纤维化和肝癌等相关疾病。
[0003]现阶段，通常使用核苷(酸)类抗病毒药物抑制乙型肝炎病毒复制，进而治疗乙型肝炎病毒感染及乙型肝炎病毒感染所导致的相关疾病。但是，核苷(酸)类抗病毒药物普遍存在临床治愈率低，以及停药后容易引起病毒反弹甚至肝功能衰竭的问题。亦可使用干扰素对乙型肝炎病毒感染进行抗病毒治疗。但是，大多数患者对干扰素耐受性差，存在较多的不良反应，并且治疗1年仅有3%~7%的慢性乙型病毒性肝炎患者获得乙型肝炎表面抗原（Hepatitis B surface antigen, HBsAg）清除（乙型肝炎表面抗原清除是慢性乙型病毒性肝炎临床治愈或功能性治愈的标志）。
[0004]单克隆抗体（Monoclonal antibody）是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。与干扰素和核苷(酸)类抗病毒药物相比，单克隆抗体药物在治疗上，体现出特异性强、灵敏度高、有效性高和安全性好的优势。找到能够有效抑制乙型肝炎病毒复制的单克隆抗体药物有望克服现有抗乙型肝炎病毒感染药物存在的缺陷。
[0005]乙型肝炎病毒的基因组由不完全的环状双链DNA组成，包含S区、C区、P区和X区四个编码病毒复制和包装所需蛋白的开放阅读框（open reading frame, ORF）。开放阅读框编码的不少蛋白都可以引发特定的抗乙型肝炎病毒免疫反应，例如，上述提到的乙型肝炎表面抗原（Hepatitis B surface antigen, HBsAg），以及，乙型肝炎e抗原（Hepatitis B e antigen, HBeAg）和乙型肝炎核心抗原（Hepatitis B core antigen, HBcAg）。
[0006]其中，乙型肝炎核心抗原具有很强的免疫原性，乙型肝炎病毒感染者几乎均可检测出乙型肝炎核心抗原引发免疫反应所产生的乙型肝炎核心抗体（抗HBc），但是，普遍的观点认为，乙型肝炎核心抗体不是保护性抗体，只具有一定的流行病学调查意义，并且，因为乙型肝炎核心抗体可在血清中存在较长时间，是乙型肝炎病毒急性感染以及后期慢性感染的标志，乙型肝炎核心抗体已在临床中被广泛应用于慢性乙型病毒性肝炎（CHB）的筛查和诊断。目前，尚未有能够有效抑制乙型肝炎病毒复制的抗乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体。

技术实现思路

[0007]为解决上述问题，本专利技术提供了一种抗乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的CDR2和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的CDR3，轻链可变区包括氨基酸序列
如SEQ ID NO.4所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示的CDR2和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的CDR3。
[0008]在本专利技术的一种实施方式中，所述单克隆抗体的重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的CDR2和氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的CDR3，轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示的CDR2和氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的CDR3。
[0009]在本专利技术的一种实施方式中，所述单克隆抗体的重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示的FR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示的FR3和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示的FR4，轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示的FR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示的FR3和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示的FR4。
[0010]在本专利技术的一种实施方式中，所述单克隆抗体的重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示的FR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示的FR3和氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示的FR4，轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示的FR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示的FR3和氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示的FR4。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，编码所述重链可变区的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，编码所述轻链可变区的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，所述轻链和重链之间由二硫键连接。
[0014]本专利技术还提供了一种基因，所述基因编码上述单克隆抗体。
[0015]本专利技术还提供了一种重组质粒，所述重组质粒携带上述基因。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，所述重组质粒的载体为pET
‑
30a(+)表达载体、pcDNA3.1/GS表达载体、pXMJ19表达载体、pBAD24表达载体或pMAL
‑
c2x表达载体。
[0017]本专利技术还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞转染有上述重组质粒；或者，所述宿主细胞的基因组整合有上述基因。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，所述宿主细胞为HepG2细胞或HepG2.2.15细胞。
[0019]本专利技术还提供了一种制备上述单克隆抗体的方法，所述方法包括：将上述宿主细胞接种至细胞培养基中进行培养，得到培养液；从培养液中分离提取上述单克隆抗体。
[0020]本专利技术还提供了一种药物，所述药物含有上述单克隆抗体，并且，所述药物具有如下至少一种用途：（a）抑制乙型肝炎病毒复制；（b）预防和/或治疗乙型肝炎病毒感染；和/或，（c）预防和/或治疗乙型肝炎病毒感染所导致的相关疾病。
[0021]在本专利技术的一种实施方式中，所述乙型肝炎病毒感染所导致的相关疾病包括急性病毒型乙型肝炎、慢性乙型病毒性肝炎、肝纤维化或肝癌中的一种或多种。
[0022]在本专利技术的一种实施方式中，所述药物还含有药物载体和/或药用辅料。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的CDR2和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的CDR3，轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示的CDR2和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的CDR3。2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示的FR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示的FR3和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示的FR4，轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示的FR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示的FR3和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示的FR4。3.如权利要求1或2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。4.一种基因，其特征在于，所述基因编码权利要求1~3...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯金林，李咏茵，蒋小滔，唐利波，叶国富，易璇，陈成聪，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：