一种抗乙肝表面抗原的鲨源纳米抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗乙肝表面抗原的鲨源纳米抗体及其应用，该抗乙肝表面抗原的鲨源纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1～20任一序列所示；该抗体是用HBsAg蛋白对鲨鱼进行免疫，然后从条纹斑竹鲨的外周血白细胞中分离出总RNA，随后构建了一个抗HBsAg的VNAR噬菌展示体文库，并使用HBsAg展开了多轮噬菌体展示淘筛、分离出的，该抗体可与HBsAg结合，可作为检测乙型肝炎病毒的试剂、试剂盒等，实现快速、灵敏的检测乙型肝炎病毒。检测乙型肝炎病毒。

【技术实现步骤摘要】
一种抗乙肝表面抗原的鲨源纳米抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种抗乙肝表面抗原的鲨源纳米抗体及其应用。

技术介绍

[0002]免疫球蛋白新抗原受体(Immunoglobulin new antigen receptor,IgNAR)是最早从护士鲨(GingLymostoma cirratum)中分离出来的一类抗体分子。现阶段在软骨鱼纲(Chondricht hyes)中均有发现。由于进化造成的差异，IgNAR相比于常见的免疫球蛋白(Immunoglobul in，Ig)，例如IgG、IgM和IgE，在结构上有所不同。IgNAR分子有一个独特的抗原结合结构域，它与传统抗体中的结构域不同，仅由两条可变重链(VH)组成。重链之间以二硫键连接，形成一个V形结构。每条可变重链由五个恒定结构域和一个可变结构域组成。在鲨鱼血清中发现的IgNAR抗体由于其独特的结构特征和在生物技术中的潜在应用，在免疫学领域引起了广泛关注。鲨鱼IgNAR中的可变结构域被称为可变新抗原受体(Variable new antigen receptor,VNAR)，或"鲨鱼纳米抗体"。VNAR抗体代表了一种独特的抗体形式，具有独特的结构和功能特性。特别是在需要快速并准确地检测病毒的情况下，它们的稳定性、特异性和在生物技术中的潜在应用使它们成为诊断工具的一种理想选择。VNAR现已被用于检测一系列病毒和细菌病原体，包括埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)和霍乱毒素(Cholera toxin,CT)等。例如，研究人员开发了一种基于VNAR的诊断测定，可以检测低水平的埃博拉病毒的核蛋白，并具有高灵敏度和特异性。特别是在暴发或大流行时，这种检测方法有可能提高EBOV诊断的速度和准确性。就HBV而言，VNAR已被用于检测乙肝e抗原(HBeAg)，这是HBV感染早期阶段的标志。研究人员已经开发出一种基于VNARs的快速、高灵敏度的诊断测定，可以高度准确地检测血清样本中的HBeAg。在资源有限的环境中，传统的诊断方法可能无法随时使用，这种检测方法有可能改善HBV感染的诊断。VNARs还被用于检测霍乱毒素，并有着很高的准确度，这种方法的实际应用很有可能提升许多热带和亚热带发展中国家检测CT的速度和准确性。因此。使用鲨鱼衍生的VNARs作为病毒感染的诊断工具是一个有前途的研究领域，有许多应用。开发基于VNARs的快速、高灵敏度的诊断方法，有可能提高病毒诊断的速度和准确性，尤其在传统的诊断方法可能不容易使用的情况下。
[0003]乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝性的DNA病毒，能够通过免疫介导机制在人类中建立持久的慢性感染。尽管安全有效的疫苗已经问世了40多年，目前全球仍有3.9％的人口感染了HBV，这表明HBV仍然对公共卫生安全构成重大的威胁。HBV感染的临床表现是双重的，表现在从急性肝炎到各种形式的慢性感染，包括慢性肝炎、肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌。这些情况突出表明，仍然需要继续努力控制HBV的传播，快速准确地诊断HBV则是首要的任务。1968年，Blumberg及其同事发现了乙肝表面抗原(HBsAg)，是HBV感染诊断的一个重要里程碑。此后，HBsAg被广泛用作诊断标志物，成为慢性HBV感染血清学评估的标准工具。多年来，已经开发了几种检测HBsAg的商业方法，包括化学发光微粒子免疫测定法
(Chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA)等自动免疫测定法和最新一代高灵敏度的酶联免疫吸附测定法(enzyme
‑
linked immunosorbent assays,ELISAs)。在这些检测方法中，单克隆抗体作为检测方法的核心组分，能与样品中的HBsAg结合。它的使用实现了快速筛选和检测大量样本中的HBsAg，并且具有相当高的成本效益。
[0004]相关技术中如中国专利技术专利申请CN 115246881 A公开的一种抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段及其应用，涉及抗HBsAg鲨鱼单域抗体，可用于疾病诊断和急慢性疾病治疗药物研发，但其只做了包被抗体在10μg/mL和5μg/mL时的吸光度，并没有证明抗体的EC50和抗体的应用。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术提出一种抗乙肝表面抗原的鲨源纳米抗体及其应用，为实现快速、灵敏的检测乙型肝炎病毒提供依据。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术的实施例在第一方面提出了一种抗乙肝表面抗原的鲨源纳米抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1～20任一序列所示。
[0007]根据本专利技术实施例的一种抗乙肝表面抗原的鲨源纳米抗体，该抗体是用HBsAg蛋白对鲨鱼进行免疫，然后从条纹斑竹鲨的外周血白细胞(peripheral blood leukocytes,PBLs)中分离出总RNA，随后构建了一个抗HBsAg的VNAR噬菌展示体文库，并使用HBsAg展开了多轮噬菌体展示淘筛、分离出的，该抗体可与HBsAg结合，可作为检测乙型肝炎病毒的试剂、试剂盒等，实现快速、灵敏的检测乙型肝炎病毒。
[0008]根据本专利技术的实施例，在第二方面提出上述鲨源纳米抗体在制备检测乙型肝炎病毒的试剂中的应用。
[0009]可选地，所述鲨源纳米抗体与乙肝表面抗原特异性结合。
[0010]根据本专利技术的实施例，在第三方面提出上述鲨源纳米抗体在制备检测乙型肝炎病毒的试剂盒中的应用。
[0011]可选地，所述试剂盒为双抗夹心法ELISA试剂盒。
[0012]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0013]图1是本专利技术实施例的纯化后的纳米抗体：HB14、HB18、HB21的SDS
‑
PAGE考马斯亮蓝染色图；
[0014]图2是本专利技术实施例的HB14的ELISA结合特性检测图；
[0015]图3是本专利技术实施例的HB18的ELISA结合特性检测图；
[0016]图4是本专利技术实施例的HB21的ELISA结合特性检测图；
[0017]图5是本专利技术实施例的HBsAg特异性纳米抗体夹心ELISA检测图。
具体实施方式
[0018]以下通过特定的具体实例说明本专利技术的技术方案。应理解，本专利技术提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步
骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本专利技术可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更
技术实现思路
的情况下，当亦视为本专利技术可实施的范畴。
[0019]为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本专利技术的示例性实施例。虽然显示了本专利技术的示例性实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗乙肝表面抗原的鲨源纳米抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1～20任一序列所示。2.如权利要求1所述的鲨源纳米抗体在制备检测乙型肝炎病毒的试剂中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李增鹏，陈明谅，江谢瑞，
申请(专利权)人：自然资源部第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：