抗SARS-CoV-2抗体nCoV1和nCoV2及其应用制造技术

本发明专利技术涉及新的新型冠状病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
抗SARS
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CoV
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2抗体nCoV1和nCoV2及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫学和分子病毒学领域，本专利技术涉及抗新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的抗体或其抗原结合片段，以及包含所述抗体或其抗原结合片段的组合物，此外，还涉及所述抗体或其抗原结合片段的用途，包括用于检测新冠病毒。

技术介绍

[0002][0003]SARS
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CoV
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2属于冠状病毒科的β冠状病毒属，为单股正链RNA(核糖核酸)病毒，基因组非常小，约30KB，RNA病毒复制依赖于自身携带的RNA聚合酶，RNA聚合酶不具有核酸酶校对活性，因此其基因组在复制过程中核苷酸的错配率就比较高。因此，RNA病毒突变率很高。
[0004]早期诊断对于感染病人的及早发现至关重要。目前新型冠状病毒的诊断方法主要有：1)基于病毒核酸扩增的分子检测，2)抗原快速检测，和3)抗体检测。抗原检测不需要复杂设备，具有速度快、成本低的优点，而且便于居家自检。核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein，NP)是新冠病毒感染过程中含量最丰富的病毒结构蛋白，在病毒感染人体细胞后会大量表达，引起强烈的免疫反应。NP蛋白的基因序列相对保守稳定，与谱系上最接近的SARS
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CoV NP蛋白存在约90％的同一性，因为其良好的免疫原性和稳定性，NP蛋白常作为新冠病毒的检测靶标，进行新冠抗原检测，用于病例筛查。
[0005]一些携带关键位点突变的病毒变异株，如被世界卫生组织(WHO)列为“关注变异株”(variants of concern，VOC)的Alpha株(B.1.1.7)、Beta株(B.1.351)、Gamma株(P.1)、Delta株(B.1.617.2)和Omicron株(B.1.1.529)等，表现出更强的感染能力或更强的免疫逃逸能力，使现有的公共卫生干预措施或疫苗的有效性降低。作为新冠抗原检测的主要靶标，NP蛋白发生突变可能会影响抗原检测的灵敏度。面对全球不断出现的变异毒株，特别是奥密克戎毒株，需要进一步寻找针对新毒株灵敏度更高、特异性更强的NP抗体，确保变异株能够被检测出来，同时，由于新型冠状病毒NP蛋白与其他β属冠状病毒的NP蛋白具有极高同源性，会干扰NP抗体的特异性识别从而产生“假阳性”，因此也需要一种不与这些冠状病毒产生交叉反应的抗体。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种针对新毒株灵敏度更高、特异性更强且不与其他β属冠状病毒发生交叉反应的抗SARS
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CoV
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2抗体。
[0007]本专利技术第一方面提供一种抗体或其抗原结合片段，其与SARS
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CoV
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2NP蛋白特异性结合，所述抗体或其抗原结合片段的重链包括分别由SEQ ID NO:1
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3所示的重链可变区VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述抗体或抗原结合片段的轻链包括分别由SEQ ID NO:4
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6所示的轻链可变区VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，其中，SEQ ID NO:1所示序列为GYTFTSY；SEQ ID NO:2所示序列为YPGNGX1，其中X1为H或V；SEQ ID NO:3所示序列为FHYYGPX2DY，其中X2为L或
F；SEQ ID NO:4所示序列为RX3QX4ISNYLN，其中X3为AG或TS，X4为G或D；SEQ ID NO:5所示序列为YTSRLHS；SEQ ID NO:6所示序列为QQGNTLPRT。
[0008]进一步地，所述X1为H，所述X2为L，所述X3为AG，所述X4为G，该抗体或其抗原结合片段为nCoV1，并且所述VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1分别由SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9表示，所述抗体或抗原结合片段是由杂交瘤细胞F1G11产生的，所述杂交瘤细胞F1G11于2022年09月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.45315(请求保藏人为：深圳重链生物科技有限公司)。
[0009]进一步地，所述X1为V，所述X2为F，所述X3为TS，所述X4为D，该抗体或其抗原结合片段为nCoV2，并且所述VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1分别由SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12表示。
[0010]进一步地，所述抗体或抗原结合片段选自双功能抗体、Fab、F(ab')2、Fab'、Fd、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv
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dsFv')、二硫键稳定的双功能抗体(ds双功能抗体)、单链抗体分子(scFv)、scFv二聚体(二价双功能抗体)、多特异性抗体、单结构域抗体、纳米抗体、结构域抗体或二价结构域抗体中的任意一种。
[0011]进一步地，所述抗体或抗原结合片段还包含恒定区。
[0012]进一步地，所述抗体或抗原结合片段的恒定区选自IgM、IgD、IgG、IgA和IgE中的任意一种的恒定区。
[0013]进一步地，所述抗体或抗原结合片段的恒定区的种属来源为大鼠、小鼠、兔、山羊、绵羊、马、狗、牛、猪、鸡、鸭、鹅或人。
[0014]进一步地，所述抗体或抗原结合片段的恒定区来源于小鼠。
[0015]进一步地，所述抗体或抗原结合片段的重链可变区序列如SEQ ID NO：13所示，所述抗体或抗原结合片段的轻链可变区序列如SEQ ID NO：14所示。
[0016]进一步地，所述抗体或抗原结合片段的重链可变区序列如SEQ ID NO：15所示，所述抗体或抗原结合片段的轻链可变区序列如SEQ ID NO：16所示。
[0017]进一步地，所述抗体或抗原结合片段以10
‑8M或更小的KD结合SARS
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CoV
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2NP蛋白。
[0018]进一步地，所述抗体或抗原结合片段以小于100nM的EC50结合SARS
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CoV
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2NP蛋白，在一些实施方案中，以小于10nM的EC50结合SARS
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CoV
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2NP蛋白，在一些实施方案中，以小于1nM的EC50结合SARS
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CoV
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2NP蛋白，例如以0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM或更小的EC50结合SARS
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CoV
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2蛋白。
[0019]本专利技术第二方面提供一种杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞产生上述的单克隆抗体nCoV1，所述杂交瘤细胞于2022年09月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其与SARS
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CoV
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2NP蛋白特异性结合，所述抗体或其抗原结合片段的重链包括分别由SEQ ID NO:1
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3所示的重链可变区VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述抗体或抗原结合片段的轻链包括分别由SEQ ID NO:4
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6所示的轻链可变区VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，其中，SEQ ID NO:1所示序列为GYTFTSY；SEQ ID NO:2所示序列为YPGNGX1，其中X1为H或V；SEQ ID NO:3所示序列为FHYYGPX2DY，其中X2为L或F；SEQ ID NO:4所示序列为RX3QX4ISNYLN，其中X3为AG或TS，X4为G或D；SEQ ID NO:5所示序列为YTSRLHS；SEQ ID NO:6所示序列为QQGNTLPRT。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述X1为H，所述X2为L，所述X3为AG，所述X4为G，并且所述VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1分别由SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9表示，优选地，所述抗体或抗原结合片段是由杂交瘤细胞F1G11产生的，所述杂交瘤细胞F1G11于2022年09月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.45315。3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述X1为V，所述X2为F，所述X3为TS，所述X4为D，并且所述VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1分别由SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12表示。4.权利要求1
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3任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段选自双功能抗体、Fab、F(ab')2、Fab'、Fd、Fv、(dsFv)2、dsFv、dsFv
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dsFv'、二硫键稳定的双功能抗体、scFv、scFv...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚春喜，蔡立超，罗海涛，游梅香，武云波，全红花，
申请(专利权)人：珠海重链生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：