一种莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种莱姆重组融合蛋白OspC‑VlsE，其特征在于，所述重组融合蛋白OspC‑VlsE的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术利用基因工程重组技术，在大肠杆菌系统中表达重组融合蛋白OspC‑VlsE，具有生产周期短，产量高，成本低，特异性好的优点。本发明专利技术的重组融合蛋白可作为莱姆病重组蛋白检测试剂盒的一部分。

A Lyme recombinant fusion protein ospC vlsE and its application

【技术实现步骤摘要】
一种莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE及其应用
本专利技术涉及基因工程领域，特别是一种在大肠杆菌系统中表达重组莱姆OspC-VlsE的融合蛋白及其生产方法和应用。
技术介绍
莱姆病是一种蜱传播的人兽共患病，其病原体为伯氏疏螺旋体。莱姆病临床症状包括:游走性红斑，面神经麻痹，神经根炎，心脏病，关节炎和慢性萎缩性肢皮炎等，严重的导致终身残疾，甚至死亡。因为莱姆病的临床症状复杂多样，所以莱姆病的实验室辅助诊断尤为重要。莱姆病的实验室诊断主要依靠于血清学诊断方法，包括IFA、ELISA、WB等。用于莱姆病血清学诊断的抗原包括全菌抗原和重组抗原，全菌抗原在检测莱姆病时敏感度较高，但全菌蛋白在诊断过程中易与梅毒血清、钩端螺旋体血清有交叉反应，特异性较低。而莱姆病重组蛋白检测试剂盒可以在一定程度上提高莱姆病检测的特异性，有很好的应用前景。有不少研究报道指出，OspC(伯氏疏螺旋体外膜蛋白C)在宿主体内可以引起早期免疫反应，因此有研究者致力于利用OspC作为抗原用来诊断早期的莱姆病。早年，Hauser等培养了大量不同莱姆病的菌株，并从中提取了大量的OspC作为抗原，利用ELISA技术检测了222例莱姆病患者的血清和133例对照供血者的血清。其结果显示，有几株菌株间的IgG的检测灵敏度非常相似。目前看来，OspC作为伯氏疏螺旋体的主要抗原之一，OspC虽然具有比较大的差异，但其具有很强的特异性。因此，在诊断学临床应用中，将OspC作为诊断抗原，具有很大的临床优势。同时，如果将OspC与其他的抗原相结合，进行配伍诊断，那么这种诊断方法不仅能够提高诊断的灵敏度，还能减少与其他病原体的交叉反应。这将在将来莱姆病的诊断中显示出很强的优势与潜力。预计在今后的莱姆病防治中也会发挥一定的作用。本专利技术旨在将OspC与VlsE(变量主要蛋白样序列表达蛋白E)相结合，表达一种莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE，不仅能够提高诊断的灵敏度，还能减少与其他病原体的交叉反应。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE，此重组融合蛋白是利用基因工程重组技术，在大肠杆菌系统中表达，具有生产周期短，产量高，成本低的优点。本专利技术的莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE可做为莱姆病重组蛋白检测试剂盒的一部分。一种莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE，其特征在于，所述莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。SEQIDNO.1:NTSANSADESVKGPNLTEISKKITDSNAVLLAVKEVEALLSSIDEIAAKAIGKKIHQNNGLDTENNHNGSLLAGAYAISTLIKQKLDGLKNEGLKEKIDAAKKCSETFTNKLKEKHTDLGKEGVTDADAKEAILKTNGTKTKGAEELGKLFESVEVLSKAAKEMLANSVKELTSPVVAESPKKPGSGSGEGAIKEVSELLDKLVKAVKTAEGASSGTAAIGEVVADADAAKVADKASVKGIAKGIKEIVEAAGGSEKLKAVAAAKGENNKGAGKLFGKAGAAAHGDSEAASKAAGAVSAVSGEQILSAIVTAADAAEQDGKKPEEAKNPIAAAIGDKDGGAEFGQDEMKKDDQIAAAIALRGMAKDGKFAVKDGEKEKA。本专利技术还提供了编码SEQIDNO.1的莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE基因，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。SEQIDNO.2:AACACCAGCGCGAACAGCGCGGATGAAAGCGTGAAAGGCCCGAACCTGACCGAAATTAGCAAAAAAATTACCGATAGCAACGCGGTGCTGCTGGCGGTGAAAGAAGTGGAAGCGCTGCTGAGCAGCATTGATGAAATTGCGGCGAAAGCGATTGGCAAAAAAATTCATCAGAACAACGGCCTGGATACCGAAAACAACCATAACGGCAGCCTGCTGGCGGGCGCGTATGCGATTAGCACCCTGATTAAACAGAAACTGGATGGCCTGAAAAACGAAGGCCTGAAAGAAAAAATTGATGCGGCGAAAAAATGCAGCGAAACCTTTACCAACAAACTGAAAGAAAAACATACCGATCTGGGCAAAGAAGGCGTGACCGATGCGGATGCGAAAGAAGCGATTCTGAAAACCAACGGCACCAAAACCAAAGGCGCGGAAGAACTGGGCAAACTGTTTGAAAGCGTGGAAGTGCTGAGCAAAGCGGCGAAAGAAATGCTGGCGAACAGCGTGAAAGAACTGACCAGCCCGGTGGTGGCGGAAAGCCCGAAAAAACCGGGCAGCGGCAGCGGCGAAGGCGCGATTAAAGAAGTGAGCGAACTGCTGGATAAACTGGTGAAAGCGGTGAAAACCGCGGAAGGCGCGAGCAGCGGCACCGCGGCGATTGGCGAAGTGGTGGCGGATGCGGATGCGGCGAAAGTGGCGGATAAAGCGAGCGTGAAAGGCATTGCGAAAGGCATTAAAGAAATTGTGGAAGCGGCGGGCGGCAGCGAAAAACTGAAAGCGGTGGCGGCGGCGAAAGGCGAAAACAACAAAGGCGCGGGCAAACTGTTTGGCAAAGCGGGCGCGGCGGCGCATGGCGATAGCGAAGCGGCGAGCAAAGCGGCGGGCGCGGTGAGCGCGGTGAGCGGCGAACAGATTCTGAGCGCGATTGTGACCGCGGCGGATGCGGCGGAACAGGATGGCAAAAAACCGGAAGAAGCGAAAAACCCGATTGCGGCGGCGATTGGCGATAAAGATGGCGGCGCGGAATTTGGCCAGGATGAAATGAAAAAAGATGATCAGATTGCGGCGGCGATTGCGCTGCGCGGCATGGCGAAAGATGGCAAATTTGCGGTGAAAGATGGCGAAAAAGAAAAAGCG。本专利技术的第三个目的是提供含有莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE基因的重组载体，其特征在于，在质粒pET30a中包含有SEQIDNO.2核苷酸序列。本专利技术第四个目的是提供莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE的表达方法，其特征在于，包括步骤：1)构建莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE质粒：在质粒pET30a中插入SEQIDNO.2核苷酸序列；2)将步骤1的莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE质粒转化至大肠杆菌BL21，诱导表达莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE；表达时的诱导温度在37度，诱导转速为200rpm，诱导的IPTG浓度为1mM。本专利技术重组蛋白基因由人工合成。所用的载体为pET30a，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE，其特征在于，所述莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE，其特征在于，所述莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.编码SEQIDNO.1的莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE基因，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.一种含有莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE基因的重组载体，其特征在于，在质粒pET30a中包含有SEQIDNO.2核苷酸序列。


4.莱姆重组融合蛋白OspC-VlsE的表达方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：阮美丽，吴晓杰，吴银飞，
申请(专利权)人：杭州傲锐生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33