用于肺癌诊断的多分子标志物组合制造技术

本发明专利技术涉及用于肺癌诊断的多分子标志物组合。本发明专利技术揭示了一组肺癌联合标志物：肝细胞生长因子、C反应蛋白、催乳素、Wnt诱导信号通路蛋白1(WISP1)、印记位点结合因子(BORIS)、CA125、细胞角蛋白19片段以及癌胚抗原。在肺癌患者的血清中，这些蛋白质的表达显著高于非癌患者。这些标志物联合应用于临床诊断，可以显著提高诊断肺癌的准确度，并且能够检出肺癌早期患者。

Combination of multi molecular markers for diagnosis of lung cancer

The invention relates to a combination of a plurality of molecular markers for the diagnosis of lung cancer. The invention discloses a group of lung cancer combined with markers of hepatocyte growth factor, C reactive protein, Wnt, prolactin induced signaling pathway protein 1 (WISP1), imprinted loci (BORIS), CA125 binding factor, cytokeratin 19 fragment and carcinoembryonic antigen. In lung cancer patients, the expression of these proteins was significantly higher than that in non cancer patients. The combination of these markers in clinical diagnosis can significantly improve the accuracy of diagnosis of lung cancer, and can detect early lung cancer patients.

【技术实现步骤摘要】
用于肺癌诊断的多分子标志物组合
本专利技术属于疾病诊断
，更具体地，本专利技术涉及用于肺癌诊断的多分子标志物组合。
技术介绍
肺癌已连续多年成为全球人群中癌症相关死亡的首要原因，根据调查结果统计，在2015年中，中国有73,300例被确诊为肺癌，610,200例人群死于肺癌。肺癌的5年生存率大概在17％左右，且近几年总生存率并没有明显提高。由于缺乏早期诊断肺癌的有效方法，超过一半的患者在诊断时已经是晚期，因此失去切除的机会。临床上，对肺癌的检测仍依赖于CT、MR、PET等影像检测仪器，但实际上这些影像手段一般只能发现1-2cm以上的肿瘤，而肿瘤从病变到生长至1-2cm，一般要经过2-5年甚至更长的时间，因此，癌症早期漏诊率高达80-90％。目前，早期诊断肺癌的最简单的方法是通过验血寻找肿瘤标志物，特别是其中的蛋白标志。肺癌中常用的肿瘤标志物有神经元特异性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)以及前胃泌素释放肽(ProGRP)等。(1)神经特异性烯醇化酶(NSE)：烯醇化酶是一种糖酵解酶，普遍存在于哺乳动物的组织中，以系列同工酶二聚体的形式存在(αα、αβ、ββ、和γγ)。NSE为含γ亚基的同工酶，存在于神经内分泌细胞和神经源性肿瘤中(如小细胞肺癌、神经母细胞瘤、肠癌等)。小细胞肺癌(SCLC)是一种起源于神经内分泌细胞的肿瘤，因此NSE与SCLC关系密切，是小细胞肺癌的标记物。SCLC患者NSE阳性率约为60-80％，非小细胞肺癌患者阳性率<20％。因此，NSE有助于SCLC的诊断及其与NSCLC的鉴别诊断。NSE还是肺癌化疗效果观察和随访的有效指标，对化疗产生反应后此酶水平会下降，病情完全缓解后其可达正常水平。(2)细胞角蛋白19片段(CK19，Cyfra21-1)：Cyfra21-1是分子量约30kDa的上皮细胞角蛋白的可溶性成分之一，是一种非常好的鉴别肺良恶性疾病的标志物，尤其对肺鳞癌的检测效果更好。Cyfra21-1是相对较新的肿瘤标志物，临床上采用夹心酶联免疫吸附法，联合应用两种特异性单克隆抗体(ks19.1和bm19.21)检测血清中的细胞角蛋白19片段。Cyfra21-1存在于上皮起源的肿瘤细胞的胞浆中，当肿瘤细胞坏死后，可释放到血清中。免疫组织化学研究表明，肺癌中富含细胞角蛋白19片段，Cyfra21-1是NSCLC最灵敏的肿瘤标志物。因为Cyfra21-1只代表细胞角蛋白19一个片段，因此Cyfra21-1比组织多肽抗原(TPA)具有更高的特异性。研究表明，Cyfra21-1在肺鳞癌中的阳性率可高达80％，而且对肺癌的诊断有较高的特异性，它在肺良性疾病和健康人群血中的浓度很低，与性别、年龄以及吸烟习惯无关。Cyfra21-1的敏感性与肿瘤的组织学类型存在着一定的相关性，如肺鳞癌的敏感性为最高达76.5％、腺癌为47.8％、小细胞肺癌仅为42.1％。血清中Cyfra21-1的含量与肺鳞癌患者的病程呈正相关，根据肺癌的TNM分期，Ⅰ～Ⅳ期患者的敏感性分别为60.0％、88.8％、80％和100％。(3)前胃泌素释放肽(ProGRP)：ProGRP是一个相对稳定的激素胃泌素释放肽(GRP)的前体。人类的GRP主要存在于胃肠道、呼吸道以中枢神经系统中。一些研究认为，小细胞肺癌的肿瘤细胞释放GRP，并且GRP可能会刺激SCLC细胞生长。ProGRP作为SCLC的标志物，具有敏感性高(75.5％)、特异性强(97％)的特点。ProGRP水平和治疗反应也有较好的相关性，治疗后肿瘤完全消失的病人，ProGRP降至正常值范围，甚至测不出来长达一个月以上。国内外的研究表明，ProGRP对小细胞肺癌检测的敏感性、特异性和可靠性方面均优于NSE，敏感性和特异性高，阳性预测值和阴性预测值在90％以上，对局限期病变的阳性率也比NSE高，一定程度上提高了早期诊断可能性，而且对化疗后反应、疗效的评价、病程中病情监测和预后判定都提供了有价值的信息。(4)癌胚抗原(CEA)：CEA是一种存在于多种肿瘤细胞中的肿瘤抗原，肺癌细胞能直接产生CEA。CEA是最早发现的肺癌肿瘤标志物，也是目前肺癌诊断中最具代表性的肿瘤标志物，在腺癌与鳞癌中升高较明显。原发性肺癌患者血清CEA水平明显升高，对肺癌的诊断阳性率为40～60％，特别在肺腺癌中，阳性率及特异性较高。另外，CEA在肺癌早期的病人中阳性率较低，在肿瘤中晚期才有较显著的升高，因此CEA水平的动态变化能较好的反映患者对治疗的反应和预后。虽然上述这些肿瘤标志物已经被应用于临床中肺癌的筛查工作，但是这些生物标记的敏感度大约在40-60％，特别是早期癌症的诊断率很低。肺部肿瘤异质性的存在使得肺癌的诊断筛查难度增加，并且当肿瘤发展到不同阶段，不同病理分期的时候，肿瘤标志物也会随之改变，这也增加了诊断的难度。单一指标缺乏准确性，因此需要多项指标共同检测，从而提高诊断的特异性以及灵敏度。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供用于肺癌诊断的多分子标志物组合，以及在此基础上制备的用于诊断肺癌的芯片和试剂盒。在本专利技术的第一方面，提供一种蛋白标志物组合在制备诊断肺癌的试剂中的用途；所述的蛋白标志物组合包括：肝细胞生长因子(HGF)、C反应蛋白(CRP)、催乳素(Prolactin)、Wnt诱导信号通路蛋白1(WISP1)、印记位点结合因子(BORIS)、CA125、细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)以及癌胚抗原(CEA)。在一个优选例中，所述的肺癌是I～II期肺癌，或III～IV肺癌。在另一优选例中，所述的诊断肺癌包括：区分小细胞肺癌患者(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。在另一优选例中，所述的试剂还用于肺癌的治疗疗效的评估，较佳地以血清作为样本。在另一优选例中，所述的试剂是特异性识别或结合肝细胞生长因子(HGF)、C反应蛋白(CRP)、催乳素(Prolactin)、Wnt诱导信号通路蛋白1(WISP1)、印记位点结合因子(BORIS)、CA125、细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)、癌胚抗原(CEA)的抗体。在本专利技术的另一方面，提供一种用于诊断肺癌的芯片，所述的芯片包括：特异性识别或结合肝细胞生长因子(HGF)的抗体、特异性识别或结合C反应蛋白(CRP)的抗体、特异性识别或结合催乳素(Prolactin)的抗体、特异性识别或结合WISP1的抗体、特异性识别或结合BORIS的抗体、特异性识别或结合CA125的抗体、特异性识别或结合细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)的抗体、特异性识别或结合癌胚抗原(CEA)的抗体。在一个优选例中，所述的芯片是液相芯片，所述的特异性识别或结合肝细胞生长因子(HGF)的抗体、特异性识别或结合C反应蛋白(CRP)的抗体、特异性识别或结合催乳素(Prolactin)的抗体、特异性识别或结合WISP1的抗体、特异性识别或结合BORIS的抗体、特异性识别或结合CA125的抗体、特异性识别或结合细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)的抗体、特异性识别或结合癌胚抗原(CEA)的抗体被分别包被于具有特定识别信号(如颜色不同或编号不同)的微球上。在本专利技术的另一方面，提供所述的芯片的用途，用于制备诊断肺癌的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白标志物组合在制备诊断肺癌的试剂中的用途；所述的蛋白标志物组合包括：肝细胞生长因子、C反应蛋白、催乳素、Wnt诱导信号通路蛋白1、印记位点结合因子、CA125、细胞角蛋白19片段以及癌胚抗原。

【技术特征摘要】
1.一种蛋白标志物组合在制备诊断肺癌的试剂中的用途；所述的蛋白标志物组合包括：肝细胞生长因子、C反应蛋白、催乳素、Wnt诱导信号通路蛋白1、印记位点结合因子、CA125、细胞角蛋白19片段以及癌胚抗原。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肺癌是I～II期肺癌，或III～IV肺癌。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的诊断肺癌包括：区分小细胞肺癌患者和非小细胞肺癌。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的试剂是特异性识别或结合肝细胞生长因子、C反应蛋白、催乳素、Wnt诱导信号通路蛋白1、印记位点结合因子、CA125、细胞角蛋白19片段、癌胚抗原的抗体。5.一种用于诊断肺癌的芯片，其特征在于，所述的芯片包括：特异性识别或结合肝细胞生长因子的抗体、特异性识别或结合C反应蛋白的抗体、特异性识别或结合催乳素的抗体、特异性识别或结合Wnt诱导信号通路蛋白1的抗体、特异性识别或结合印记位点结合因子的抗体、特异性识别或结合CA125的抗体、特异性识别或结合细胞角蛋白19片段的抗体、特异性识别或结合癌胚抗原的抗体。6.如权利要求5所述的芯片，其特征在于，所述的芯片是液相芯片，所述的特异性识别或结合肝细胞生长因子的抗体、特异性识别或结合C反应蛋白的抗体、特异性识别...

【专利技术属性】
技术研发人员：王孝举，马胜林，王闻哲，张衍梅，汪成发，
申请(专利权)人：杭州金式麦生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33