杂交瘤细胞株及其分泌的抗赛洛西宾单克隆抗体和应用制造技术

本发明专利技术公开一种杂交瘤细胞株及其分泌的抗赛洛西宾单克隆抗体和应用。所述杂交瘤细胞株命名为PLCB

【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞株及其分泌的抗赛洛西宾单克隆抗体和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种杂交瘤细胞株及其分泌的抗赛洛西宾单克隆抗体和应用。

技术介绍

[0002]赛洛西宾(psilocybin)，又名裸盖菇素、光盖菇素、裸头草碱，化学式为C
12
H
17
N2O4P，是一种具有神经致幻作用的神经毒素。
[0003]研究发现赛洛西宾这种天然存在的致幻剂能通过增加大脑功能网络的链接，让难治性抑郁症患者产生治疗反应。抑郁症患者经常表现出“负性认知偏向”，其特征为悲观、认知灵活性差、僵硬的思维方式，以及对“自我”和未来的消极性固着，难治性抑郁症是指多个抗抑郁药物疗程也无法改善抑郁症状的重性抑郁障碍。多项临床试验报道了经赛洛西宾治疗后抑郁症状有所改善的试验结果，但是，赛洛西宾和相关致幻剂的治疗机制一直没有得到充分解释。赛洛西宾疗法具有快速、可观、持久的抗抑郁效果，疗效显著超过艾司西酞普兰。抑郁症状的缓解与大脑功能网络的连接增加显著相关。这些大脑模块结构的显著变化提示了赛洛西宾的迅速作用对脑功能具有一种“留存”效应。在使用艾司西酞普兰的患者身上没有观察到这种变化。由此说明，赛洛西宾(可能还有其他致幻剂)具有有别于传统抗抑郁药物的新的作用机制。具体而言，赛洛西宾疗法或能通过解放僵化的脑网络并刺激对心理健康有益的协调灵活的脑功能，起到缓解抑郁症状的作用。
[0004]非正常使用赛洛西宾危害较大，首先进入血液循环，再到达神经系统，然后激活5
‑
羟色胺受体，而引起神经兴奋作用。主要作用于自主神经，引起神经兴奋、致幻，对时间和空间产生错觉，直至出现自我歪曲，妄想和思维分裂等症状，严重的出现心动过速，瞳孔放大，排尿困难，但一般不会危及生命。
[0005]赛洛西宾也广泛存在于野生蘑菇中，很容易发生蘑菇中毒，且赛洛西宾是第一类精神药品，滥用其属于吸毒行为。
[0006]通过杂交瘤技术可以制备抗赛洛西宾杂交瘤细胞株。通过此杂交瘤细胞株制备出的抗体能用于制备胶体金免疫检测试纸条，实现了在现场对人员快速检测的要求。

技术实现思路

[0007]本专利技术的第一个目的是提供了一种分泌抗赛洛西宾单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株能产生高效价的抗赛洛西宾单克隆抗体。
[0008]一种分泌抗赛洛西宾的杂交瘤细胞株，命名为杂交瘤细胞株PLCB
‑
5.2.1，已于保藏于中国典型培养物保藏中心(China Center for Type Culture Collection，简称CCTCC)，保藏编号为CCTCC No.C2022364；中国典型培养物保藏中心的地址为：湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心(武汉大学第一附属小学对面)。
[0009]本专利技术采用小剂量肌肉注射免疫方法和尾静脉免疫相结合的方法，用人工合成的赛洛西宾抗原注射小鼠，获得免疫的小鼠脾细胞，进而将免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤
细胞融合，用赛洛西宾标准品进行筛选，从而获得所述杂交瘤细胞株。
[0010]赛洛西宾本身的分子量太小，其不具有免疫原性，即缺乏T细胞表位而无法直接诱导动物机体产生特异性抗体，因此本专利技术对赛洛西宾进行化学修饰，偶联BGG(牛血清丙种球蛋白)获得能诱导B细胞的增殖和分化继而产生特异性抗体的人工抗原(PLCB
‑
BGG)。所述的赛洛西宾分子结构式(I)所示：
[0011][0012]每次注射时，赛洛西宾人工抗原的使用量为25μg。
[0013]采用小剂量肌肉注射免疫方法和腹腔免疫相结合的方法免疫小鼠，免疫效价高。
[0014]本专利技术还提供了所述杂交瘤细胞株在制备用于检测赛洛西宾的试纸条中的应用。
[0015]本专利技术的第二个目的是提供一种抗赛洛西宾单克隆抗体，由上述杂交瘤细胞株PLCB
‑
5.2.1或其传代细胞株分泌产生。该抗体为IgG1型，轻链为kappa型。
[0016]本专利技术的第三个目的是提供上述抗赛洛西宾单克隆抗体在制备赛洛西宾检测试剂盒中的应用。
[0017]本专利技术所述的检测试剂盒为竞争抑制ELISA检测试剂盒；其内还含有赛洛西宾标准品和酶标二抗。由于赛洛西宾本身分子结构的限制，本专利技术的检测试剂盒是以竞争抑制ELISA原理制备的。使用时，先包被赛洛西宾标准品，再加入待测样品，然后依次加入所述抗抗赛洛西宾单克隆抗体、酶标二抗，进行反应，检测OD
450
值，计算竞争抑制率。赛洛西宾标准品的包被量以所述抗赛洛西宾单克隆抗体对赛洛西宾的检测阈值为宜。所述酶标二抗可选用羊抗鼠IgG
‑
HRP。
[0018]本专利技术所述的检测试剂盒为竞争型酶联免疫试剂盒；其内含有包被有抗赛洛西宾单克隆抗体的酶标板、赛洛西宾标准品、酶标抗原、底物和终止液。使用时，待检测样品和酶标记的赛洛西宾抗原一起加入酶标板反应，若样品中残留有赛洛西宾，则会与酶标赛洛西宾抗原竞争结合板上的抗体，再加入底物反应，终止显色。显色强度与样品中残留的赛洛西宾量成反比。根据赛洛西宾标准品做出的标准曲线，计算出样品中的赛洛西宾的含量。
[0019]本专利技术的第四个目的是提供上述抗赛洛西宾单克隆抗体在制备检测赛洛西宾的胶体金免疫检测试纸条中的应用。
[0020]本专利技术所述的用于检测赛洛西宾的胶体金免疫检测试纸条，包括样品垫、标记物垫、反应膜和吸样垫；所述标记物垫包被有胶体金标记的所述抗赛洛西宾单克隆抗体，所述反应膜的检测线(T线)处包被有赛洛西宾
‑
牛血清白蛋白复合物，所述反应膜的质控线(C线)处包被有二抗。
[0021]本专利技术的试纸条也是以竞争抑制ELISA原理制备的，赛洛西宾
‑
牛血清白蛋白复合
物的包被量也是以所述抗赛洛西宾单克隆抗体对赛洛西宾的检测阈值为宜。检测时，若只有C线显色，表示待测样品中含有赛洛西宾且检测赛洛西宾的含量高于检测限；若C线和T线均显色，表示待测样品中检测赛洛西宾的含量低于检测阈值，或待测样品中无赛洛西宾；若C线和T线均不显色，表示试纸条已经失效。
[0022]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0023]本专利技术利用PLCB
‑
BGG免疫小鼠，利用免疫的小鼠脾细胞制备获得杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的抗赛洛西宾单克隆抗体效价高，特异性强，可用于对赛洛西宾进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。
[0024]杂交瘤细胞株PLCB
‑
5.2.1，已于2020年6月3日保藏于中国典型培养物保藏中心(China Center for Type Culture Collection，简称CCTCC)，保藏编号为CCTCC No.C2022364；中国典型培养物保藏中心的地址为：湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心(武汉大学第一附属小学对面)。
附图说明
[0025]图1为本专利技术一种赛洛西宾胶体金检测试纸条的结构示意图。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分泌抗赛洛西宾的杂交瘤细胞株，其特征在于，命名为杂交瘤细胞株PLCB
‑
5.2.1，保藏编号为CCTCC No.C2022364。2.权利要求1所述的分泌抗赛洛西宾的杂交瘤细胞株在制备用于检测赛洛西宾的试纸条中的应用。3.一种抗赛洛西宾单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。4.根据权利要求3所述的一种抗赛洛西宾单克隆抗体，其特征在于，所述抗体为IgG1型，轻链为kappa型。5.权利要求3所述的抗赛洛西宾单克隆抗体在制备赛洛西宾检测试剂盒中的应用。6.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：应祺，俞思，吴银飞，
申请(专利权)人：杭州傲锐生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：