杂交瘤细胞、单克隆抗体、试剂和试剂盒制造技术

本申请涉及一种杂交瘤细胞、单克隆抗体、试剂和试剂盒。该杂交瘤细胞的保藏编号为：CCTCC NO：C2022108，其可分泌抗P4HB蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体与P4HB蛋白的亲和力高，能够用于食管鳞状细胞癌的诊断，且能够提高食管鳞状细胞癌的早期检出率。高食管鳞状细胞癌的早期检出率。高食管鳞状细胞癌的早期检出率。

【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞、单克隆抗体、试剂和试剂盒


[0001]本申请涉及生物医学检测领域，特别是涉及一种杂交瘤细胞、单克隆抗体、试剂和试剂盒。

技术介绍

[0002]食管是连接口咽和胃部的一条肌性管状结构，发生在食管黏膜上皮的恶性肿瘤就是食管癌，是一种十分常见的消化道恶性肿瘤。在全球范围内，目前食管癌的发病率和死亡率均排在前十位，且近年来食管癌等食管疾病逐渐呈现出上升的趋势，严重威胁着人类的生命健康。
[0003]食管癌有两种类型，即食管腺癌和食管鳞状细胞癌。虽然食管癌的主要类型是食管腺癌，但食管鳞状细胞癌的比例也达到了30％，对人类健康的影响不容小觑。与其他恶性肿瘤类似，食管鳞状细胞癌同样也是治疗越早，治疗效果越好。但食管鳞状细胞癌早期的症状并不明显，且至今仍没有能作为食管鳞状细胞癌早期诊断“金标准”的检测手段，导致早期对食管鳞状细胞癌的确诊有困难，易错过最佳治疗时机。

技术实现思路

[0004]基于此，本申请提供一种杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞的保藏编号为：CCTCCNO：C2022108，其可分泌抗P4HB蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体与P4HB蛋白的亲和力高，能够用于食管鳞状细胞癌的诊断，且能够提高食管鳞状细胞癌的早期检出率。
[0005]此外，还提供一种单克隆抗体、试剂和试剂盒。
[0006]一种可分泌抗P4HB蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCC NO：C2022108。
[0007]一种单克隆抗体，所述单克隆抗体上述杂交瘤细胞分泌。
[0008]上述杂交瘤细胞或上述单克隆抗体在制备诊断食管鳞状细胞癌的产品中的应用。
[0009]一种诊断食管鳞状细胞癌的试剂，所述试剂包括上述单克隆抗体。
[0010]在其中一个实施例中，所述试剂还包括可与单克隆抗体结合的标记抗体。
[0011]在其中一个实施例中，所述标记抗体上连接有标记物，所述标记物包括三联吡啶钌、吖啶酯、辣根过氧化物酶、丙酮酸激酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、荧光素、生物素或胶体金中的至少一种。
[0012]在其中一个实施例中，所述标记抗体为IgG抗体。
[0013]一种诊断食管鳞状细胞癌的试剂盒，所述试剂盒包括以上任一实施例所述的试剂。
[0014]在其中一个实施例中，所述试剂盒用于执行以下至少一种检测方法：免疫组织化学法、免疫印迹法、酶联免疫吸附测定法、放射性免疫分析法、免疫扩散法、流式细胞荧光分选法。
[0015]在其中一个实施例中，所述试剂盒检测的样本包括组织样本。
附图说明
[0016]图1为实施例1中筛选的杂交瘤细胞株的定株结果图；
[0017]图2为实施例3中鉴定实施例2中制备得到的单克隆抗体的亚类和亚型的结果示意图；
[0018]图3为实施例3中对实施例2中纯化的单克隆抗体的SDS
‑
PAGE凝胶电泳结果示意图；
[0019]图4为实施例3中检测实施例2中纯化的单克隆抗体亲和力的实验结果示意图；
[0020]图5为实施例4中1例Ⅰ期食管鳞状细胞癌患者及其癌旁组织的染色结果图；
[0021]图6为实施例4中6例Ⅱ期食管鳞状细胞癌患者及其癌旁组织的染色结果图；
[0022]图7为实施例4中2例Ⅲ期食管鳞状细胞癌患者及其癌旁组织的染色结果图。
具体实施方式
[0023]为使本申请的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本申请的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本申请。但是本申请能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下做类似改进，因此本申请不受下面公开的具体实施例的限制。
[0024]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请。
[0025]本文所述的“杂交瘤细胞”是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征的细胞。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞。脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞，从而可以筛选得到杂交瘤细胞。
[0026]所述的“抗体”又称为免疫球蛋白，是一种由B淋巴细胞分泌的大型Y形蛋白质，能够特异性结合靶抗原的免疫球蛋白分子，上述靶抗原包括蛋白质、糖类、多核苷酸、脂质、多肽或小分子化合物。
[0027]本申请一实施方式提供了一种可分泌抗P4HB蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCC NO：C2022108。
[0028]该杂交瘤细胞为小鼠杂交瘤细胞3B1D9，于2022年5月18日保藏于在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)并于2022年5月22日由该保藏中心鉴定为存活，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。该杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCC NO：C2022108，分类命名：杂交瘤细胞株3B1D9。
[0029]基于上述，本申请一实施方式还提供了一种单克隆抗体，该单克隆抗体由上述杂交瘤细胞分泌。
[0030]将上述保藏编号为CCTCC NO：C2022108的杂交瘤细胞产生的单克隆抗体记为3B1D9，该单克隆抗体与P4HB蛋白的亲和力高，识别并结合P4HB蛋白的灵敏度高，且特异性好，用于诊断食管鳞状细胞癌时能够提高早期检出率。
[0031]本申请一实施方式还提供了一种上述杂交瘤细胞或上述单克隆抗体在制备诊断食管鳞状细胞癌的产品中的应用。
[0032]本申请一实施方式提供了一种诊断食管鳞状细胞癌的试剂，该试剂包括上述单克隆抗体。
[0033]在其中一个实施例中，上述单克隆抗体可以不标记标记物。例如将该单克隆抗体作为包被抗体应用于食管鳞状细胞癌的检测试剂中，具体例如：作为ELISA中的包被抗体。
[0034]在其中一个实施例中，上述试剂还包括可结合单克隆抗体的标记抗体，该标记抗体作为二抗用于捕获上述特异性结合P4HB的单克隆抗体。
[0035]在其中一个实施例中，上述标记抗体连接有标记物，该标记物包括三联吡啶钌、吖啶酯、辣根过氧化物酶、丙酮酸激酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、荧光素、生物素或胶体金中的至少一种。
[0036]在其中一个实施例中，所述标记物为辣根过氧化物酶。
[0037]在其中一个实施例中，所述标记抗体为IgG抗体。
[0038]此外，本申请一实施方式还提供了一种诊断食管鳞状细胞癌的试剂盒，该试剂盒包括以上任一实施例所述的试剂。
[0039]在其中一个实施例中，上述试剂盒用于执行以下至少一种检测方法：免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可分泌抗P4HB蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于，所述杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCC NO：C2022108。2.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞分泌。3.权利要求1所述的杂交瘤细胞或权利要求2所述的单克隆抗体在制备诊断食管鳞状细胞癌的产品中的应用。4.一种诊断食管鳞状细胞癌的试剂，其特征在于，所述试剂包括如权利要求2所述的单克隆抗体。5.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于，所述试剂还包括可与单克隆抗体结合的标记抗体。6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于，所述标记抗体连接有标记物，所述标记...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建和，刘兵，马亮，韩文超，董俊军，邓联武，
申请(专利权)人：广州六顺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：