分泌抗草鱼IL-4/13B单克隆抗体的杂交瘤细胞株及单克隆抗体和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种分泌抗草鱼IL

【技术实现步骤摘要】
分泌抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体的杂交瘤细胞株及单克隆抗体和应用


[0001]本专利技术属于免疫应用
，具体涉及一种分泌抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体的杂交瘤细胞株及单克隆抗体和应用，即草鱼白介素
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4/13B(GCIL
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4/13B)重组蛋白和单克隆抗体的制备方法及应用。抗体为分泌抗草鱼IL
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4/13B胞外单克隆抗体杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。

技术介绍

[0002]草鱼(Grass Carp,GC)是我国最重要的经济鱼类之一，也是全球养殖产量最高的淡水鱼类之一。近年来随着养殖规模的不断扩大，再加上水体生态环境持续恶化，病害已成为阻碍草鱼养殖发展的关键问题。因此首要目的是解决养殖过程中出现的疾病，而机体的免疫系统对于抵抗外界病原体等具有重要作用。
[0003]Th2免疫是宿主对后生动物病原体的主要防御途径，在哺乳动物中，参与这种免疫反应的两种重要细胞因子是白细胞介素
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4(interleukin
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4，IL
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4)和白细胞介素
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13(interleukin
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13，IL
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13)。IL
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4和IL
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13均为活化的T细胞分泌的细胞因子，作为可以调节免疫系统的重要组成部分，在提高机体抵抗力方面具有一定的作用，可以作为一种免疫佐剂提高疫苗的免疫保护效果；除此之外，IL
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4/IL
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13还能限制炎症反应扩大，进而保护机体不受过度炎症反应带来的损伤，在抵御病原微生物入侵的免疫应答反应中发挥着重要作用；另外，IL
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4/IL
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13能够调控Th2细胞的分化和增殖，抑制能够分泌促炎症细胞因子的Th1细胞分化和增殖。这些结果均表明IL
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4/IL
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13在调节先天和适应性免疫应答中充当重要角色。
[0004]在硬骨鱼类中，IL
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4/13尚未分化形成两个单独的基因，由于基因组复制事件或局部复制事件形成了IL
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4/13A和IL
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4/13B两个基因亚型。在先前研究中，科研工作者围绕着IL
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4和IL
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13基因开展了许多有关Th2免疫反应的起源和进化的研究，目的是了解这一免疫反应在脊椎动物中发挥的重要作用，但在鱼类中关于IL
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4/13的相关研究并不多。目前对鱼类的研究主要集中在基因结构、转录组分析等方面，而对蛋白质水平的结构知之甚少，其主要原因在于缺乏相应的高质量单克隆抗体。因此，本领域迫切需要建立高亲和力、高特异性的IL
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4/13单克隆抗体，使用IL
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4/13单克隆抗体检测草鱼组织和血清中IL
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4/13的表达水平。了解鱼类体内的IL
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4/13细胞因子对Th2细胞增殖、分化的意义，这不仅可以为从水生生物到陆生生物形成免疫系统的重要进化事件提供线索，还能为加强鱼类免疫系统寻找新的策略发挥关键作用，对于炎症性疾病的防治具有潜在的应用价值。
[0005]之前已有研究通过分析草鱼IL
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4/13B氨基酸序列的特征，选择了一段含有14
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20个氨基酸残基序列的多肽用于制备草鱼IL
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4/13B的多克隆抗体。但多克隆抗体在研究中存在许多缺陷，主要是因为其能够识别多个抗原表位，靶蛋白可在多个表位上结合不止一个抗体分子，导致它们会识别出与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白质，产生大量非特异性抗体，有时可能在某些抗体应用中产生背景信号。这会给一些实验结果造成不利影响，导致
结果不准确。随着单克隆抗体技术的发展，逐渐克服了多克隆抗体的缺陷。
[0006]单克隆抗体杂交瘤技术是血清学研究的高度精确手段，通过将能分泌抗体的B细胞与能无限培养的骨髓瘤细胞进行体外诱导融合，得到既能够分泌抗体又能在体外长期培养和保存的杂交瘤细胞。具有纯度高、特异性强、重复性好等优点。已有的人源IL
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4和IL
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13的单克隆抗体，由于其氨基酸序列与草鱼的IL
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4/13同源性较低，无法识别抗原表位，故人源IL
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4和IL
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13的单克隆抗体无法作为有效检测抗体用于鱼类相关研究。因此，迫切需要制备高亲和力、高特异性的草鱼源IL
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4/13单克隆抗体，为监测草鱼组织和血清中IL
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4/13的表达水平提供有效手段，为研究草鱼Th2细胞的增殖、分化和功能奠定基础。
[0007]单克隆抗体也有缺点，例如对技术有一定的要求，单克隆抗体经过抗原的化学处理后比多克隆抗体更易于丢失表位。

技术实现思路

[0008]针对现有技术中的不足，本专利技术的目的是提供一种分泌抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体的杂交瘤细胞株及单克隆抗体和应用。在单克隆抗体制备过程中可在细胞融合后多筛选几株阳性杂交瘤细胞系，通过筛选同一抗原的两个或多个单克隆抗体进行补偿的方法来克服现有技术中的缺点。
[0009]为达到上述目的，本专利技术的解决方案是：
[0010]第一方面，本专利技术提供了一种分泌抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株GC5IL
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4/13B已于2022年8月17日保藏在位于湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2022213。
[0011]第二方面，本专利技术提供了一种上述的杂交瘤细胞株分泌的抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体，其特异性识别草鱼IL
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4/13B的原核表达产物、真核表达产物及胞外表达功能区蛋白。
[0012]优选地，抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体的亚型为IgG。
[0013]第三方面，本专利技术提供了上述的杂交瘤细胞株在制备诊断、预防或治疗与草鱼IL
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4/13B蛋白质的表达相关的疾病中的应用。
[0014]第四方面，本专利技术提供了上述的抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体在制备诊断、预防或治疗与草鱼IL
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4/13B蛋白质的表达相关的疾病中的应用。
[0015]第五方面，本专利技术提供了上述的抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体在制备检测草鱼IL
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4/13B蛋白质的表达相关的试剂、药物或试剂盒中的应用。
[0016]第六方面，本专利技术提供了一种检测草鱼IL
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4/13B蛋白质的表达相关的试剂、药物或试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分泌抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述杂交瘤细胞株已于2022年8月17日保藏在武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2022213。2.一种由权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌的抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体，其特征在于：其特异性识别草鱼IL
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4/13B表达的重组蛋白。3.根据权利要求2所述的抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体，其特征在于：所述抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体的亚型为IgG。4.一种如权利要求2所述的抗草鱼IL
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4/13B单克隆抗体的应用，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俊亚，肖贺贺，邹钧，运胜冉，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：