一种用于生物样本DNA的处理液及其使用方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种用于生物样本DNA的处理液及其使用方法和应用。具体地说，本发明专利技术提供了一种用于生物样本DNA的处理液，包含酒石酸钠、甲酰胺、二甲基亚砜、氯化锂、三(2

【技术实现步骤摘要】
一种用于生物样本DNA的处理液及其使用方法和应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学检测，尤其涉及一种用于生物样本(例如唾液或口腔拭子样本)DNA的处理液及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]生物样品的核酸扩增检测在扩增之前需要保持生物样品中DNA的完整性，否则将降低检测的灵敏性，甚至造成无法扩增而导致假阴性，尤其是在无法为生物样品提供低温保存和运输条件的情况下，生物样品扩增之前DNA完整性保持带来了巨大的挑战。
[0003]另外，生物样品的核酸扩增检测通常需要从所述样品中提取核酸并纯化，这是非常耗时可能引起核酸污染。针对这些问题，目前已经提出一种在无需提取核酸的情况下直接检测生物样品中的核酸的技术，这项技术被称为分子直扩技术。
[0004]例如，CN 112662779A公开了一种直接扩增检测口腔肿瘤基因生存相关的引物组、试剂盒及其方法，但是该方法需要对组织样本进行蛋白酶K消化和过柱纯化等步骤。CN 111500735A公开了一种免提取直接扩增及检测高发肿瘤易感基因多态性的引物组和探针、试剂盒及其方法，但是这种方法还存在无法进行远途运输，否则导致灵敏度低等问题。
[0005]本专利技术针对上述问题，提供了一种用于生物样本尤其是唾液样本或拭子样本DNA的处理液，采用该处理液对生物样本进行处理，可以在常温下保存和运输，所获得的液体可以用于核酸的直接扩增检测。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术的目的是提供一种适用于唾液和拭子的DNA处理液及其在核酸检测中的应用，尤其是在核酸直接扩增检测中的应用。
[0007]本专利技术在第一方面提供了一种用于生物样本DNA的处理液，所述处理液包含：酒石酸钠、甲酰胺、二甲基亚砜、氯化锂、三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐、Gemini表面活性剂、Brij 58和水。
[0008]本专利技术在第二方面提供了一种处理生物样本DNA的方法，所述方法采用本专利技术第一方面所述的处理液进行处理。
[0009]本专利技术在第三方面提供了本专利技术第一方面所述的处理液在核酸检测中的应用。
[0010]相对于现有技术，本专利技术具有如下技术优点：
[0011]本专利技术针对生物样本(例如唾液样本和拭子样本)提供的处理液可以在常温下长期保存生物样本，而且无需进行核酸提取或纯化即可进行核酸检测，极大地简化样本的前处理，缩短了检测时间，降低了检测成本低，而且本专利技术方法操作简便，应用前景广阔。
附图说明
[0012]图1为来自拭子样本的混合物直接扩增检测的扩增曲线图。
[0013]图2为来自拭子样本的DNA提取物扩增检测的扩增曲线图。
[0014]图3为来自唾液样本的混合物直接扩增检测的扩增曲线图。
[0015]图4为来自唾液样本的DNA提取物扩增检测的扩增曲线图。
具体实施方式
[0016]如上所述，本专利技术在第一方面提供了一种用于生物样本DNA的处理液，所述处理液包含：酒石酸钠、甲酰胺、二甲基亚砜、氯化锂、三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐、Gemini表面活性剂、Brij 58和水。
[0017]本专利技术的处理液可以快速裂解唾液和拭子中的细胞、释放DNA，且结合大部分PCR抑制剂，同时可以在室温下保存DNA不被降解。该处理液结合“裂解”、“释放”和“保存”三个功能。
[0018]在一些优选的实施方式中，所述处理液包含：1
‑
100mM酒石酸钠、1
‑
20％甲酰胺、5
‑
50％二甲基亚砜、5
‑
200mM氯化锂、1
‑
20mM三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐、0.01
‑
1％Gemini表面活性剂、0.01
‑
5％Brij 58和余量的水。
[0019]在一些更优选的实施方式中，所述处理液包含：2
‑
20mM酒石酸钠、2
‑
10％甲酰胺、10
‑
40％二甲基亚砜、20
‑
200mM氯化锂、1
‑
5mM三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐、0.02
‑
1％Gemini表面活性剂、0.05
‑
2％Brij 58和余量的水。
[0020]在一些更进一步优选的实施方式中，所述DNA处理液包含：8mM酒石酸钠、2.5％甲酰胺、25％二甲基亚砜、150mM氯化锂、2.5mM三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐、0.2％Gemini表面活性剂、1％Brij 58和余量的水。
[0021]其中，所述甲酰胺、二甲基亚砜、Gemini表面活性、Brij 58的百分比(％)为质量体积比(即质量/体积％)。
[0022]在一些优选的实施方式中，所述处理液的pH为7.0
‑
13.5，优选为7.5
‑
11.5，更优选为8.0
‑
9.5，进一步优选为8.5。
[0023]在一些更优选的实施方式中，本专利技术的所述处理液可以快速裂解并释放唾液样本或拭子样本中人类细胞的基因组DNA，并且可以在室温下长期储存DNA。所述DNA处理液包含：8mM酒石酸钠、2.5％甲酰胺、25％二甲基亚砜、150mM氯化锂、2.5mM三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐、0.2％Gemini表面活性剂、1％Brij58和余量的水。并且pH为8.5。
[0024]其中，所述酒石酸钠可以螯合金属离子，抑制细胞裂解后释放的核酸酶活性，以减少DNA的降解。
[0025]其中，所述甲酰胺和二甲基亚砜组合可以增加细胞膜的通透性，以助于Gemini表面活性剂为主的试剂能有效快速裂解细胞，并抑制核酸酶的活性。
[0026]其中，所述氯化锂可以增加快速裂解细胞的能力，令人意外的是，所述氯化锂的浓度在一定程度上提供了细胞裂解的速度，且对长期保存DNA是有利的。
[0027]其中，所述三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐简称为TCEP
‑
HCl，其有助于打开细胞膜表面蛋白的二硫键，有利于快速裂解细胞，释放核酸。同时TCEP
‑
HCl可以破坏细核酸酶的二硫键，减弱其活性，与酒石酸钠配合可以抑制超过90％的DNA酶的活性，优选可以抑制超过99％的DNA酶的活性。
[0028]在本专利技术的DNA处理液中，所述TCEP
‑
HCl、Brij 58与Gemini表面活性剂协同作用，可以快速裂解细胞释放DNA，并且Gemini表面活性剂可以快速结合细胞中的蛋白杂质，如血
红蛋白、细胞碎片、蛋白等，使其不会抑制DNA聚合酶的活性。
[0029]在一些优选的实施方式中，所述Gemini表面活性剂选自十八烷基胺聚氧乙烯醚双季铵盐、十六醇聚氧乙烯醚二甲基辛烷基氯化铵、辛烷基聚氧乙烯基十四本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于生物样本DNA的处理液，其特征在于，所述处理液包含：酒石酸钠、甲酰胺、二甲基亚砜、氯化锂、三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐、Gemini表面活性剂、Brij 58和水。2.根据权利要求1所述的处理液，其特征在于：所述处理液包含：1
‑
100mM酒石酸钠、1
‑
20％甲酰胺、5
‑
50％二甲基亚砜、5
‑
200mM氯化锂、1
‑
20mM三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐、0.01
‑
1％Gemini表面活性剂、0.01
‑
5％Brij58和余量的水；优选的是，所述处理液包含：2
‑
20mM酒石酸钠、2
‑
10％甲酰胺、10
‑
40％二甲基亚砜、20
‑
200mM氯化锂、1
‑
5mM三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐、0.02
‑
1％Gemini表面活性剂、0.05
‑
2％Brij 58和余量的水；更优选的是，所述DNA处理液包含：8mM酒石酸钠、2.5％甲酰胺、25％二甲基亚砜、150mM氯化锂、2.5mM三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐、0.2％Gemini表面活性剂、1％Brij 58和余量的水；其中，以百分比表示的比例为质...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹永龙，曲峰，何宗顺，张佳斌，
申请(专利权)人：苏州白垩纪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：