核酸提取或纯化试剂和方法技术

本发明专利技术涉及核酸提取或纯化试剂和方法。具体地说，本发明专利技术涉及一种裂解结合液，所述裂解结合液包含Tris

【技术实现步骤摘要】
核酸提取或纯化试剂和方法


[0001]本专利技术涉核酸提取试剂领域，尤其涉及多生物样本类型的总核酸提取试剂。

技术介绍

[0002]核酸是各类生命的最基本物质之一，不仅起着储存和传递遗传信息的作用，在生长、遗传、变异等一系列重大生命现象中也起着决定性的作用。自1869年瑞士物理学家Friedrich Miescher首次从白细胞中分离出核酸以来，全球各国的研究者们在核酸提取和纯化方法上进行了不懈的研究探索。核酸提取的传统方法包括酚抽提法、碱裂解法、CTAB抽提法、煮沸法等。自1979年Vogelstein和Gillespie首次将玻璃纤维用于回收琼脂糖凝胶中的DNA片段以来，以固相载体为基础的新型核酸提取方法便被发展起来，包括吸附膜离心柱提取法、玻璃珠吸附法及磁珠提取法。
[0003]磁珠提取法依据与吸附膜离心柱提取法相似的原理，在磁珠表面修饰可以吸附核酸的特定官能团，通过不同的溶液环境，达到裂解、结合、洗涤和洗脱的目的。同时利用磁珠自身的磁学性质，在外磁场的作用下可以方便的实现定向移动与富集，从而达到核酸与杂质分离的目的，进而实现对目标物质的分离纯化，获得纯化核酸。该技术能够从动植物组织、体液、培养细胞、环境等样本中分离获得高纯度的核酸，磁珠提取法在临床分子诊断方面有很多优势：容易实现自动化、高通量操作；操作简单、用时短，无需反复离心等操作；不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒试剂，安全无毒；磁珠与核酸的特异性结合使得其有非常高的核酸提取效率，更能满足临床分子诊断对于某些检测灵敏度要求非常高的项目需求。
>[0004]随着磁珠提取法的不断发展，基于磁珠法技术的核酸提取也变得多种多样，但是不同的磁珠修饰方式、不同的核酸吸附环境等，对于磁珠法提取核酸的效率和稳定性有较大的影响，这也是造成市面上的磁珠法核酸提取产品虽然数量非常多，但其质量却良莠不齐的原因之一。现在市场上缺乏一款对于多种生物样本类型的总核酸提取(基因组DNA、病毒DNA、病毒RNA共提取)比较好的磁珠法核酸提取或纯化试剂，此外，现有市场上的核酸提取或纯化试剂绝大部分依旧采用裂解
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结合
‑
清洗
‑
洗脱四个步骤，裂解完成后需要额外加入结合液才能进行磁珠与核酸的结合，不易实现自动化高通量。
[0005]中国专利CN112226432公开了一种磁珠法快速核酸提取试剂盒，，操作快速简便，手动操作仅需要5分钟即可完成一次提取过程，且样本裂解之后无需加入结合液，只需要转移磁珠，实现了仪器自动化高通量的需求，但其试剂盒只能应用于鼻咽拭子样本中的病毒核酸，限制了进一步应用。
[0006]中国专利CN106244583公开了一种磁珠法核酸提取方法，可以用于全血、细胞培养物、细菌培养物，拭子、组织、唾液等生物样本的核酸，但从
技术实现思路
发现只适合上述多种样本类型的基因组DNA提取，不能应用于病毒核酸的提取，且样本裂解完后后需要额外加入结合液进行核酸和磁珠的绑定，不易于自动化高通量的操作。
[0007]综上所述，虽然现有技术中不能提供一种能处理多生物样本类型的总核酸提取磁珠法核酸提取试剂，样本裂解完成后无需再添加结合液进行核酸和磁珠的结合，适用于自
动化高通量仪器。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是提供一种核酸提取或纯化试剂，本专利技术所提供磁珠法核酸提取试剂操作简单、快捷，可以提取多种类型的生物样本的总核酸(基因组DNA、病毒DNA、病毒RNA共提取)。
[0009]为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术在第一方面提供了一种裂解结合液，所述裂解结合液包含：Tris
‑
HCl、盐酸胍、高氯酸钠、氯化铵、EDTA
‑
Na2、Brij 30、聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物和水。
[0010]在一些优选的实施方式中，所述裂解结合液包含：20
‑
600mM Tris
‑
HCl、1
‑
5M盐酸胍、1
‑
10M高氯酸钠、100
‑
500mM氯化铵、1
‑
50mM EDTA
‑
Na2、0.1
‑
20％Brij 30、0.1
‑
20％的聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物和余量的水，并且所述裂解结合液的pH为5.0
‑
8.5。
[0011]在另一些优选的实施方式中，所述裂解结合液包含：50
‑
500mM Tris
‑
HCl、2
‑
4M盐酸胍、1
‑
5M高氯酸钠、100
‑
300mM氯化铵、5
‑
50mM EDTA
‑
Na2、0.5
‑
10％Brij 30，0.1
‑
10％的聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物和余量的水，并且所述裂解结合液的pH为6.0
‑
8.0。
[0012]在另一些优选的实施方式中，所述裂解结合液包含：100
‑
200mM Tris
‑
HCl、2
‑
3M盐酸胍、2
‑
5M高氯酸钠、100
‑
200mM氯化铵、10
‑
40mM EDTA
‑
Na2、1
‑
5％Brij 30，0.2
‑
2％的聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物和余量的水，并且所述裂解结合液的pH为6.5；
[0013]在另一些优选的实施方式中，所述裂解结合液包含100mM Tris
‑
HCl、3M盐酸胍、3M高氯酸钠、100mM氯化铵、10mM EDTA
‑
Na2、2％Brij 30，0.25％的分子量为4400的聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物和余量的水，所述裂解结合液的pH为6.5。
[0014]本专利技术的裂解结合液中，Tris
‑
HCl可以提供pH稳定的缓冲环境，维持核酸磷酸基团的电荷状态，对DNA碱基起保护作用。
[0015]盐酸胍是破坏蛋白质三维结构的离液剂，能够快速破坏细胞膜或病毒，释放核酸，使蛋白质变性，从而让核酸能够摆脱蛋白质的缠绕，同时盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂，可以使核酸酶活性减缩，抑制核酸酶活性。
[0016]高氯酸钠与盐酸胍类似，也是一种蛋白变性剂，同时提供了大量的一价阳离子(钠离子)建立了核酸的磷酸根与磁珠硅羟基表面的盐桥。
[0017]EDTA
‑
Na2是一种二价离子螯合剂，能够螯合Mg
2+
或Ca
2+
等二价阳离子，抑制金属依赖性的酶如DNase和RNase的活性，能够抑制核酸酶对裂解后游离暴露出来核酸的降解，从而减少核酸的降解。
[0018]本专利技术的聚乙二醇—本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种裂解结合液，其特征在于，所述裂解结合液包含：Tris
‑
HCl、盐酸胍、高氯酸钠、氯化铵、EDTA
‑
Na2、Brij 30、聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物和水。2.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于：所述裂解结合液包含：20
‑
600mM Tris
‑
HCl、1
‑
5M盐酸胍、1
‑
10M高氯酸钠、100
‑
500mM氯化铵、1
‑
50mM EDTA
‑
Na2、0.1
‑
20％Brij 30、0.1
‑
20％的聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物和余量的水，并且所述裂解结合液的pH为5.0
‑
8.5；优选的是，所述裂解结合液包含：50
‑
500mM Tris
‑
HCl、2
‑
4M盐酸胍、1
‑
5M高氯酸钠、100
‑
300mM氯化铵、5
‑
50mM EDTA
‑
Na2、0.5
‑
10％Brij 30，0.1
‑
10％的聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物和余量的水，并且所述裂解结合液的pH为6.0
‑
8.0；更优选的是，所述裂解结合液包含：100
‑
200mM Tris
‑
HCl、2
‑
3M盐酸胍、2
‑
5M高氯酸钠、100
‑
200mM氯化铵、10
‑
40mM EDTA
‑
Na2、1
‑
5％Brij30，0.2
‑
2％的聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物和余量的水，并且所述裂解结合液的pH为6.5；进一步优选的是，所述裂解结合液包含100mM Tris
‑
HCl、3M盐酸胍、3M高氯酸钠、100mM氯化铵、10mM EDTA
‑
Na2、2％Brij 30，0.25％的分子量为4400的聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物和余量的水，所述裂解结合液的pH为6.5。3.根据权利要求1或2所述的裂解结合液，其特征在于：所述聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物分子量为2000
‑
20000；优选的是，所述聚乙二醇—聚丙二醇—聚乙二醇嵌段共聚物分子量为4000
‑
10000。4.一种核酸提取或纯化试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于配制权利要求1至3中任一项所述的裂解结合液的试剂。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于配制磁珠悬浮液的试剂、用于配制清洗液的试剂和用于配制洗脱液的试剂。6.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于：所述磁珠悬浮液包含分散液和质量体积百分数为5
‑
20％的、粒径为0.1
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10μm的超顺磁性硅颗粒，所述磁珠悬浮液的pH为4.0
‑
8.0，所述分散液包含10
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50体积％的PEG300和余量的水；优选的是，所述磁珠悬浮液包含分散液和质量体积百分数为10
‑
15％的、粒径为0.5
‑
5μm的超顺磁性硅颗粒，所述磁珠悬浮液的pH为5.0
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6.0，所述分散液包含20体积％的PEG300和余量的水；更优选的是，所述磁珠悬浮液包含分散液和质量体积百分数为15％的、粒径为0.5
‑
5μm的超顺磁性硅颗粒，所述磁珠悬浮液的pH为5.0，所述分散液包含20体积％的PEG300和余量的水；所述第一通用清洗液包含10
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100mM Tris
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HCl，10
‑
200...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹永龙，张佳斌，田付友，曲峰，何宗顺，
申请(专利权)人：苏州白垩纪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：