一种用于磁珠法血液制造技术

本发明专利技术涉及一种用于磁珠法血液

【技术实现步骤摘要】
一种用于磁珠法血液DNA快速提取的裂解结合液、包括该裂解液的试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉核酸提取试剂领域，尤其涉及一种裂解结合液及其在核酸提取中的应用
。

技术介绍

[0002]核酸是各类生命的最基本物质之一，不仅起着储存和传递遗传信息的作用，在生长
、
遗传
、
变异等一系列重大生命现象中也起着决定性的作用
。
[0003]基因组
DNA
提取是
PCR
扩增
、
文库构建和测序工作的基础，临床工作中常用的标本包括血液
、
器官组织和脱落细胞
、
唾液和口腔拭子，其中血液样本使用最为广泛
。
[0004]核酸提取的传统方法包括酚抽提法
、
碱裂解法
、CTAB
抽提法
、
煮沸法等
。
自
1979
年
Vogelstein
和
Gillespie
首次将玻璃纤维用于回收琼脂糖凝胶中的
DNA
片段以来，以固相载体为基础的新型核酸提取方法便被发展起来，包括吸附膜离心柱提取法
、
玻璃珠吸附法及磁珠提取法
。
[0005]与吸附膜离心柱提取法相比，磁珠提取法具有良好的表面效应和体积效应，磁珠表面积激增，微球官能团密度和选择性吸附能力大大增加，导致磁珠的吸附平衡时间缩短
。
此外磁珠的物理和化学性质稳定，能耐受一定浓度的酸碱溶液和微生物降解，具有一定的生物相容性，不会对生物体造成明显的伤害
。
[0006]磁珠提取法提取
DNA
目前在临床上已得到广泛的应用
。
然而不同厂家的磁珠法核酸提取法其效率差别很大，存在
DNA
提取试剂操作方法复杂，提取用时长，获得的
DNA
浓度和纯度不够高的问题
。
此外，全血样本类型也非常复杂，干扰核酸提取的物质多，除了冷冻的全血样本外，临床新鲜全血比例也非常高，经常有报道很多市场上试剂盒对于临床新鲜全血的提取效果较差
。
[0007]中国专利
CN114317522A
公开了一种全血液
DNA
提取试剂盒及核酸提取方法，包括裂解液
、
第一漂洗液
、
第二漂洗液
、
洗脱液，还包括红细胞裂解液和蛋白酶
K
缓冲液
。
其方法首先使用红细胞裂解液对血液样本的红细胞裂解，然后离心留下白细胞沉淀，随后使用蛋白酶
K
和裂解液进行加热裂解
。
接着使用磁珠和无水乙醇进行结合，然后经过三次清洗，挥发除醇，最后加热洗脱
。
该方法步骤繁琐，无法直接对全血样本进行提取，也无法实现高通量自动化过程
。
[0008]中国专利
CN104017800B
公开了一种全血液
DNA
提取试剂盒及方法
。
所述试剂盒包括红细胞裂解液
、
白细胞洗涤液
、
消化液
、
蛋白酶
K、
纯化液
、gDNA
盐析液
、gDNA
洗涤液及
gDNA
洗脱液等
。
该专利技术不仅含有红细胞裂解液，同时使用氯化锂进一步纯化
。
该方法能够得到高纯度的
DNA
，但是，操作繁琐，费时费力
。
[0009]综上所述，虽然现有技术中不能提供一种快速并简便的针对全血样本的核酸提取试剂，无需蛋白酶
K、
红细胞裂解或离心沉淀白细胞的步骤
。
因此，开发一种全血样本直接裂解并且样本裂解完成后无需再额外添加结合液和磁珠，适用于冷冻全血和临床新鲜全血样
本的自动化高通量的方法对未来的基因检测是非常必要的
。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的是提供一种快速核酸提取试剂盒，本专利技术所提供快速核酸提取试剂盒可以针对全血样本直接上机，操作简单
、
快捷，可以提取到高浓度和纯度的
DNA。
[0011]为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术在第一方面提供了一种裂解结合液，所述裂解结合液包含：马来酸钠
、
盐酸胍
、
高氯酸钠
、
氯化铵
、Brij 30、Gemini
表面活性剂
、
聚丙二醇
。
[0012]本专利技术在第二方面提供了一种核酸提取试剂盒，所述核酸试剂盒包括用于配制本专利技术第一方面所述的裂解结合液的裂解结合液用试剂
。
[0013]本专利技术在第三方面提供了一种从生物样本中提取或纯化核酸的方法，所述方法采用本专利技术第一方面所述的裂解结合液或本专利技术第二方面所述试剂盒进行提取或纯化
。
[0014]本专利技术在第四方面提供了本专利技术第一方面所述的裂解结合液或本专利技术第二方面所述的试剂盒在生物样本尤其是全血样本例如冷冻全血样品或新鲜全血样品
(
如临床新鲜全血样本
)
的核酸提取中的应用
。
[0015]相对于现有技术，本专利技术具有如下有益的技术效果：
[0016](1)
提供一种全血样本的快速核酸提取试剂盒，可以配套自动化化核酸提取仪实现快速高通量的核酸提取或纯化
。
[0017](2)
本专利技术提供的技术方案中第二清洗液不含易挥发的乙醇或者异丙醇，无需进行醇的挥发控干，节约流程的时间，减少了气溶胶的污染
。
[0018](3)
本专利技术提供的技术方案不含蛋白酶
K
，操作更为方便，成本更低
。
[0019](4)
本专利技术提供的技术方案的裂解结合一步进行，可以直接上机操作
。
[0020](5)
本专利技术提供的技术方案对于冷冻全血和临床新鲜全血都具有良好的提取效果
。
附图说明
[0021]图1是本专利技术实施例2中本专利技术试剂盒与
Qiagen
公司
QIAamp DNA mini Kits
针对6份冷冻全血和6份临床肿瘤患者的新鲜全血的提取
DNA
的凝胶电泳图
。
具体实施方式
[0022]下面结合实施例对本申请进行进一步的介绍
。
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，在下述说明中，不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例
。
不同实施例之间可以替换或者合并组合，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种裂解结合液，所述裂解结合液包含：马来酸钠
、
盐酸胍
、
高氯酸钠
、
氯化铵
、Brij 30、Gemini
表面活性剂
、
聚丙二醇和水
。2.
根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于：所述裂解结合液包含：
50
‑
500mM
马来酸钠
、1
‑
8M
盐酸胍
、1
‑
8M
高氯酸钠
、50
‑
500mM
氯化铵
、0.1
‑
20
％
Brij 30、0.2
‑
20
％的
Gemini
表面活性剂
、5
‑
30
％的聚丙二醇和余量的水，并且所述裂解结合液的
pH
为
5.0
‑
9.0
；其中，
Brij 30、Gemini
表面活性剂和聚丙二醇的浓度以质量体积百分比计；优选的是，所述裂解结合液包含：
50
‑
200mM
马来酸钠
、1
‑
5M
盐酸胍
、2
‑
6M
高氯酸钠
、100
‑
300mM
氯化铵
、0.5
‑
10
％
Brij 30、0.5
‑
10
％的
Gemini
表面活性剂
、10
‑
25
％的聚丙二醇和余量的水，并且所述裂解结合液的
pH
为
5.5
‑
8.5
；进一步优选的是，所述裂解结合液包含：
75
‑
175mM
马来酸钠
、1.5
‑
4.5M
盐酸胍
、2
‑
5M
高氯酸钠
、150
‑
250mM
氯化铵
、1
‑5％
Brij 30、1
‑8％的
Gemini
表面活性剂
、12.5
‑
22.5
％的聚丙二醇和余量的水，并且所述裂解结合液的
pH
为7‑
8.5
；更进步与优选的是，所述裂解结合液包含
125mM
马来酸钠
、4M
盐酸胍
、5M
高氯酸钠
、200mM
氯化铵
、2.5
％
Brij 30、2.5
％的
Gemini
表面活性剂
、20
％的聚丙二醇和余量的水，并且所述裂解结合液的
pH
为
8.5。3.
根据权利要求1或2所述的裂解结合液，其特征在于：所述的
Gemini
表面活性剂选自十八烷基胺聚氧乙烯醚双季铵盐
、
十六醇聚氧乙烯醚二甲基辛烷基氯化铵
、
辛烷基聚氧乙烯基十四烷基氯化铵
、
辛烷基聚氧乙烯基十二烷基氯化铵
、
乙撑基双
(
十六酰胺丙基二甲基溴化铵
)、
十二醇聚氧乙烯醚二甲基辛烷基氯化铵
、
十二醇聚氧乙烯醚基二甲基十二烷基溴化铵中的一种或任意几种的组合；优选的是，所述
Gemini
表面活性剂为十二醇聚氧乙烯醚二甲基辛烷基氯化铵
。4.
根据权利要求1至3中任一项所述的裂解结合液，其特征在于，所述聚丙二醇分子量为
200
‑
20000
；优选的是，所述聚丙二醇分子量为
500
‑
10000
；更优选的是，所述聚丙二醇分子量为
1000
‑
8000
；进一步优选的是，所述聚丙二醇分子量为
4000。5.
一种核酸提取试剂盒，其特征在于：所述核酸试剂盒包括用于配制权利要求1至4中任一项所述的裂解结合液的裂解结合液用试剂；优选的是，所述裂解结合液用试剂由如下组分组成：
(i)
马来酸钠
、
盐酸胍
、
高氯酸钠
、
氯化铵
、Brij 30、Gemini
表面活性剂和聚丙二醇；或者
(ii)
马来酸钠
、
盐酸胍
、
高氯酸钠
、
氯化铵
、Brij 30、Gemini
表面活性剂
、
聚丙二醇和用于将
(i)
中的组分配制成所述裂解结合液的水
。6.
根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试剂盒还包括：用于配制磁珠悬浮液的磁珠悬浮液用试剂；用于配制清洗液的清洗液用试剂；和
/
或用于配制洗脱液的洗脱液试剂
。7.
根据权利要求6搜所述的试剂盒，其特征在于：所述磁珠悬浮液包含分散液和质量体积百分数为2‑
20
％的
、
粒径为
0.1
‑
10
μ
m
的超顺磁性硅颗粒，所述磁珠悬浮液的
pH
为
4.0
‑
7.0
，所述分散液包含
0.05
‑
0.2M
氯化钠
、0.01
‑
0.05
％
NaN3和余量的水，其中所述超顺磁性硅颗粒在磁珠悬浮液中的量以质量体积百分数计；优选的是，所述磁珠悬浮液包含分散液和质量体积百分数为5‑
10
％的
、
粒径为
0.5
‑5μ
m
的超顺磁性硅颗粒，所述磁珠悬浮液的
pH
为
5.0
‑
6.0
，所述分散液包含
0.05
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹永龙，张佳斌，何宗顺，田付友，曲峰，
申请(专利权)人：苏州白垩纪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：