【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉核酸提取试剂领域，尤其涉及真菌dna提取用裂解结合液、试剂盒和提取方法及其应用。
技术介绍
1、真菌感染是临床常见的疾病之一。对人类有致病性的真菌约有300多种。根据侵犯人体部位的不同，临床上将致病真菌分为浅部真菌和深部真菌。浅部真菌仅侵犯皮肤、毛发和指甲，而深部真菌能侵犯黏膜、深部组织和内脏，甚至引起全身播散性感染。
2、近年来，随着高效广谱抗生素、免疫抑制剂和抗恶性肿瘤药物的广泛应用，器官移植以及外科其他介入性治疗的深入开展，特别是aids的出现，条件致病性真菌引起的系统性真菌病日益增多，新的致病菌不断出现，对免疫力低下的患者尤其是icu患者的病情带来严重负担。
3、真菌感染的实验室检查是包括直接镜检法和培养法、病理学方法、血清学方法和分子生物学方法等检查方法。目前，临床常见真菌检测方法主要是通过形态学进行观察，但该方法培养时间长，受人员经验影响比较大，且形态比较接近的真菌难以通过该方法鉴定到种。因此，通过分子生物学方法(核酸检测)进行真菌鉴定显得越来越重要。
4、然而，真菌细胞壁成分复杂，往往难以得到充分裂解，且真菌中富含多糖、色素、核酸酶等物质，使得真菌dna的提取更加困难，从而限制了分子鉴定方法的应用。因此，探索临床常见真菌高效、快速的dna提取方法十分重要。
5、传统的真菌dna提取方法步骤繁琐，且耗时较长，不符合真菌分子快速鉴定方法的需求。如中国专利cn102102098b一种改良的酚-氯仿法提取真菌dna方法，通过液氮研磨与酚-氯仿试剂法结合，其本质是增
6、因此，在临床端需要高效且具有可操作性的真菌dna的快速提取方法，可以直接使用临床端的样本(如全血、血浆、肺泡灌洗液和痰液等)，无需液氮研磨、无需离心、无需酚氯仿等有毒试剂，能够在30分钟左右就能得到高纯度的dna样本以用于后续的检测，例如用于qpcr检测。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种利用医院临床端样本直接快速提取真菌dna的试剂和方法，这样的试剂和方法无需离心，无需液氮研磨，不使用有毒试剂，裂解结合一步进行，操作简单、快捷，可以适用于高通量的提取，适用于医院临床样本(如全血、血浆、肺泡灌洗液和痰液等)中痕量真菌dna提取。
2、为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术在第一方面提供了一种用于真菌dna提取的裂解结合液，所述裂解结合液包含如下组分：高碘酸钠、盐酸胍、作为可选组分的尿素、氯化锂、gemini(双子)季铵盐、聚氧乙烯辛烷基苯酚醚、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、聚乙二醇和异丙醇。
3、本专利技术在第二方面提供了一种用于真菌dna提取的试剂盒，所述试剂盒包括用于配制本专利技术第一方面所述的裂解结合液的裂解结合试剂。
4、本专利技术在第三方面提供了一种从样本中提取真菌dna的方法，所述方法采用本专利技术第一方面所述的裂解结合液或本专利技术第二方面所述的试剂盒进行。
5、本专利技术在第四方面提供了本专利技术第一方面所述的裂解结合液或本专利技术第二方面所述的试剂盒在真菌dna提取中的应用。
6、相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
7、(1)本专利技术提供一种样本(例如临床样本，如全血、血浆、肺泡灌洗液和痰液等)中痕量真菌dna的快速提取方法，裂解和结合一步法，适合自动化高通量操作。
8、(2)本专利技术无需液氮研磨、离心或珠研磨等繁琐的步骤，操作简单快捷。
9、(3)本专利技术适用样本类型广，核酸提取纯度高，真菌dna提取效率高。
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1.一种用于真菌DNA提取的裂解结合液，其特征在于，所述裂解结合液包含如下组分：高碘酸钠、盐酸胍、作为可选组分的尿素、氯化锂、Gemini(双子)季铵盐、聚氧乙烯辛烷基苯酚醚、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、聚乙二醇和异丙醇。
2.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，所述裂解结合液还包含余量的水。
3.根据权利要求1或2所述的裂解结合液，其特征在于：
4.根据权利要求1至3中任一项所述的裂解结合液，其特征在于：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的裂解结合液，其特征在于：
6.一种用于真菌DNA提取的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于配制权利要求1至5中任一项所述的裂解结合液的裂解结合试剂。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括如下试剂中的至少一种：(1)蛋白酶K；(2)用于配制磁珠悬浮液的磁珠悬浮试剂；(3)用于配制清洗液的清洗试剂；和(4)用于配制洗脱液的洗脱试剂；
8.一种从样本中提取真菌DNA的方法，其特征在于，所述方法采用权利要求1至5中任一项所述
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
10.权利要求1至5中任一项所述的裂解结合液或权利要求6或7所述的试剂盒在真菌DNA提取中的应用；优选的是，所述真菌DNA提取采用医院临床样本进行提取；另外优选的是，述真菌DNA提取采用选自全血、血浆、肺泡灌洗液和痰液中的一种样本进行提取。
...【技术特征摘要】
1.一种用于真菌dna提取的裂解结合液，其特征在于，所述裂解结合液包含如下组分：高碘酸钠、盐酸胍、作为可选组分的尿素、氯化锂、gemini(双子)季铵盐、聚氧乙烯辛烷基苯酚醚、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、聚乙二醇和异丙醇。
2.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，所述裂解结合液还包含余量的水。
3.根据权利要求1或2所述的裂解结合液，其特征在于：
4.根据权利要求1至3中任一项所述的裂解结合液，其特征在于：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的裂解结合液，其特征在于：
6.一种用于真菌dna提取的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于配制权利要求1至5中任一项所述的裂解结合液的裂解结合试剂。
【专利技术属性】
技术研发人员：邹永龙，曲峰，何宗顺，张佳斌，王子珵，
申请(专利权)人：苏州白垩纪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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