一种磁珠法提取DNA的提取试剂盒和提取方法技术

本发明专利技术提供了一种磁珠法提取DNA的提取试剂盒和提取方法。所述提取试剂盒包括：用于配制裂解结合液、磁珠悬浮液、第一清洗液、第二清洗液和洗脱液的试剂，其中用于配制所述裂解结合液的试剂包括马来酸、N

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法提取DNA的提取试剂盒和提取方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种磁珠法提取DNA的提取试剂盒和提取方法。

技术介绍

[0002]从生物样品中提取DNA不仅是分子生物学和基因组学上普遍用到的一种常规操作，也是法医学、流行性疾病等领域经常用到的一种技术。
[0003]从生物样品中提取DNA的方法主要有液相法和固相法。其中的固相法是使核酸被结合到固相载体上并对杂质进行选择性洗脱从而完成提取，通常包括裂解、结合、吸附、清洗、洗脱等步骤。
[0004]目前公开的固相法还存在一些技术问题。例如，在裂解步骤需要蛋白酶K和加热，否则裂解不够充分，导致DNA得率低；提取时间长，导致提取效率低；裂解和结合需要分布进行，自动化程度低；清洗液含有醇类溶剂，需要挥发除醇步骤等。
[0005]例如，CN108220281A公开了一种含有结合核酸的磁珠在生物样品保存液的制备和运用，较为系统性地考虑了唾液样本保存和核酸提取之间的关系，但该保存液得到的DNA浓度较低，且其中所使用的保存液含有蛋白酶K，而蛋白酶K的室温活性会不可避免地逐渐降低，导致本身样本保存液的保质期较短，长期保存DNA的能力也是会受到很大的影响。
[0006]又例如，CN113736772A公开了一种唾液DNA提取的方法，需要蛋白酶K和裂解液对唾液样本预处理，然后加入磁珠和醇进行结合，之后经过清洗和洗脱，该方案步骤繁琐，自动化程度低。
[0007]综上所述，现有技术中还公开没有能够提供一种上样量大(＞400μL)，全核酸提取过程裂解和洗脱无需加热，且所有核酸提取试剂组分不含有挥发醇的高灵敏度、快速磁珠法病毒RNA提取试剂，以满足现在大规模核酸筛查的需求。
[0008]此外，一方面由于对本领域技术人员的理解存在差异；另一方面由于申请人做出本专利技术时研究了大量文献和专利，但篇幅所限并未详细罗列所有的细节与内容，然而这绝非本专利技术不具备这些现有技术的特征，相反本专利技术已经具备现有技术的所有特征，而且申请人保留在
技术介绍
中增加相关现有技术之权利。

技术实现思路

[0009]为了解决现有技术上的一个或多个上述技术问题，本专利技术在第一方面提供了一种用于通过磁珠法提取DNA的提取试剂盒，其特征在于，所述提取试剂盒包括：
[0010](1)用于配制裂解结合液的第一试剂；
[0011](2)用于配制磁珠悬浮液的第二试剂；
[0012](3)用于配制第一清洗液的第三试剂；
[0013](4)用于配制第二清洗液的第四试剂；
[0014](5)用于配制洗脱液的第五试剂；
[0015]其中，所述第一试剂包括马来酸、N
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丁基双胍盐酸盐、碘化钠、酒石酸钠、十二烷基苯磺酸钠和Brij 30和的聚(乙二醇)
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聚(丙二醇)
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聚(乙二醇)三嵌段共聚物。
[0016]本专利技术的由所述第一试剂配制的裂解结合液，无需蛋白酶K和加热，即可对生物样品进行充分裂解。而且，裂解和结合一步进行，特别适合于自动化操作。
[0017]在一些实施方式中，所述提取试剂盒还包括水，以用于配制提取所需的含水液体，例如所述裂解结合液或洗脱液。当然，所述提取试剂盒也可以不包含水，在配制例如所述裂解结合液或洗脱液时，可以另外提供。
[0018]在一些优选的实施方式中，所述聚(乙二醇)
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聚(丙二醇)
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聚(乙二醇)三嵌段共聚物的分子量为2000至6000(例如为3000、4000或5000)，优选为3000。
[0019]在一些优选的实施方式中，所述第二试剂包括如下组分或由如下组分组成：纳米磁珠和PEG400。
[0020]在一些进一步优选或另外优选的实施方式中，所述第三试剂包括如下组分或由如下组分组成：Tris
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HCl、盐酸胍和乙醇。当然，作为一些常规的试剂例如常规有机溶剂乙醇，也可以另外提供，不一定非得包括在所述提取试剂盒中。不过为了方便配制，所述第三试剂优选包括乙醇。
[0021]在一些进一步优选或另外优选的实施方式中，所述第四试剂包括如下组分或由如下组分组成：Tris
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HCl，氯化钠和甘油。类似的，当然，所述第四试剂中的例如甘油，也可以另外提供，不一定非得包括在所述提取试剂盒中。同样的，不过为了方便配制，所述第四试剂优选包括甘油。利用所述第二试剂配制的第二清洗液无需使用乙醇或异丙醇，无需挥发除醇。
[0022]在一些进一步优选或另外优选的实施方式中，所述第五试剂包括如下组分或由如下组分组成：Tris
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HCl。换言之，所述第五试剂包括Tris
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HCl或者由Tris
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HCl组成。
[0023]不难理解的是，所述第一试剂、所述第二试剂、所述第三试剂、所述第四试剂和所述第五试剂中的两种以上试剂在包括有相同组分的情况下在所述提取试剂盒中所述相同组分全部包装在一起或有至少一部分分开包装。例如，所述第三试剂、第四试剂和所述第五试剂都包括Tris
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HCl，那么配制第三至第五试剂的Tris
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HCl可以分装成专用于配制相应液体的Tris
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HCl，也可以包装在一起，配制时再从中量用即可。
[0024]在一些优选的实施方式中，所述裂解结合液由或者仅由所述第一试剂和水配制而成；所述磁珠悬浮液由或者仅由所述第二试剂和水配制而成；所述第一清洗液由或者仅由所述第三试剂配制而成；所述第二清洗液由或者仅由所述第四试剂配制而成；和/或所述洗脱液由或者仅由所述第五试剂和水配制而成。其中，所述裂解结合液、所述磁珠悬浮液、所述第一清洗液、所述第二清洗液和所述洗脱液中的至少一种液体在所述提取试剂盒中以即用溶液(所含组分的浓度为使用浓度的溶液)形式存在、以比即用溶液的浓度高的浓缩液(使用时可以稀释至使用浓度来使用)形式存在、或有至少一种所包含的试剂以未配成所述即用溶液或浓缩液之前的试剂(例如以商购获得的试剂的形式存在)的形式存在。
[0025]在一些优选的实施方式中，所述裂解结合液包含：10
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100mM(例如20、50或80nM)马来酸、2
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5M(例如3或4M)N
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丁基双胍盐酸盐、0.1
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0.5M(例如0.2、0.3或0.4M)碘化钠、20
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50mM(例如30或40nM)酒石酸钠、0.1
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1％(例如0.2、0.5或0.8％)的十二烷基苯磺酸钠、1
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5％(例如2、3或4％)Brij 30和10
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50％(例如20、30或40％)的聚(乙二醇)
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聚(丙二醇)
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聚
(乙二醇)三嵌段共聚物。
[0026]在一些更优选的实施方式中，所述裂解结合液包含：100m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于通过磁珠法提取DNA的提取试剂盒，其特征在于，所述提取试剂盒包括：(1)用于配制裂解结合液的第一试剂；(2)用于配制磁珠悬浮液的第二试剂；(3)用于配制第一清洗液的第三试剂；(4)用于配制第二清洗液的第四试剂；(5)用于配制洗脱液的第五试剂；(6)可选的水；其中，所述第一试剂包括马来酸、N
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丁基双胍盐酸盐、碘化钠、酒石酸钠、十二烷基苯磺酸钠和Brij 30和聚(乙二醇)
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聚(丙二醇)
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聚(乙二醇)三嵌段共聚物。2.根据权利要求1所述的提取试剂盒，其特征在于：所述第二试剂包括如下组分或由如下组分组成：纳米磁珠和PEG400；所述第三试剂包括如下组分或由如下组分组成：Tris
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HCl、盐酸胍和乙醇；所述第四试剂包括如下组分或由如下组分组成：Tris
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HCl，氯化钠和甘油；和/或所述第五试剂包括如下组分或由如下组分组成：Tris
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HCl；其中，所述第一试剂、所述第二试剂、所述第三试剂、所述第四试剂和所述第五试剂中的两种以上试剂在包括有相同组分的情况下在所述提取试剂盒中所述相同组分全部包装在一起或有至少一部分分开包装。3.根据权利要求1或2所述的提取试剂盒，其特征在于：(1)所述裂解结合液由或者仅由所述第一试剂和水配制而成；(2)所述磁珠悬浮液由或者仅由所述第二试剂和水配制而成；(3)所述第一清洗液由或者仅由所述第三试剂配制而成；(4)所述第二清洗液由或者仅由所述第四试剂配制而成；和/或(5)所述洗脱液由或者仅由所述第五试剂和水配制而成；其中，所述裂解结合液、所述磁珠悬浮液、所述第一清洗液、所述第二清洗液和所述洗脱液中的至少一种液体在所述提取试剂盒中以即用溶液形式存在、以比即用溶液的浓度高的浓缩液形式存在、或有至少一种所包含的试剂以未配成所述即用溶液或浓缩液之前的试剂的形式存在。4.根据权利要求1至3中任一项所述的提取试剂盒，其特征在于；所述裂解结合液包含：10
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100mM马来酸、2
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5M N
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丁基双胍盐酸盐、0.1
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0.5M碘化钠、20
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50mM酒石酸钠、0.1
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1％的十二烷基苯磺酸钠、1
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5％Brij 30和10
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50％的聚(乙二醇)
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聚(丙二醇)
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聚(乙二醇)三嵌段共聚物；优选的是，所述裂解结合液包含：100mM马来酸、3.5M N
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丁基双胍盐酸盐、0.5M碘化钠、25mM酒石酸钠、0.5％的十二烷基苯磺酸钠、2％Brij30和15％的聚(乙二醇)
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聚(丙二醇)
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聚(乙二醇)三嵌段共聚物；更优选的是，所述裂解结合液还包含余量的水；进一步优选的是，所述裂解结合液的pH为5.0
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8.0；更进一步优选的是，所述裂解结...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹永龙，张佳斌，何宗顺，田付友，曲峰，
申请(专利权)人：苏州白垩纪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：