一种核酸提取纯化试剂盒及使用方法技术

本发明专利技术涉及一种核酸提取纯化试剂盒及使用方法，所述试剂盒包括如下组件：蛋白酶k溶液、磁珠悬浮液、离心纯化柱、收集管、裂解结合液、亚硫酸盐转化液、脱磺液、洗涤液、洗脱液。本发明专利技术所述试剂盒灵活的将游离DNA的提取和转化过程合二为一，先富集转化，再纯化浓缩。如此既节省了转化游离DNA的时间，又可以避免在提取过程中游离DNA的损耗。因此，本发明专利技术所述方法具有成本低、操作简短、转化率及回收率高等优点，为后续的甲基化特异性PCR扩增、亚硫酸盐测序等实验提供了高纯度的样品。等实验提供了高纯度的样品。等实验提供了高纯度的样品。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸提取纯化试剂盒及使用方法


[0001]本专利技术属于分子生物
，具体涉及到一种用于血浆游离DNA甲基化检测的核酸提取纯化试剂盒及使用方法。

技术介绍

[0002]DNA甲基化是人类最早发现的表观遗传现象之一。所谓表观遗传，是指在不改变基因原始序列的情况下，调控基因的表达，使基因发生可遗传的变化，并最终导致个体（细胞）的表型发生改变。也就是说，基因组中含有两类遗传信息，一类是传统意义上的遗传信息，即基因编码的遗传信息；另一类是表观遗传信息，它提供了何时、何地、以何种方式去应用遗传信息的指令。从当前的研究来看，DNA甲基化、组蛋白印迹、非编码RNA等均属于表观遗传学的范畴。
[0003]DNA甲基化发生在DNA甲基转移酶的催化下，5
’‑
CpG
‑3’
位点中的胞嘧啶被选择性的添加上一个甲基，形成5
‑
甲基胞嘧啶。人基因的启动子区及第一个外显子区富含5
’‑
CpG
‑3’
位点，一旦它们发生甲基化，该基因的转录过程就会收到抑制。研究表明，抑癌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸提取纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：(1) 裂解结合：向血浆样品中加入蛋白酶k进行消化，同时加入超顺性纳米磁珠和裂解结合液进行游离DNA吸附；(2) 洗脱转化：将步骤（1）中磁珠吸附的游离DNA洗脱下来，进行亚硫酸盐转化；(3) 二次结合：往离心纯化柱中加入裂解结合液和转化完成的DNA溶液，吸附转化后的游离DNA（BiscfDNA）；(4) 洗涤脱磺：向步骤（3）中离心柱吸附的BiscfDNA加入脱磺液，进行脱磺；(5) 洗涤纯化：对步骤（4）中脱磺化后的BiscfDNA进行洗涤纯化；(6) 晾干洗脱：将步骤（5）中纯化后的BiscfDNA室温晾干，然后进行洗脱。2.根据权利要求1所述的核酸提取纯化方法，其特征在于，步骤（1）和步骤（3）中裂解结合液为Tris
‑
HCl、聚乙二醇、异丙醇、异硫氰酸胍、盐酸胍、NaCl、曲拉通X
‑
100、EDTA、柠檬酸钠、柠檬酸中的一种或几种组合。3.根据权利要求1所述的核酸提取纯化方法，其特征在于，步骤（2）中亚硫酸盐转化液为3
‑
6mol/L，pH为4.5
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6.0的亚硫酸氢钠和浓度为20
‑
100mM/L的对苯二酚的混合溶液。4.根据权利要求1所述的核酸提取纯化方法，其特征在于，步骤（4）中脱磺液为10
‑
200mM/L NaOH的80%的乙醇溶液。5.根据权利要求1所述的核...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡子健，
申请(专利权)人：卡秋江苏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：