一种提高体外转录中帽子类似物利用率的方法技术

本公开提供一种提高共转录加帽反应过程中帽子类似物利用率的方法，该方法通过向体外转录体系中加入额外的柠檬酸盐或其类似物，从而提高帽子类似物的利用率

【技术实现步骤摘要】
一种提高体外转录中帽子类似物利用率的方法


[0001]本公开属于生物化学
，涉及
mRNA
的体外制备方法，具体涉及一种通过在反应体系中添加有机酸或其盐从而提高帽子类似物利用率的方法
。

技术介绍

[0002]mRNA
疫苗是在体外转录好的一段编码抗原蛋白的完整
mRNA
，上游和下游分别包含5′
帽子结构和3′
poly(A)
尾，编码目标抗原蛋白
。mRNA
片段注入人体后被体细胞内吞，通过胞内翻译作用产生抗原，再由此激发特异性免疫反应，达到形成免疫记忆的效果
。mRNA
进入细胞中进行蛋白质翻译时，5′
帽子结构充当募集转录起始因子的锚点，同时能够作为保护基团防止5′
到3′
核酸外切酶破坏
mRNA
完整性
。
因此，在体外转录生产
mRNA
疫苗的工艺中，对
mRNA
的5′
端进行加帽是必要的
。/>[0003]经体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种在体外转录合成
mRNA
过程中提高帽子类似物利用率的方法，所述方法包括：提供包含浓度为6‑
60mM
有机酸或其盐
、
缓冲物质
、NTPs、
镁盐
、
核酸模板
、RNA
聚合酶
、RNA
酶抑制剂
、
帽子类似物的混合物；在合适的条件下孵育反应混合物
。2.
一种体外转录反应体系，包含浓度为6‑
20mM
有机酸或其盐
、
缓冲物质
、NTPs、
镁盐
、
核酸模板
、RNA
聚合酶
、RNA
酶抑制剂
、
帽子类似物
。3.
根据权利要求1中的方法或者权利要求2中的反应体系，所述有机酸或其盐选自柠檬酸或其盐
、
异柠檬酸或其盐
、
草酸或其盐
、
苹果酸或其盐
、
酒石酸或其盐
、
富马酸或其盐
、
琥珀酸或其盐
、
马来酸或其盐
。4.
根据权利要求3的方法或者反应体系，所述的柠檬酸或其盐选自柠檬酸钾
、
柠檬酸钠
。5.
根据权利要求1中的方法，所述有机酸或其盐的浓度选自
6mM、9mM、12mM、14mM、16mM、18mM、20mM、22mM、23mM、26mM、28mM、32mM、35mM。6.
根据权利要求1所述的方法或者权利要求2中的反应体系，所述缓冲物质选自
Tris
碱
、HEPES、Tris
‑
HCl
或
MOPS。7.
根据权利要求1所述的方法或者权利要求2中的反应体系，所述缓冲物质的浓度为
10
‑
100mM。8.
根据权利要求1所述的方法或者权利要求2中的反应体系，所述帽子类似物的浓度为1‑
5mM。9.
根据权利要求1所述的方法或者权利要求2中的反应体系，所述帽子类似物的浓度选自
1.0mM、1.5mM、2.0mM、2.5mM、3.0mM、3.5mM、4.0mM、4.5mM、5.0mM。10.
根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓昱，金秋恒，张坤坤，戴雅，
申请(专利权)人：南京诺唯赞生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：