一种抽提低拷贝质粒的方法技术

本发明专利技术公开了一种抽提低拷贝质粒的方法，属于分子生物学技术领域，本发明专利技术首先通过悬浮试剂

【技术实现步骤摘要】
一种抽提低拷贝质粒的方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种抽提低拷贝质粒的方法
。

技术介绍

[0002]现在的质粒抽提一般是利用碱裂解法，是基于染色体
DNA
与质粒
DNA
的变性与复性的差异达到分离目的，高
pH
使质粒
DNA
和染色体
DNA
变性，同时沉淀蛋白质，再将
pH
值调至中性，质粒
DNA
较小，很容易复性成双链，而染色体
DNA
较大，缠结成网状不溶物质，从而可以通过离心除去
。
质粒拷贝数较低的情况下，用常规的碱裂解法抽提质粒，会造成溶液中含有较多的蛋白质
、
染色体以及菌体碎片，沉淀时质粒会和这些物质共沉，进而导致质粒的产量较低，不适合大量抽提
。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种抽提低拷贝质粒的方法，以解决以下技术问题：现有的碱裂解法抽提质粒的产量降低，不适合大量抽提
。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抽提低拷贝质粒的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：将菌液加入
96
孔板中以
3000
‑
4000r/min
的速度离心5‑
10min
，倒置
96
孔板弃去培养基，再倒置于吸水纸上弃尽残余培养基；向每孔中加入
300uL
悬浮试剂
SI
，用不干胶薄膜封口，在漩涡混合器上振荡2‑
3min
，得悬浮菌液；步骤2：向每孔悬浮菌液中加入
300uL
碱裂解试剂
SII
，摇晃
10
‑
20s
后，向每孔中加入
300uL
改性中和试剂
SIII
，
25
±
5℃
下振荡
5min
，将
96
孔板置于
96
孔板磁力架上，静置3‑
5min
，转移上清液至新
96
孔板中，向每孔中加入
550uL
异丙醇，上方加
96
孔过滤板；将冰浴好的上清液用排枪转移至
96
孔过滤板，将
96
孔板连同
96
孔过滤板置于离心机中，
5000r/min
离心约
1min
，移去过滤板，
96
孔板用不干胶封口并压紧，摇晃混匀后，置于离心机中，
4000r/min
离心
11min
，倒置弃去废液，并倒置离心，离心速度达到
900r/min
即可停止；步骤3：向每孔中加入
400uL
体积分数为
70
％的乙醇溶液，用不干胶薄膜封口，在漩涡混合器上振荡
1min
后，置于离心机中，
4000r/min
离心
7min
，倒置弃去废液，并倒置离心，离心速度达到
900r/min
即可停止；置于
25℃
±
5℃
下静置1‑
2min
，即完成质粒抽提
。2.
根据权利要求1所述的一种抽提低拷贝质粒的方法，其特征在于，所述悬浮试剂
S I
包括如下步骤制备：将
6.06g
三羟甲基氨基甲烷
、2.92g
乙二胺四乙酸
、3.8
‑
4g
溶菌酶
、0.3
‑
0.4gRNaseA
加去离子水溶解定容至
1L
，混合摇匀后，用盐酸调节
pH
至5‑8，得悬浮试剂
S I。3.
根据权利要求1所述的一种抽提低拷贝质粒的方法，其特征在于，所述碱裂解试剂
SII
包括如下步骤制备：将

【专利技术属性】
技术研发人员：彭建军，何青，周淮玉，王凯，胡秋香，
申请(专利权)人：通用生物安徽股份有限公司，
类型：发明
国别省市：