一种外泌体中制造技术

本发明专利技术公开了一种外泌体中

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体中ecDNA的分离方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种外泌体中
ecDNA
的分离方法及试剂盒
。

技术介绍

[0002]外泌体
(exosome)
是一种
30
‑
150nm
大小
、
极低密度的细胞外纳米级囊状结构，由细胞经过“内吞
‑
融合
‑
外排”等一系列调控过程而形成
。
几乎所有细胞都会分泌外泌体，细胞分泌的外泌体携带了来源细胞的诸多生物学信息，因此，外泌体也被认为是重要的潜在生物标记物，可以及时的反映来源细胞的生理与病理状态
。
[0003]ecDNA(
染色体外
DNA)
是近期肿瘤学领域的研究热点，国内外的相关研究还处于起步阶段
。ecDNA
指的是从染色体上脱落，脱离染色体以环状结构存在的
DNA。
研究表明
ecDNA
普遍存在于肿瘤细胞中，是原癌基因的载本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种外泌体中
ecDNA
的分离方法，该方法包括：对纯化后的外泌体采用裂解液进行裂解，然后采用洗涤液Ⅱ处理，所述洗涤液Ⅱ包括浓度为1‑
6M
的
NaAc、pH
为
5.0
‑
8.0。2.
根据权利要求1所述的外泌体中
ecDNA
的分离方法，其特征在于：所述洗涤液Ⅱ还包括
NaCl
，
NaCl
的浓度为0‑
6M。3.
根据权利要求1所述的外泌体中
ecDNA
的分离方法，其特征在于：所述洗涤液Ⅱ中的
NaAc
浓度为4‑
5M。4.
根据权利要求1所述的外泌体中
ecDNA
的分离方法，其特征在于：所述裂解液的组成为质量百分比1‑
10
％的聚多卡醇，优选为5％的聚多卡醇
。5.
根据权利要求1所述的外泌体中
ecDNA
的分离方法，其特征在于：所述外泌体的纯化采用磁珠悬液和洗涤液Ⅰ，所述磁珠悬液含有
0.01
‑
1mg/ml
的硅羟基磁珠，硅羟基磁珠表面包被有能够特异性结合外泌体的抗体；所述洗涤液Ⅰ的组成为
0.1
‑
30mmol/L
的
KH2PO4和
0.3
‑
28mmol/L
的
Na2HPO4。6.
根据权利要求5所述的外泌体中
ecDNA
的分离方法，其特征在于：所述磁珠悬液含有
0.5mg/ml
的硅羟基磁珠，所述洗涤液Ⅰ的组成为
1mmol/L
的
KH2PO4和
4mmol/L
的
Na2HPO4。7.
根据权利要求1所述的外泌体中
ecDNA
的分离方法，其特征在于：所述裂解液对外泌体进行裂解后，震荡离心，取上清；然后加入洗涤液Ⅱ，震荡混匀，离心，弃上清
。8.
根据权利要求1所述的外泌体中
ecDNA
的分离方法，其特征在于：所述洗涤液Ⅱ处理后加入洗涤液Ⅲ，震荡混匀，离心，弃上清；所述洗涤液Ⅲ的组成为5‑
20mmol/L
的
Tris
‑
HCL、0.1
‑
5mg/mL
的蛋白酶
K、0.1
‑
5mg/mL
的羟基磁珠
、
体积比为
20
％
‑
90
％的乙醇
。9.
根据权利要求8所述的外泌体中
ecDNA
的分离方法，其特征在于：所述乙醇的体积比为
50
％
‑
70
％
。10.
根据权利要求8所述的外泌体中
ecDNA
的分离方法，其特征在于：所述洗涤液Ⅲ的组成为
10mmol/L
的
Tris
‑
HCL、0.5mg/mL
的蛋白酶
K、1mg/mL
的羟基磁珠
、
体积比为
50
％的乙醇
。11.
根据权利要求1所述的外泌体中
ecDNA
的分离方法，其特征在于：所述洗涤液Ⅲ处理后加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：马跃，赵小玉，蔡瑶，张亚楠，
申请(专利权)人：上海思路迪生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：