一种全血样本中核酸提取的裂解液及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种全血样本中核酸提取的裂解液，所述裂解液包括烷基糖苷和聚酰胺

【技术实现步骤摘要】
一种全血样本中核酸提取的裂解液及其应用


[0001]本专利技术涉及分子诊断
，具体地，本专利技术涉及一种全血样本中核酸提取的裂解液及其应用
。

技术介绍

[0002]聚合酶链反应
(polymerase chain reaction)
，简称
PCR
，是一种常见的分子生物学技术，
PCR
反应具有特异性强，灵敏度高，方便快捷，高效安全，对标本要求低的特点，自问世以来，经过近
30
年的飞速发展，
PCR
已成为一种重要的分子生物学技术，在疾病筛查和诊断
、
疗效及预后评估
、
病原体检测
、
食品卫生安全
、
环境保护等方面发挥着日益重要的作用，已成为现代医学临床诊疗活动和科学研究中一项不可缺少的技术
。
[0003]血液作为生化指标分析最主要的样本类型，血液样本的处理是分子诊断分析准确性和可靠性的最重要
、
最直接的影响因素
。
全血中存在有很多
PCR
反应抑制物，例如，血红素
、
蛋白质
、
盐和抗凝剂等，血红蛋白和乳铁蛋白是分别存在于红细胞和白细胞中的主要
PCR
抑制物
。
它们抑制
PCR
反应可能与释放铁离子有关，后者能干扰
DNA
合成
。
胆红素
、
胆盐
、
血色素等血红蛋白代谢物也会抑制
PCR
反应，血色素抑制
PCR
反应与竞争性抑制
DNA
聚合酶相关
。
[0004]这些物质存在标本中或在标本一系列处理过程中产生，使得常规的
Taq
聚合酶不能从全血中直接进行
PCR
反应
。
会降低
PCR
反应的效率，影响
PCR
反应的灵敏度
、
精确性和稳定性，使
PCR
检测结果产生偏差
。
血液里的这些物质会使逆转录酶或热稳定
DNA
聚合酶失活；也可以使目的基因降解或结合在其上阻碍扩增反应；还能干扰细胞溶解反应及
mRNA
提取过程
。PCR
反应抑制物可以直接结合在单链或双链
DNA
分子上阻碍其扩增反应，且在提纯过程中难以去除
。
[0005]从全血中提取基因组
DNA
是许多分子生物学实验的基础
。
现有血液的处理方法虽然较常规的基因组
DNA
提取纯化过程有所简化，但现有全血样本还需进行预处理操作，仍然会涉及到额外的热循环
、
离心
、
加液和弃液等步骤，且条件难以控制
、
重复性差
、
不能形成商品化试剂盒，不利于推广使用
。
[0006]因此开发一种全血样本核酸提取方法，从而无需将全血样本预处理，简化全血样本处理的操作流程
、
缩短了样本处理时间
、
摆脱实验室对于离心机的依赖，直接整合裂解和核酸纯化功能，即可实现核酸的提取，节省时间，更加高效，分离的核酸可直接参与
PCR
扩增，以满足科研和医学领域对于基因检测技术的快速
、
简便
、
成本低廉的要求，已成为当务之急
。

技术实现思路

[0007]解决的技术问题：本专利技术的一个方面，是针对现有技术中使用全血样本进行核酸检测时需要预处理和
/
或精确度不高的问题，提供了一种全血样本中核酸提取的裂解液及其应用
。
[0008]具体地，全血中的红细胞
、
胆红素和甘油三酯等都是影响核酸纯化质一种全血样本病毒核酸提取试剂盒量和后续
PCR
扩增的物质，传统核酸纯化都需要通过溶解红细胞
、
去除上清液同时去除黄疸甘油三脂等
PCR
抑制物质，同时使用蛋白酶
K
消化与核酸结合的蛋白质，从而到达纯化核酸的目的
。
但传统的操作步骤，不但繁琐，费时费力，而且增加了纯化核酸的丢失风险，是制约临床开展全血病原核酸检测项目的主要原因
。
本专利技术中的裂解液采用强碱充分裂解血液细胞，同时利用烷基糖苷和聚酰胺
‑
胺型树枝状高分子
PAMAM
的协同作用，实现了在无蛋白酶
K
的作用下有效分离蛋白和核酸复合体，从而实现了全血样本中核酸的快速
、
简便
、
成本低廉的检测效果
。
[0009]本专利技术提供的技术方案：一种全血样本中核酸提取的裂解液，所述裂解液包括烷基糖苷和聚酰胺
‑
胺型树枝状高分子
PAMAM
，所述裂解液的
pH
值不小于
8.0。
[0010]在本专利技术中，利用强碱性环境裂解血细胞，其
pH
值不小于
8.0。
可以使用现有技术中任意合适的
pH
调节剂进行调节，例如，氢氧化钠
、
氢氧化钾
、
季铵碱
、
胍
、
醇钠
、
醇钾
、
有机金属化物
、
氨基化合物
、
硅化物或碱金属氢化物
。
[0011]本专利技术中所述的烷基糖苷可以为任意合适的烷基糖苷
。
作为优选，在本专利技术的某些实施方式中，所述烷基糖苷选自十二烷基麦芽糖苷
、
十三烷基麦芽糖苷
、
十四烷基麦芽糖苷
、
蔗糖单十二烷酸酯
、
蔗糖单十三烷酸酯或蔗糖单十四烷酸酯
。
更优选地，在本专利技术的一个实施方式，所述烷基糖苷为十二烷基麦芽糖苷（
DM
）
。
[0012]在本专利技术中，
PAMAM
与
DM
协同作用可以理解为，
DM
与胺和羟基封端的
PAMAMs
的强静电结合，树枝状聚合物与表面活性剂的络合导致自组装超分子的形成
。
可以通过表面活性剂的结合更方便地定制缩合状态下树枝状聚合物
‑
表面活性剂复合物的自组装结构
。
随着表面活性剂浓度的增加，逐渐过渡到协同结合，其中胶束
DM
聚集体在树枝状聚合物的外壳处形成
。
表面活性剂作为松散分布的分离分子（单聚体）封装在树枝状聚合物内
。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种全血样本中核酸提取的裂解液，其特征在于，所述裂解液包括烷基糖苷和聚酰胺
‑
胺型树枝状高分子
PAMAM
，所述裂解液的
pH
值不小于
8.0。2.
根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液还包括用于吸附核酸的磁珠或用于吸附核酸的磁性核
‑
壳结构纳米微球；其中，所述磁性核
‑
壳结构纳米微球是由
Fe3O4、SiO2和表面活性剂利用软模板法制备而成，所述表面活性剂为非离子表面活性剂和
/
或阳离子表面活性剂
。3.
根据权利要求2所述的裂解液，其特征在于，所述非离子表面活性剂选自聚氧乙烯衍生物
、
烷基醇酰胺
、
多元醇单脂肪酸酯
、
烷基氧化胺或
N
‑
烷基吡咯烷酮；所述阳离子表面活性剂选自双十八烷基二甲基氯化铵
(DODAC)、CTAB
或
CTAC。4.
根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述烷...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海滨，彭闯，王洋，
申请(专利权)人：北京纳捷诊断试剂有限公司，
类型：发明
国别省市：