本发明专利技术提供了一种磁珠法提取核酸的裂解液，所述裂解液由0.2～0.4N氢氧化钠、0.3～0.6M氯化钾、0.01～0.05％N-月桂酰肌氨酸钠、5mM EDTA、0.3～0.6M Tris-HCL和1～2％曲通X-100组成。本发明专利技术磁珠法核酸提取的裂解液可以充分、有效地裂解细胞，加快裂解进程，同时，保护核酸免受氧化，避免DNA自身二聚体形成。此外，本发明专利技术裂解液性质温稳定，不受季节、温度、盐离子浓度等影响，并能充分配合磁珠进行核酸吸附，使提取核酸的效果达到最优化。本发明专利技术提供的磁珠核酸提取的洗涤液可以有效去除残留的杂质，避免核酸的丢失，且少量残余的洗涤液不会影响PCR扩增结果，保证检测结果的准确。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学领域，特别涉及一种磁珠法提取核酸的裂解液。
技术介绍
核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。核酸提取是指利用物理、化学方法将核算从载体中分离出来的过程。目前，在国内大部分医疗机构及科研领域均需要从大批量血液样本中提取核酸。因此，为了保证抽提出高浓度的核酸，人们不断开发出新的技术。核酸提取方法繁多，包括传统的酚-氯仿法、盐析法、滤膜离心柱法等。这些方法各有其优缺点，但总体上核酸提取的效果差强人意。磁珠法是通过磁性硅胶吸附细胞，随后加入细胞裂解液裂解细胞。从细胞中游离出来的核酸被吸附到磁性颗粒表面，而蛋白等分子不被吸附而留在溶液中。在磁场作用下，磁性颗粒与液体分离。此时，弃去含有杂质的液体，并用相应的洗脱液洗脱磁珠上吸附的核酸。该方法不需离心，操作简单，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前新兴的核酸提取技术。在本领域中，磁珠法提取核酸普遍使用的裂解液为含有胍盐的裂解液。胍盐是一种强蛋白质变性剂，采用高浓度的胍盐来裂解细胞，可迅速破坏细胞结构，裂解细胞，使核酸从蛋白质中释放出来。磁珠法提取核酸所使用的磁珠，表面包裹了各种活性集团，有研究表明裂解液中的离子强度、pH等条件会直接影响这些功能集团的活性，进而影响磁珠吸附核酸的量。有研究表明，当胍盐裂解液稀释度降低到60%以下时，样品DNA回收效率明显降低。目前临床常用的检测样本中，往往一些样本(如脑组织样本)需先经其他方法处理，再提取纯化核酸。面对这种情况，就必须控制加入经前处理的样本量，以保证胍盐液的浓度，避免因过量稀释而影响磁珠与核酸的结合，从而导致核酸回收效率降低，检测结果不准确。此夕卜，胍盐成分不稳定，尤其易受室温、季节温度影响，导致裂解效果大相径庭。因此，面对现有技术中的这些缺点，市场上急需要一种用途广泛，使用方便，裂解效率更高的新型磁珠法提取核酸的裂解液。与此同时，磁珠法提取核酸的洗涤液中往往采用含有乙醇的低盐溶液，然而在经过最后一步洗涤过程中，难于将乙醇去除干净，而乙醇是很多反应，特别是PCR反应的中度抑制物。因此，残留的乙醇将会严重影响PCR扩增的实验结果。此外，用含有乙醇的洗涤液清洗磁珠时，会造成磁珠在乙醇溶剂中的剧烈蹦跳，极易导致污染。因此，如何解决这一问题，以保证检测结果的准确性，成为亟待解决的重要问题。
技术实现思路
本专利技术的一个方面是针对现有技术中磁珠法核酸提取的裂解液效率低的缺点，提供了一种磁珠法提取核酸的裂解液。为了解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为:一种磁珠法提取核酸的裂解液，所述裂解液由0.2?0.4N氢氧化钠、0.3?0.6M氯化钾、0.01?0.05%N-月桂酰肌氨酸钠、5mM EDTA、0.3?0.6M Tris-HCL和1?2%曲通X-100组成。在本专利技术技术方案中，专利技术人创造性地使用特定量的曲通X-100和N-月桂酰肌氨酸钠配合氢氧化钠进行核酸提取。不仅可以充分裂解细胞，同时可加快裂解速度快，整个裂解时间仅需要5?10分钟，与现有技术中的裂解方法相比，大大缩短了操作时间。同时，使用曲通X-100和终浓度N-月桂酰肌氨酸钠可帮助氢氧化钠彻底裂解细胞，使核酸充分释放，并帮助磁珠有效吸附核酸，使核酸和蛋白有效地分离。并且，在本专利技术技术方案中不使用胍盐进行核酸提取，从而可以有效避免胍盐易受室温、季节温度、盐离子浓度等影响造成的核酸提取效果下降。本专利技术裂解液在普通实验条件下即可进行，且能充分配合磁珠进行核酸的有效吸附，使提取核酸的效果达到最优化，并保证实验结果真实可靠。 作为优选，所述裂解液由所述裂解液由0.25?0.35N氢氧化钠、0.4?0.5M氯化钾、0.02?0.04%N-月桂酰肌氨酸钠、5mM EDTA、0.4?0.5M Tris-HCL和 1 ?2 % 曲通X-100组成。更优选地，所述裂解液由0.3N氢氧化钠、0.45M氯化钾、0.03 % N-月桂酰肌氨酸钠、5mM EDTA、0.45M Tris-HCL和 1 % 曲通X-100组成。作为优选，在本专利技术的实施方式中，所述裂解液还包括3?8mMDTT。在本专利技术技术方案中还可以加入3?Smmol的DTT参与核酸的提取，这样可以有效保护核酸不被氧化，而且可防止DNA自身二聚体的形成。作为优选，所述裂解液还包括不多于0.001wt%的提取指示剂。该提取指示剂可以起到良好的指示作用，防止实验操作中的错加、漏加、多加。其中，所述提取指示剂选自溴酚蓝、石绿、甲基红、甲基橙、罗丹名、溴甲酚绿、品红、二甲酚橙、二苯胺或刚果红中的一种。更优选地，所述提取指示剂为溴酚蓝。溴酚蓝可以起到良好的指示剂作用，在本专利技术方法的裂解液中，在室温条件下呈蓝色，与待检测样品混合后颜色减退，从而提示操作者样品的加入情况，避免因操作问题带来的样本漏加、错加、多加的问题。所述磁珠法提取核酸中的磁珠可以为市售磁珠法核酸提取中所使用的任意常规磁珠。磁珠和裂解液可以按照任意比例混合。作为优选，磁珠和裂解液的体积混合比例为1?1.5:100。作为优选，在本专利技术的一个实施方式中，所述磁珠按照以下方法制备:步骤A)纳米微球的制备:在氩气保护下，在含有13?17g硫酸亚铁七水合物和8?12g三氯化铁六水合物的水溶液中，每间隔10分钟滴加lml 0.4M?0.6M氢氧化钠溶液；当反应溶液变为胶状乳浊液时，每间隔20分钟滴加lml 0.2M?0.3M氢氧化钠溶液，摇床持续摇匀，摇床速度100转/分钟，待出现磁性后，继续在氩气保护下反应4?10小时;随后在所得溶液中加入氯化钠，使氯化钠终浓度为0.5M?1M;室温静置18?36小时后使用去离子水漂洗至溶液pH为7 ;再使用0.2M?0.3M的氢氧化钠溶液配成磁珠体积百分比为20 %?40 %的磁珠悬液，即得； 步骤B)通过表面修饰制备纳米磁珠:将步骤A)所得磁珠悬液在50°C?60°C条件下通入氩气并均匀搅拌;加入60g九水硅酸钠搅拌至完全溶解，每3min滴加0.5ml冰乙酸，摇床持续摇匀，摇床速度100转/分钟，搅拌2h;当pH值为6?8时，使用3倍于所述磁珠悬液体积的0.3M氯化钠溶液漂洗5次，再使用0.3M氯化钠溶液配制成磁珠体积百分比为20 %?40 %的磁珠悬液;在得到的磁珠悬液中加入30g PEG-1750，摇床持续摇匀，摇床速度100转/分钟，搅拌24h;使用3倍于所述磁珠悬液体积的0.3M的氯化钠溶液漂洗5次;再使用0.3M氯化钠溶液和叠氮钠配制成磁珠体积百分比为40 % -60 %的磁珠悬液，即得所述纳米磁珠。通过以上方法制备的磁珠具有如下优势:适用性广，能纯化多种不同样品；可通过改变反应条件能控制磁珠大小和表面修饰基团的数量;可在水相中呈表面颗粒均匀，分散性好。区别其它有机溶剂得到的磁珠，以上方法制备的磁珠核酸吸附量大，制备方法简单，成本低，无需复杂大型设备，适合实验室或工业化生产。本专利技术的另一个方面是提供了一种磁珠法核酸提取的试剂盒。该试剂盒包括上述裂解液和洗涤液。其中，所述洗涤液可以为任意市售核酸提取所用洗涤液。作为优选，所述洗涤液为0.3?0.6M氯化钾溶液，所述洗涤液的pH值为4?5。作为优选，在本专利技术中本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种磁珠法提取核酸的裂解液，其特征在于，所述裂解液由0.2～0.4N氢氧化钠、0.3～0.6M氯化钾、0.01～0.05％N‑月桂酰肌氨酸钠、5mM EDTA、0.3～0.6M Tris‑HCL和1～2％曲通X‑100组成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王海滨，王棽，周其玲，冯小霞，
申请(专利权)人：北京纳捷诊断试剂有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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