一种通用型样本核酸提取试剂盒及核酸提取方法技术

本发明专利技术涉及一种通用型样本核酸提取试剂盒及核酸提取方法，所述核酸提取试剂盒组分包括裂解液

【技术实现步骤摘要】
一种通用型样本核酸提取试剂盒及核酸提取方法


[0001]本专利技术属于核酸提取
，具体涉及一种通用型样本核酸提取试剂盒及核酸提取方法
。

技术介绍

[0002]核酸提取
(Nucleic Acid Extraction)
是一种通过机械
、
物理或者化学方法将核酸从样本中分离出来的技术
。
它主要用于将样本中的核酸，如
DNA
和
RNA
分离出来，以便进行后续实验分析
。
核酸提取技术的应用非常广泛，它可用于分子生物学
、
微生物学
、
病毒学
、
药学
、
医学诊断和环境监测等众多领域
。
例如，在分子生物学研究中，采用核酸提取技术从生物样本中获得
DNA
或
RNA
片段，即可继续进行下游基因鉴定
、
基因表达水平
、
遗传片段分析等研究
。
[0003]随着目前技术不断地更新迭代，核酸提取试剂种类也非常多，常用的有酚
/
氯仿抽提法
、
离心柱法
、
全自动核酸纯化仪磁珠法等
。
酚
/
氯仿抽提法的优点是成本比较低廉，但人员操作重复性差，核酸的回收率较低，且试剂对人员的毒性较大；离心柱法的优点是比传统的酚氯法提取的纯度高，价格低廉，操作相对便捷，也逐渐取代了传统<br/>DNA
提取方法，但由于需多次离心过柱，不适用于大批量样本的提取；磁珠法的优点在于能够实现自动化
、
高通量操作，适用于微量提取
。
[0004]然而市场上现有的磁珠法核酸提取试剂盒大多存在标本类型单一化
、
提取时间较长
、
提取效果不稳定等情况，因此，研发一种标本适用范围广
、
核酸提取得率高
、
纯度好的通用型样本核酸提取试剂盒及核酸提取方法具有十分重要的意义
。

技术实现思路

[0005]为了克服上述现有技术中的不足，本专利技术提供了一种通用型样本核酸提取试剂盒及核酸提取方法
。
[0006]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0007]本专利技术的第一个方面提供了一种通用型样本核酸提取试剂盒，所述核酸提取试剂盒包括裂解液
I、
裂解液Ⅱ、
硅基磁珠
、
蛋白酶
K、
洗涤液
I、
洗涤液Ⅱ和洗脱液；
[0008]进一步的，所述裂解液
I
的组分包括1％ SDS、10mM Tris
‑
Cl、10mM EDTA
及
15mM NaCl
，适用的标本类型为细胞样本
、
干血片样本；
[0009]进一步的，所述裂解液Ⅱ的组分包括
3.0M
～
3.5M
盐酸胍
、20
％～
25
％
PEG、2
％～5％
Tween20、15mM NaCl
，适用的标本类型为全血样本
、
含保存液拭子类样本
、
唾液样本；
[0010]进一步的，所述硅基磁珠的浓度为
100mg/mL
，直径为
200nm
；
[0011]进一步的，所述蛋白酶
K
的浓度为
20mg/mL
；
[0012]进一步的，所述洗涤液
I
为
2M
盐酸胍
、60
％乙醇混合溶液；
[0013]进一步的，所述洗涤液Ⅱ为
70
％乙醇溶液；
[0014]进一步的，所述洗脱液包括
0.5mM EDTA、10mM Tris
‑
Hcl
溶液；
[0015]本专利技术的第二个方面提供了一种上述通用型样本核酸提取试剂盒用于不同类型生物样本的核酸提取方法，包括如下步骤：
[0016](1)
将
200ul
裂解液
I/
裂解液Ⅱ、20ul
蛋白酶
K
与样本混合，于
60℃
振荡裂解
10min
；
[0017](2)
转入磁珠溶液，振荡结合
5min
，使磁珠充分吸附核酸；
[0018](3)
沉淀
30s
后，将磁珠核酸复合物转入洗涤液
I
，振荡洗涤
1min
；
[0019](4)
沉淀
30s
后，将磁珠核酸复合物转入洗涤液Ⅱ，振荡洗涤
1min
；
[0020](5)
重复上一步骤，沉淀干燥；
[0021](6)
磁珠核酸复合物转入预热到
60℃
的洗脱液中，振荡洗脱
5min
；
[0022](7)
磁棒吸附去除磁珠，得到提取纯化的核酸；
[0023]进一步的，所述核酸提取方法的适用仪器为全自动核酸提取仪
。
[0024]本专利技术中化合物的中文命名与结构式有冲突的，以结构式为准；结构式有明显错误的除外
。
[0025]本专利技术的有益效果在于：
[0026](1)
本专利技术提供的通用型样本核酸提取试剂盒及核酸提取方法，其优势在于通过不同的裂解液配方提高样本裂解效率，从而匹配不同类型的样本核酸提取过程；
[0027](2)
本专利技术提供的通用型样本核酸提取试剂盒及核酸提取方法具有稳定性好
、
提取的核酸得率高
、
纯度好等优点
。
附图说明
[0028]图1是实施例2中本专利技术提取试剂与其他品牌试剂提取全血样本后荧光
PCR
扩增曲线
‑
FAM
通道结果图；
[0029]图2是实施例2中本专利技术提取试剂与其他品牌试剂提取全血样本后荧光
PCR
扩增曲线
‑
VIC
通道结果图
。
具体实施方式
[0030]以下结合实例说明本专利技术，但不限制本专利技术
。
在本领域内，技术人员对本专利技术所做的简单替换或改进均属于本专利技术所保护的技术方案内
。
[0031]实施例1：
[0032]本专利技术提供的核酸提取试剂盒的试剂包括裂解液
I、
裂解液Ⅱ、
硅基磁珠
、
蛋白酶
K、
洗涤液
I、
洗涤液Ⅱ和洗脱液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种通用型样本核酸提取试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试剂盒包括裂解液
I、
裂解液Ⅱ、
硅基磁珠
、
蛋白酶
K、
洗涤液
I、
洗涤液Ⅱ和洗脱液
。2.
根据权利要求1所述的通用型样本核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液
I
的组分包括1％
SDS、10mM Tris
‑
Cl、10mM EDTA
及
15mM NaCl
，适用的标本类型为细胞样本
、
干血片样本
。3.
根据权利要求1所述的通用型样本核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液Ⅱ的组分包括
3.0M
～
3.5M
盐酸胍
、20
％～
25
％
PEG、2
％～5％
Tween20、15mM NaCl
，适用的标本类型为全血样本
、
含保存液拭子类样本
、
唾液样本
。4.
根据权利要求1所述的通用型样本核酸提取试剂盒，其特征在于，所述硅基磁珠的浓度为
100mg/mL
，直径为
200nm。5.
根据权利要求1所述的通用型样本核酸提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶
K
的浓度为
20mg/mL。6.
根据权利要求1所述的通用型样本核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液
I
为
2M
盐酸胍
、60
％乙醇混合...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤丽丽，李万帅，文诗语，
申请(专利权)人：常州国药医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：