一种评估早期胃癌淋巴结转移风险的组合物及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种评估早期胃癌淋巴结转移风险的组合物及其用途，通过该组合物检测早期胃癌组织中CLGN、ZNF354C、LMO3、LDHB、ALDH1L1、PTPN13、PPP2R2B、EYA4等8个基因的启动子区域甲基化水平，评估EGC淋巴结转移风险，帮助临床进行EGC风险分级，以评估是否行内镜粘膜下剥离术(ESD)；其检测灵敏度高，特异性好，临床符合度高，对EGC风险分级与治疗均具有十分积极的意义。十分积极的意义。十分积极的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种评估早期胃癌淋巴结转移风险的组合物及其用途


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种评估早期胃癌淋巴结转移风险的组合物及其用途。

技术介绍

[0002]胃癌是临床常见的恶性肿瘤，与进展期胃癌相比，早期胃癌患者预后良好。早期胃癌(EGC)是指癌组织限于胃粘膜层及黏膜下层，无论其病灶大小和有无淋巴结转移。早期胃癌患者手术(或内镜下切除)后5年生存率可达90％～95％，而有淋巴结转移的5年生存率为80％～85％。因此，淋巴结转移是判断预后和评估治疗方案的重要因素，对于病变局限于黏膜内的早期胃癌效果更好。目前EGC淋巴结转移的评估方法有：1、根据临床病理学因素评估；肿瘤浸润深度、肿瘤大小、组织学类型等都是EGC淋巴结转移的独立危险因素。2、根据影像学和分子标志物评估：腹部超声、CT、MRI和PET等，血管内皮生长因子(VEGF)、p53基因等与EGC的淋巴结转移密切相关。
[0003]近年来，随着DNA甲基化检测技术的成熟，在癌症发生的早期阶段，DNA甲基化检测逐步成为癌症治疗、预后预测、复发转移的临床辅助评估手段。MSP检测技术融合了荧光PCR的灵敏性、甲基化模板特异性扩增等优点，是目前临床检验中认同程度很高的一种检测技术，已广泛应用于科学研究和临床检测。与传统评估方法相比，通过基因甲基化水平评估淋巴结转移风险具有主观干扰低、检测成本低、结果准确、稳定性强等优势。然而，目前该技术平台上没有能够快速、特异性的检测EGC相关的基因甲基化技术性产品。
[0004]为了进一步提高EGC淋巴结转移风险的评估价值，探索和开发更特异有效、更便捷、更易应用于临床的分子检测产品具有重要意义。

技术实现思路

[0005]鉴于以上所述现有技术的空白，本专利技术的目的在于提供一种评估早期胃癌淋巴结转移风险的组合物及其用途。
[0006]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0007]本专利技术的第一方面提供了CLGN、ZNF354C、LMO3、LDHB、ALDH1L1、PTPN13、PPP2R2B、EYA4八种基因的启动子附近区域甲基化水平联合作为靶标在制备评估早期胃癌淋巴结转移风险产品中的用途；
[0008]所述将人CLGN、ZNF354C、LMO3、LDHB、ALDH1L1、PTPN13、PPP2R2B、EYA4八种基因的启动子附近区域序列甲基化联合作为靶标在制备评估早期胃癌淋巴结转移风险产品中的用途是指将上述八种基因的甲基化程度作为一项辅助评估指标用于评估EGC是否实施内镜黏膜下剥离术(ESD)产品的制备。
[0009]本专利技术的第二方面提供了一种评估早期胃癌淋巴结转移风险的组合物，所述组合物包括：
[0010]a.用于检测CLGN基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂a；
[0011]b.用于检测ZNF354C基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂b；
[0012]c.用于检测LMO3基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂c；
[0013]d.用于检测LDHB基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂d；
[0014]e.用于检测ALDH1L1基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂e；
[0015]f.用于检测PTPN13基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂f；
[0016]g.用于检测PPP2R2B基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂g；
[0017]h.用于检测EYA4基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂h。
[0018]以上所述启动子区域并非严格限定为位于启动子片段内的区域，而是启动子附近区域的基因片段。
[0019]进一步的，所述制剂a包括引物对a，所述引物对a包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；
[0020]所述制剂b包括引物对b，所述引物对b包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示；
[0021]所述制剂c包括引物对c，所述引物对c包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示；
[0022]所述制剂d包括引物对d，所述引物对d包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示；
[0023]所述制剂e包括引物对e，所述引物对e包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示；
[0024]所述制剂f包括引物对f，所述引物对f包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示；
[0025]所述制剂g包括引物对g，所述引物对g包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.13和SEQ ID No.14所示；
[0026]所述制剂h包括引物对h，所述引物对h包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.15和SEQ ID No.16所示。
[0027]进一步的，所述组合物还包括用于检测内参基因COL2A启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂i。
[0028]进一步的，所述制剂i包括引物对i，所述引物对i包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.17和SEQ ID No.18所示。
[0029]进一步的，所述组合物还包括以下组分中的任一种或几种：PCR反应液、酶混合液、阳性对照、阴性对照。
[0030]进一步的，所述PCR反应液包括缓冲液、MgCl2、dUTP和dNTPs；所述酶混合液包括Taq酶和UNG酶；
[0031]优选的，所述PCR反应液包括10
×
缓冲液、25mM MgCl2、10mM dUTP和10mM dNTPs；所述Taq酶为热启动Taq酶，所述UNG酶为尿嘧啶
‑
N
‑
糖基化酶。
[0032]进一步的，所述阳性对照选自以下任一种或几种：含有CLGN、ZNF354C、LMO3、LDHB、ALDH1L1、PTPN13、PPP2R2B、EYA4甲基化基因部分序列的假病毒、含有部分人COL2A基因序列的假病毒；例如，含有CLGN、ZNF354C、LMO3、LDHB、ALDH1L1、PTPN13、PPP2R2B、EYA4甲基化基因的假病毒可以是非复制型腺病毒。
[0033]进一步的，所述阴性对照为无菌水。
[0034]具体的，EGC甲基化基因CLGN、ZNF354C、LMO3、LDHB、ALDH1L1、PTPN13、PPP2R2B、EYA4的基因Gene ID分别为:1047、30832、55885、3945本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CLGN、ZNF354C、LMO3、LDHB、ALDH1L1、PTPN13、PPP2R2B、EYA4八基因的启动子附近区域甲基化水平联合作为靶标在制备评估早期胃癌淋巴结转移风险产品中的用途。2.一种评估早期胃癌淋巴结转移风险的组合物，其特征在于，所述组合物包括：a.用于检测CLGN基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂a；b.用于检测ZNF354C基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂b；c.用于检测LMO3基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂c；d.用于检测LDHB基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂d；e.用于检测ALDH1L1基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂e；f.用于检测PTPN13基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂f；g.用于检测PPP2R2B基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂g；h.用于检测EYA4基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的制剂h。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述制剂a包括引物对a，所述引物对a包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；所述制剂b包括引物对b，所述引物对b包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示；所述制剂c包括引物对c，所述引物对c包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示；所述制剂d包括引物对d，所述引物对d包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示；所述制剂e包括引物对e，所述引物对e包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示；所述制剂f包括引物对f，所述引物对f包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示；所述制剂g包括引物对g，所述引物对g包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.13和SEQ ID No.14所示；所述制剂h包括引物对h，所述引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：李万帅，汤丽丽，文诗语，
申请(专利权)人：常州国药医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：