一种裂解液和核酸提取试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物化学领域，具体涉及一种裂解液和核酸提取试剂盒，本发明专利技术能够提高核酸提取效率，稳定提高核酸提取纯度

【技术实现步骤摘要】
一种裂解液和核酸提取试剂盒


[0001]本专利技术属于生物化学领域，具体涉及一种裂解液和核酸提取试剂盒
。

技术介绍

[0002]在分子生物学实验中，核酸提取是一项最基本且最重要的环节，核酸提取的产量
、
纯度及完整性直接关系到下游核酸检测
、
生物学研究或其他新产品开发的成败
。
磁珠法核酸提取方法是指以超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠
(
以下简称磁珠
)
为载体，通过磁珠在高盐溶液中吸附核酸，经过磁性分离和漂洗杂质后，在低盐溶液中核酸从磁珠表面解吸附的原理进行核酸提取的方法
。
该方法不需离心，操作简单，便于高通量
、
自动化操作，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前新兴的核酸提取技术
。
[0003]目前基因组
DNA
提取纯化的方法有很多种，如苯酚氯仿抽提法
、SDS
法
、
离心柱法等，但上述方法存在提取试剂有毒，操作繁琐，易导致污染等问题，而磁珠法不使用有毒试剂，操作简单，不易污染，已经成为目前分子生物学和临床检验医学研究的理想方法
。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种裂解液和核酸提取试剂盒，能够提高核酸提取效率，稳定提高核酸提取纯度
。
[0005]本专利技术中的裂解液包括脱氧胆酸钠
、
盐酸胍
、
三氟乙酸银
、
非离子表面活性剂和缓冲液
。
其中，非离子表面活性剂可以从聚氧乙烯蓖麻油
、
烷基苯磺酸钠
、NP
‑
40、Tween
‑
20、Triton
‑
X100
中选择单一一种或者自由组合选择；缓冲液可以选择
pH7.0
～
8.0
的
Tris
‑
HCl
缓冲液或磷酸缓冲液
。
[0006]本专利技术提供一种裂解液，其组分和含量为：脱氧胆酸钠3～
6mol/L、
盐酸胍4～
6mmol/L、
三氟乙酸银3～
5mmol/L、
非离子表面活性剂2％
～8％和缓冲液
0.04
～
0.05mol/L。
一种优选的技术方案中，裂解液的组分和含量为：脱氧胆酸钠3～
6mol/L、
盐酸胍4～
6mmol/L、
三氟乙酸银3～
5mmol/L、
聚氧乙烯蓖麻油2％
～8％和磷酸缓冲液
0.04
～
0.05mol/L。
[0007]本专利技术中，使用脱氧胆酸钠和三氟乙酸银可以更高效破坏细胞膜结构，并更加高效
、
快速地释放核酸，缩短提取时间，增加裂解效率，从而增加核酸提取量
。
另外，在使用聚氧乙烯蓖麻油作为非离子型表面活性剂的技术方案中，聚氧乙烯蓖麻油可以在裂解的过程中更好地降低干扰物质含量
。
[0008]本专利技术还提供一种核酸提取试剂盒，所述试剂盒包括所述裂解液，还包括磁珠
、
结合液
、
富集液
、
清洗液
I、
清洗液
II
和洗脱液，应用所述试剂盒实现核酸提取
。
[0009]本专利技术提供一种技术方案，所述结合液包括以下成分和含量：葡萄糖
10
％
‑
20
％，异丙醇
50
％，
EDTA0.5mol/L
～
3mol/L
，缓冲液
0.04mol/L
～
0.05mol/L
，氯化钠
0.02mol/L
；所述富集液包括以下成分和含量：醋酸钠
0.5mmol/L
‑
5mmol/L
，无水乙醇
70
％；所述清洗液
I
包括以下成分和含量：盐酸胍
1mol/
～
6mol/L
，洋地黄皂苷
3mmol/L
～
6mmol/L
，对二乙胺苯甲酸
0.5mol/L
～
3mol/L
，非离子表面活性剂
0.1
％～
0.5
％，缓冲液
0.04mol/L
～
0.05mol/L
，氯
化钠
1mmol/L
‑
3mmol/L
；所述洗脱液包括以下成分和含量：缓冲液
0.04mol/L
～
0.05mol/L
，
EDTA0.004mol/L
～
0.04mol/L。
此技术方案中，缓冲液可以选择
pH7.0
～
8.0
的
Tris
‑
HCl
缓冲液或磷酸缓冲液，非离子表面活性剂可以从聚氧乙烯蓖麻油
、
烷基苯磺酸钠
、NP
‑
40、Tween
‑
20、Triton
‑
X100
中选择单一一种或者自由组合选择
。
需要说明的是，本专利技术中列举的多个缓冲液和非离子表面活性剂的例子仅为说明性内容，而不应理解为对本专利技术的限制
。
[0010]本专利技术提供一种优选的技术方案，所述结合液还包括聚氧乙烯蓖麻油
。
聚氧乙烯蓖麻油作为结合液的成分，在裂解富集的过程中，可以更好地降低干扰物质的含量，从而提高核酸纯度
。
[0011]所述试剂盒中的所述磁珠的粒径在
500nm
～
2000nm
之间
。
本领域技术人员应当理解，本专利技术中所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠
。
[0012]本专利技术还提供一种技术方案，所述试剂盒用于血斑中核酸的提取，所述试剂盒应用于血斑中核酸的提取能够提高核酸提取效率，稳定提高核酸提取纯度
。
本领域技术人员应当理解，血斑为血凝固后的状态，血斑的样品形成有多种情况，例如将全血滴加在滤纸片上，自然干燥后得到的干血斑；或者是在法医物证检验中遇到的检测项目均涉及到血斑
。
[0013]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0014]1、
使用脱氧胆酸钠和三氟乙酸银可以更高效破坏细胞膜结构，并更加高效
、
快速的释放核酸，缩短提取时间，增加裂解效率，从而增加核酸提取量
。
[0015]2、
聚氧乙烯蓖麻油是一种非离子型表面活性剂，具有优良的洗净性
、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种裂解液，其特征在于，所述裂解液包括脱氧胆酸钠
、
盐酸胍
、
三氟乙酸银
、
非离子表面活性剂和缓冲液
。2.
根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液的成分和含量如下：脱氧胆酸钠3～
6mol/L、
盐酸胍4～
6mmol/L、
三氟乙酸银3～
5mmol/L、
非离子表面活性剂2％
～8％和缓冲液
0.04
～
0.05mol/L。3.
根据权利要求1或2所述的裂解液，其特征在于，所述非离子表面活性剂为聚氧乙烯蓖麻油
、
烷基苯磺酸钠
、NP
‑
40、Tween
‑
20、Triton
‑
X100
中的一种
、
两种或多种
。4.
一种核酸提取试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的裂解液，所述试剂盒还包括磁珠
、
结合液
、
富集液
、
清洗液
I、
清洗液
II
和洗脱液
。5.
根据权利要求4所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述结合液包括以下成分和含量：葡萄糖
10
％
‑
20
％，异丙醇
50
％，
EDTA0.5mol/L
～
3mol/L
，缓冲液
0.04mol/L
～
...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢清华，刘盼，隋修磊，刘海龙，
申请(专利权)人：山东博弘基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：