一种磁珠法提取金黄色葡萄球菌DNA的试剂盒及其提取方法技术

本申请提供了一种磁珠法提取金黄色葡萄球菌DNA的试剂盒及其提取方法，试剂盒包括裂解液、磁珠、前处理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脱液；所述裂解液包括盐酸胍、CHAPS、尿素、NP

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法提取金黄色葡萄球菌DNA的试剂盒及其提取方法


[0001]本申请涉及试剂盒
，尤其涉及一种磁珠法提取金黄色葡萄球菌DNA的试剂盒及其提取方法。

技术介绍

[0002]目前，在分子生物学实验中，核酸提取是一项最基本且最重要的环节，核酸提取的产量、纯度及完整性直接关系到下游核酸检测、生物学研究或其他新产品开发的成败。磁珠法核酸提取方法是指以超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠(以下简称磁珠)为载体，通过磁珠在高盐溶液中吸附核酸，经过磁性分离和漂洗杂质后，在低盐溶液中核酸从磁珠表面解吸附的原理进行核酸提取的方法。该方法不需离心，操作简单，便于高通量、自动化操作，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前新兴的核酸提取技术。
[0003]目前基因组DNA提取纯化的方法有很多种，如苯酚氯仿抽提法、SDS法、离心柱法等，但上述方法存在提取试剂有毒，操作繁琐，易导致污染等问题，而磁珠法不使用有毒试剂，操作简单，不易污染，已经成为目前分子生物学和临床检验医学研究的理想方法。然而经过实验，市面上针对金黄色葡萄球菌DNA提取的效果较差，核酸浓度低且蛋白质、盐等杂质较多。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术目的是提供种磁珠法提取金黄色葡萄球菌DNA的试剂盒及其提取方法：
[0005]一方面，本申请提供了一种磁珠法提取金黄色葡萄球菌DNA的试剂盒，所述试剂盒包括裂解液、磁珠、前处理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脱液；
[0006]所述裂解液包括3～6mol/L的盐酸胍、4～6mmol/L的CHAPS、3～5mmol/L的尿素、质量分数为2％～8％的NP
‑
40、0.04～0.05mol/L的磷酸缓冲液、0.7～2.3mmol/L的氨基磺酸、19～46mmol/L的辛葡糖苷和质量分数为10～30％的异丙醇；
[0007]所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；
[0008]所述前处理溶液A包括质量分数为8％
‑
15％的SDS、质量分数为3％
‑
8％的NP
‑
40和0.05～0.1mol/L的磷酸缓冲液；
[0009]所述清洗液I包括3～6mol/L的盐酸胍、4.2～5.9mmol/L的十四烷基磺基甜菜碱、0.5～3mol/L的对二乙胺苯甲酸、质量分数为0.1～0.5％的NP
‑
40、0.04～0.05mol/L的磷酸缓冲液和0.2mol/L的氯化钠；
[0010]所述清洗液II为质量分数75％的乙醇；
[0011]所述洗脱液包括0.04～0.05mol/L的磷酸缓冲液和0.005mol/L的EDTA。
[0012]进一步地，所述磁珠的粒径为1500nm。
[0013]另一方面，本申请提供了一种磁珠法提取金黄色葡萄球菌DNA的提取方法，上述试剂盒进行提取，包括如下步骤：
[0014]步骤一：培养金黄色葡萄球菌菌液24
‑
48h；
[0015]步骤二：取准备的金黄色葡萄球菌菌液，用前处理溶液A进行处理，然后加入到预分装所述试剂盒各组分的96深孔板中；
[0016]步骤三：将96深孔板放入核酸提取仪中进行提取；
[0017]步骤四：提取完成后，取对应洗脱孔中液体得到金黄色葡萄球菌DNA溶液。
[0018]进一步地，所述核酸提取仪提取中的裂解温度为75℃，裂解分两次进行，分别进行300s和600s。
[0019]进一步地，所述核酸提取仪为购自济南存昌生物技术有限公司的BNP32核酸提取仪。
[0020]通过本申请能够带来如下有益效果：
[0021]本申请提供的试剂盒，不使用酚、氯仿等有毒试剂，采用预分装到试剂板，减少人员操作步骤，从而大大降低对环境以及操作人员的危害。不使用蛋白酶K，有效降低实验成本，提高实验操作效率。使用辛葡糖苷和氨基磺酸配合本申请的其他组分，可以更高效破坏细胞膜结构，并更加高效、快速的释放核酸，缩短提取时间，增加裂解效率，从而增加核酸提取量。十四烷基磺基甜菜碱为两性磷酸酯表面活性剂分子具有优良的洗净性、抗静电性、热稳定性等并且优于一般阴离子表面活性剂的耐碱性、耐电解质性，配合本申请的其他组分，可以更好的降低干扰物质含量，提高核酸纯度。本申请经过对上述各组分进行合理复配，得到试剂盒复配体系的最佳比例，使得各组分之间发挥协同作用，使得该体系对金黄色葡萄球菌DNA具备优异的结合力和提取效果；本申请提供的核酸提取方法，提供了设定的裂解条件，配合本申请特有的试剂盒，使本申请在充分裂解金黄色葡萄球菌的同时，又保护了DNA的稳定和避免了杂质的污染，最终实现提取制得的金黄色葡萄球菌DNA溶液的DNA浓度高、蛋白质或者酚类物质的影响小且胍盐等污染物少。
附图说明
[0022]此处所说明的附图用来提供对本申请的进一步理解，构成本申请的一部分，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：
[0023]图1为本申请提供的磁珠法提取金黄色葡萄球菌DNA的试剂盒及其提取方法中各示例从菌液中提取金黄色葡萄球菌DNA产物的电泳胶图。
[0024]图中：从左向右的14条竖向孔道痕迹分别为以下示例的电泳：孔道1：Marker，孔道2
‑
8：对照组，对比例1
‑
7，孔道9
‑
14：实验组，实施例1
‑
6。
具体实施方式
[0025]此处为了更清楚的阐释本申请的整体构思，下面以实施例的方式对本专利技术的整体方案进行详细说明；在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本专利技术更为彻底的理解；然而，对于本领域技术人员来说显而易见的是，本专利技术可以无需一个或多个这些细节而得以实施；在其他的例子中，为了避免与本专利技术发生混淆，对于本领域公知的一些技术特征未进行描述。
[0026]本申请的磁珠购自洛阳吉恩特生物科技有限公司。
[0027]如未特殊说明，下述实施例中各原料组分均可通过商业途径购得，所使用的实验
仪器均为实验室常规实验仪器，性能测试方法为本领域已知测试方法。
[0028]优选的实施方式如下：
[0029]采用如下的试剂盒：
[0030]试剂盒包括裂解液、磁珠、前处理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脱液；
[0031]裂解液包括3～6mol/L的盐酸胍、4～6mmol/L的CHAPS、3～5mmol/L的尿素、质量分数为2％～8％的NP
‑
40、0.04～0.05mol/L的磷酸缓冲液、0.7～2.3mmol/L的氨基磺酸、19～46mmol/L的辛葡糖苷和质量分数为10～30％的异丙醇；磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；前处理溶液A包括质量分数为8％
‑
15％的SDS、质量分数为3％
‑
8％的NP
‑
40和0.05～0.1mol/L的磷酸缓冲液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁珠法提取金黄色葡萄球菌DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括裂解液、磁珠、前处理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脱液；所述裂解液包括3
～
6mol/L的盐酸胍、4～6mmol/L的CHAPS、3
～
5mmol/L的尿素、质量分数为2％
～
8％的NP
‑
40、0.04
～
0.05mol/L的磷酸缓冲液、0.7～2.3mmol/L的氨基磺酸、19～46mmol/L的辛葡糖苷和质量分数为10
～
30％的异丙醇；所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；所述前处理溶液A包括质量分数为8％
‑
15％的SDS、质量分数为3％
‑
8％的NP
‑
40和0.05～0.1mol/L的磷酸缓冲液；所述清洗液I包括3
～
6mol/L的盐酸胍、4.2～5.9mmol/L的十四烷基磺基甜菜碱、0.5
～
3mol/L的对二乙胺苯甲酸、质量分数为0.1～...

【专利技术属性】
技术研发人员：寇增强，刘海龙，隋修磊，刘盼，
申请(专利权)人：山东博弘基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：