一种巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂制造技术

本发明专利技术公开了一种巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂，涉及临床体外检测技术领域。所述释放剂包括试剂R1和试剂R2，其中：所述试剂R1的成分如下：缓冲液、氯化锂，PEG8000，2

【技术实现步骤摘要】
一种巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂


[0001]本专利技术涉及临床体外检测
，具体涉及一种巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂。

技术介绍

[0002]人体巨细胞病毒(human cytomegalovirus)属疱疹病毒科，又称为涎病毒，是人类疱疹病毒组中最大的一种病毒。这种病毒进入细胞内以后会导致细胞增大，所以叫做巨细胞病毒。
[0003]巨细胞病毒是疱疹病毒家族中的重要的成员之一，可引起人体巨细胞病毒感染。在我国巨细胞病毒感染广泛流行，通常情况下，很多正常人身上都潜伏有巨细胞病毒，潜伏部位常在唾液腺、乳腺、肾脏、子宫颈、睾丸、白细胞以及其它腺体中，病毒可长期或间歇地自唾液、乳汁、尿液、精子及子宫颈分泌物中排出。但在大多数免疫正常个体呈无症状感染，而在免疫抑制个体、胎儿和婴幼儿如果感染则可出现明显病症。
[0004]临床中对于人体巨细胞病毒检测主要有分离培养、ELISA和荧光定量PCR检测等，其中分离培养易受操作者技术影响、耗时长；ELISA方法重复性差，易受干扰出现假阳性问题；而人体巨细胞病毒荧光定量PCR检测有灵敏度高、特异性强等优点，现已被广泛应用。但人体巨细胞病毒荧光定量PCR检测样本前处理繁琐、需要特定的处理仪器，鉴于此本专利技术提供一种巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂，该释放剂使用不需要核酸提取仪，耗时短，操作简便，核酸释放效果好，配合人体巨细胞病毒荧光定量PCR检测试剂盒使用可以取得良好检测结果。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂。本专利技术巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂可以有效释放待测巨细胞病毒(HCMV)样本核酸，具有操作简便，耗时短等优点。
[0006]为实现上述目的，本专利技术的巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂是通过以下技术方案实现的：
[0007]本专利技术提供一种巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂，其试剂R1和试剂R2的组成如下：
[0008]所述试剂R1的成分和含量如下：
[0009][0010]所述试剂R2的成分和含量如下：
[0011][0012]进一步的，所述缓冲液为MOBS缓冲液和TAPS缓冲液，温度25℃，pH值为7.1
‑
9.1。
[0013]进一步的，所述试剂R1的成分和含量如下：
[0014][0015]试剂R2的成分和含量如下：
[0016][0017][0018]进一步的，所述试剂R1的成分和含量如下：
[0019]试剂R2的成分和含量如下：
[0020][0021]进一步的，所述试剂R1的成分和含量如下：
[0022]试剂R2的成分和含量如下：
[0023][0024][0025]本专利技术的巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂的使用方法为：
[0026]1)取500μL巨细胞病毒样本溶液加入500μL试剂R1，涡旋混匀后，室温放置5分钟。然后，12000rpm离心20分钟，弃上清。
[0027]2)将1)所得沉淀用45μL巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂重悬，用移液枪吸打混匀，室温放置15分钟，最终所得溶液即为待测样本。根据试剂盒要求样本用量用于巨细胞病毒(HCMV)的荧光定量PCR检测。
[0028]本专利技术检测的基本原理为：
[0029]待测样本加入试剂R1后，在试剂R1作用下巨细胞病毒得到浓缩沉淀，通过离心得到沉淀。
[0030]然后向沉淀中加入试剂R2，在TAPS缓冲液提供的温和环境下，表面活性剂为蓖麻油聚氧乙烯(30)醚可以有效裂解细胞，使蛋白质变性释放出核酸；尿素和胆酸钠可以使蛋白质变性、溶解，进一步促进核酸释放；表面活性剂脂肪醇醚磺基琥珀酸酯二钠盐在氯化锂
存在下，进一步促进核酸释放和溶解。
[0031]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0032]1)本专利技术所述巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂优选的TAPS缓冲液提供了温和的缓冲环境，对后续PCR扩增无明显影响。
[0033]2)采用的新型表面活性剂蓖麻油聚氧乙烯(30)醚和脂肪醇醚磺基琥珀酸酯二钠盐，可以更有效的释放巨细胞病毒核酸。
[0034]3)优化反应体系，通过科学配比，显著提高了核酸的释放效率，有效降低了样本处理体系造成的干扰。
[0035]4)该试剂操作简便快速，适用于巨细胞病毒(HCMV)的荧光定量PCR检测的样本处理过程。
附图说明
[0036]图1为本专利技术巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂处理后的巨细胞病毒(HCMV)阳性样本扩增曲线。
具体实施方式
[0037]为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面将结合具体实施例和附图进行详细描述。
[0038]对照组1：
[0039]为市场常见的某核酸提取试剂盒(配套核酸提取仪使用)，试剂使用方法按照其说明书进行。
[0040]对照组2：
[0041]为市场常见的某核酸释放剂，使用方法按照其说明书进行。
[0042]实施例1：
[0043]本实施例的巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂包括试剂R1和试剂R2，其中：
[0044]试剂R1的成分和含量如下：
[0045][0046]试剂R2的成分和含量如下：
[0047][0048]本实施例的检测方法：
[0049]1)取500μL巨细胞病毒样本溶液加入500μL试剂R1，涡旋混匀后，室温放置5分钟。然后，12000rpm离心20分钟，弃上清。
[0050]2)将1)所得沉淀用45μL巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂重悬，用移液枪吸打混匀，室温放置15分钟，最终所得溶液即为待测样本。根据试剂盒要求样本用量用于巨细胞病毒(HCMV)的荧光定量PCR检测。
[0051]实施例2：
[0052]本实施例的巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂包括试剂R1和试剂R2，其中：
[0053]试剂R1的成分和含量如下：
[0054][0055]试剂R2的成分和含量如下：
[0056][0057]检测方法同实施例1的检测方法。
[0058]实施例3：
[0059]本实施例的巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂包括试剂R1和试剂R2，其中：
[0060]试剂R1的成分和含量如下：
[0061][0062][0063]试剂R2的成分和含量如下：
[0064][0065]检测方法同实施例1的检测方法。
[0066]释放效率验证试验：
[0067]取巨细胞病毒(HCMV)参考品(巨细胞病毒培养物，理论核酸浓度40～60ng/μl)，分别按照实施例1、实施例2和实施例3的配方配制试剂，进行样本处理，通过Qubit荧光计检测所释放的核酸浓度，与对照组进行对照检测，检测结果如表1所示：
[0068]表1释放效率验证试验结果
[0069][0070]由表1中检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2，其中：所述试剂R1的成分和含量如下：所述试剂R2的成分和含量如下：2.根据权利要求1所述的巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂，其特征在于，所述缓冲液为MOBS缓冲液或TAPS缓冲液，温度25℃，pH值为7.1
‑
9.1。3.根据权利要求1
‑
2中任一所述的巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂，其特征在于，所述试剂R1的成...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙睿佳，李志明，胡晓飞，董雯，
申请(专利权)人：山东博弘基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：