一种通用型核酸提取试剂盒及核酸提取方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学检测技术领域，具体公开一种通用型核酸提取试剂盒及核酸提取方法。所述核酸提取试剂盒的裂解液包括如下工作浓度的组分：异硫氰酸胍2mol/L

【技术实现步骤摘要】
一种通用型核酸提取试剂盒及核酸提取方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学检测
，尤其涉及一种通用型核酸提取试剂盒及核酸提取方法。

技术介绍

[0002]近年来，PCR检测技术的应用越来越普遍，广泛应用于医药、食品、畜牧、水产等多个领域。核酸提取是各种分子生物学检测方法的基础，获得有效、可靠的核酸是PCR检测技术的关键。
[0003]随着检测技术和样本类型的增多，现在市面上存在多种核酸检测试剂盒，如细菌提取试剂盒、组织提取试剂盒、全血提取试剂盒等，且每种试剂盒的提取方法也不尽相同。目前，商品化的磁珠法核酸提取试剂盒大部分都需要使用蛋白酶对样本预处理10
‑
30min，操作复杂，耗时较长。而且，现有各种核酸试剂盒为了提高核酸的提取效果，主要是将精力集中在提取样本类型单一化、引入大量的蛋白变性剂、增加洗涤步骤及洗涤时间、只针对DNA或RNA单一种类核酸进行提取等方面，虽然这在一定程度上保证了提取核酸的浓度和质量，但是却导致磁珠法核酸提取试剂盒适用范围较窄，不适用于自动化操作，提取效果不稳定等问题的出现。因此，研发一种适用范围广、适用于自动化操作，提取效果稳定的通用型核酸提取试剂盒及核酸提取方法是本领域亟待解决的问题。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中核酸提取试剂盒存在的适用范围较窄，不适用于自动化操作，提取效果不稳定等问题，本专利技术提供一种通用型核酸提取试剂盒及核酸提取方法。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是：
[0006]一种通用型核酸提取试剂盒，所述核酸提取试剂盒的试剂包括裂解液、第一洗涤液、第二洗涤液和核酸洗脱液，所述裂解液包括如下工作浓度的组分：
[0007]异硫氰酸胍2mol/L
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5mol/L、三羟甲基氨基甲烷15mmol/L
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80mmol/L、醇类化合物27vol％
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40vol％、四氧化三铁羟基磁珠5vol％
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10vol％、Triton X
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100 8vol％
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15vol％和NP
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40 3vol％
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5vol％；
[0008]所述四氧化三铁羟基磁珠的粒径为200nm
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450nm；所述裂解液的pH为6.5
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8。
[0009]相对于现有技术，本专利技术提供的通用型核酸提取试剂盒，通过特定的裂解液，实现了对各种生物样本中核酸的充分提取；其中，异硫氰酸胍能够快速破坏细胞膜，快速释放核酸，避免核酸的降解，从而有利于确保提取核酸的完整性，同时，异硫氰酸胍还能变性蛋白质，使蛋白质变性沉淀，从而使核酸能够摆脱蛋白质的缠绕；选择Triton X
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100和NP
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40复配，有利于使核酸在裂解液中沉淀富集，配合特定粒径的四氧化三铁羟基磁珠，更有利于提高吸附核酸的选择性，减少磁珠吸附的杂质，从而提高核酸的提取率和纯度，实现了边裂解边吸附，更适用于全自动化核酸提取应用，有利于核酸提取效率的大幅度提高，具有较高的应用前景。
[0010]优选的，所述四氧化三铁羟基磁珠为南京东纳生物科技有限公司的Mag9210型号磁珠。
[0011]优选的纳米级磁珠对各种核酸具有较高的吸附性，有利于试剂盒通用型功能的实现，且有利于富集裂解液中的核酸，保证所提取的核酸纯度好、浓度高。
[0012]采用本专利技术独特的裂解液、洗涤液以及洗脱液，配合优选的纳米级磁珠，可使核酸充分从细胞内释放，并有效与磁珠结合，同时，还能最大限度地去除样本的蛋白质、色素、脂类及其他抑制性杂质污染，减少磁珠吸附的杂质，提高提取核酸的纯度和得率。
[0013]优选的，所述醇类化合物为乙醇或异丙醇中的一种或两种。
[0014]优选的，所述第一洗脱液包括如下工作浓度的组分：异硫氰酸胍2mol/L
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4mol/L，三羟甲基氨基甲烷10mmol/L
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100mmol/L和乙醇55vol％
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60vol％。
[0015]在第一洗脱液中加入异硫氰酸胍能够使蛋白质变性沉淀，从而使核酸能够摆脱蛋白质的缠绕，充分洗掉核酸上残存的蛋白质等杂质，提高提取的核酸的纯度。
[0016]优选的，所述第二洗涤液为体积百分含量为70％
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80％乙醇水溶液。
[0017]优选的第二洗脱液有利于充分解离核酸表面的盐离子及其它杂质，提高提取核酸的纯度。
[0018]优选的，所述核酸洗脱液为DEPC水。
[0019]进一步地，所述核酸洗脱液中还包括0
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100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷。
[0020]优选的洗脱液可以将核酸从核酸吸附物上洗脱，提高洗脱效率。
[0021]本专利技术还提供了一种利用上述任一项所述的通用型核酸提取试剂盒提取核酸的方法，至少包括以下步骤：
[0022]步骤a、将核酸提取裂解液与生物样本混合，于70℃
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80℃裂解2min
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4min，磁吸，得磁珠
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核酸复合物；
[0023]步骤b、向所述磁珠
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核酸复合物中加入所述第一洗涤液，振荡混匀，磁吸，收集洗涤后的磁珠
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核酸复合物；
[0024]步骤c、向洗涤后的磁珠
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核酸复合物中加入所述第二洗涤液，振荡混匀，磁吸，收集洗涤后的磁珠
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核酸复合物，干燥；
[0025]步骤d、向步骤c所得磁珠
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核酸复合物中加入所述核酸洗脱液，70℃
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80℃洗脱20s
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40s，磁吸使核酸与所磁珠分离，得提取核酸。
[0026]本专利技术所提供的提取核酸的方法，核酸提取时间短，裂解与吸附步骤一步完成，减少了操作步骤，更适用于全自动化核酸提取应用，有利于大幅度提高样本处理效率，实现快速高通量提取出生物样品中的核酸，可广泛应用于全血、血清、组织匀浆液、拭子保存液、细菌等多种样本核酸的提取，具有较高的临床应用前景。
[0027]优选的，步骤a至步骤d中，磁吸次数均为2
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3次。
[0028]优选的，所述提取核酸的方法所用仪器为全自动核酸提取仪。
[0029]采用现有市售的全自动核酸提取仪均可达到基本相当的提取效果，优选，所述全自动核酸提取仪包括预分板，如湾区生物BBEX
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32型、拜耳ZK
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01型、河北三狮ES08型等均可。
[0030]采用本专利技术提高的核酸提取试剂盒以及核酸提取方法，可实现对多种生物样本核酸的快速提取，仪器通用性较高，采用不同核酸提取仪均可获得稳定的提取效果，且提取出
来的核酸片段完整、纯度高、得率高，PCR检测效果更好，具有较高的推广应用价值。
附图说明本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通用型核酸提取试剂盒，所述核酸提取试剂盒的试剂包括裂解液、第一洗涤液、第二洗涤液和核酸洗脱液，其特征在于，所述裂解液包括如下工作浓度的组分：异硫氰酸胍2mol/L
‑
5mol/L、三羟甲基氨基甲烷15mmol/L
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80mmol/L、醇类化合物27vol％
‑
40vol％、四氧化三铁羟基磁珠5vol％
‑
10vol％、Triton X
‑
1008vol％
‑
15vol％和NP
‑
40 3vol％
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5vol％；所述四氧化三铁羟基磁珠的粒径为200nm
‑
450nm；所述裂解液的pH为6.5
‑
8。2.如权利要求1所述的通用型核酸提取试剂盒，其特征在于，所述四氧化三铁羟基磁珠为南京东纳生物科技有限公司的Mag9210型号磁珠。3.如权利要求1所述的通用型核酸提取试剂盒，其特征在于，所述醇类化合物为乙醇或异丙醇中的一种或两种。4.如权利要求1所述的通用型核酸提取试剂盒，其特征在于，所述第一洗脱液包括如下工作浓度的组分：异硫氰酸胍2mol/L
‑
4mol/L，三羟甲基氨基甲烷10mmol/L
‑
100mmol/L和乙醇55vol％
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60vol％。5.如权利要求1所述的通用型核酸提取试剂盒，其特征在于，所述第二洗涤液为...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳梦思，石磊，王菁，刘桐山，时国强，董振国，
申请(专利权)人：河北三狮生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：