血吸虫病快速测定试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种血吸虫病快速测定试剂盒及其制备方法。本发明专利技术将吸水垫、硝酸纤维素膜、胶体金结合垫和样品垫水平方向顺序相接并固定在底板上。底板置于盒体内，所述盒体对应于硝酸纤维素膜的位置设有观察窗，对应于样品垫的位置设有加样孔。使用本发明专利技术仅需一步操作，不仅可以检测血清、血浆样本，还可以检测全血样本，省去了血液样本要经过离心步骤才能得到血清样本的步骤，大大提高了筛查的速度，还能检测牛、马、猪、兔等动物是否有血吸虫病，克服了其他试剂盒检测不同种属还需要制备不同的试剂盒的缺点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种血吸虫病快速测定试剂盒，无需特殊的仪器和专业的技术 人员,就可完成观l]定。本专利技术还涉及一种血吸虫病快速测定试剂盒的制备方法，避免了传统方法 繁琐的操作，方便现场快速检测。
技术介绍
血吸虫病是世界范围内广泛流行的一种严重危害人、畜健康的寄生虫病， 其易感动物包括人、猪、兔、牛、羊等家畜及野生动物，家畜也是人体血吸虫病最主要的传染源，全世界约有6亿人口为血吸虫病高危人群。我国通过综合 治理，疫情一度得到控制，但近年来发病率又呈上升趋势，同时在已经消灭血 吸虫病的地区仍有长期巩固与监测的任务。目前我国约有6500万人生活在疫区， 慢性血吸虫病人估计在100万以上。日本血吸虫感染宿主后，宿主会在2-4周内 产生特异性抗体，并且血吸虫病经治愈后，宿主体内的抗体仍然会存在并持续 很长时间。检出血吸虫抗体说明患者正被感染或既往感染，检测结果具有重要 的病原学诊断意义。根据统计数据显示，大部分流行区的人畜血吸虫病感染率 在3%-5%，局部地区人畜血吸虫病感染率可高达68%。血吸虫病传统的检测方法是粪检等病原学检测，需要投入较大的人力、物 力和资金。现在主要使用的是免疫学检测，如环卵沉淀试验、间接血凝试验、 酶联免疫吸附试验、斑点酶联免疫吸附试验等，但均有一定的缺陷，所需检测 时间比较长， 一般需要40-240分钟，有的甚至长达72小时，需要仪器设备，不适合在现场广泛推广使用。中国专利200510050188.1提供了一种诊断血吸虫病 的试剂盒及检测方法，该方法检测歩骤为检测时需采取血样滴于纸面，凉干 后裁取干燥血纸在生理盐水中浸泡一段时间，得到的血样浸出液用玻璃毛细血 管吸取后在硝酸纤维素膜上点样，室温下放置一段时间后再往硝酸纤维素膜上 滴加血吸虫抗原胶体金，点样处显红色斑点为阳性，否则为阴性。这种方法缺 点在于在检测时不仅需要其他的仪器设备，而且操作步骤繁琐，费时费力。在当前血吸虫病防治工作中，迫切需要一种快速、简便、准确、能用于现 场检测的工具，以提高现场大规模的筛查速度。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种血吸虫快速测定试剂盒，仅需一步操作，省去了 血液样本要经过离心步骤才能得到血清样本的步骤，大大提高了筛查的速度。本专利技术的另一个目的是提供一种血吸虫快速测定试剂盒的制备方法，解决 传统检测耗材多、操作繁琐、检测时间长、对工作条件要求高的问题。对于血吸虫快速测定试剂盒，本专利技术解决所述技术问题所采用的技术方案是血吸虫病快速测定试剂盒，包括底板，还包括硝酸纤维素膜、胶体金结合 垫、样品垫和吸水垫，所述吸水垫、硝酸纤维素膜、胶体金结合垫和样品垫水 平方向顺序相接并固定在底板上。水平方向连接方式有两种， 一种是水平方向 首尾连接， 一种是水平方向的部分重叠连接。本专利技术的一个优选方式是如上所述的血吸虫快速测定试剂盒还包括盒体， 底板置于盒体内，所述盒体盒面上对应于硝酸纤维素膜的位置设有观察窗，对 应于样品垫的位置设有加样孔。所述观察窗为方形孔或透明片。本专利技术的另一个优选方式是如上所述的血吸虫快速测定试剂盒，吸水垫上 方设有产品标签层，胶体金结合垫上方设有箭头标签层。本专利技术工作原理是将血吸虫虫卵抗原以条带状固定于硝酸纤维素膜上作 为检测线，将标记有第二抗体的胶体金粒子吸附在胶体金结合垫上，当待测样 品(血液)加到样品垫上后，红细胞在样品垫上发生凝集并固定在样品垫上， 血浆样本通过毛细作用向前移动，与胶体金结合垫上的胶体金标记试剂相溶并 相互反应，继续向前移动经过硝酸纤维素膜上含有相对应的检测抗原的区域时， 如果血液样品含有血吸虫抗体，胶体金标记试剂复合物与抗原发生特异性结合 而被截留，聚集在检测线上显色呈阳性；如果样品不含有血吸虫抗体，胶体金 蛋白复合物与抗原不发生特异性结合，检测线上不显色呈阴性。对于上述血吸虫病快速测定试剂盒的制备方法，本专利技术解决所述技术问题 采用的技术方案是包括如下步骤1) 样品垫的制备将浓度为0.5mg/ml-lmg/ml的植物凝集素或抗人红细胞抗体缓冲溶液处理 包被载体，低温冻干，裁切成长条备用；2) 胶体金结合垫的制备A.胶体金溶液的制备以纯化水、1%氯金酸溶液和1%柠檬酸钠溶液为原 料，其中1%氯金酸溶液与1%柠檬酸钠溶液的体积相等，先将纯化水加热搅拌， 再加入1%氯金酸溶液使氯金酸的终浓度为万分之一，待溶液微沸时，快速加 入1%柠檬酸钠溶液，继续加热并搅拌，5-10分钟后停止加热，溶液冷却至室温， 得到平均直径在40nm-50nm的胶体金溶液，4'C保存备用；7B. 胶体金pH的调节上述歩骤得到的胶体金溶液调节PH在6-8;C. 胶体金标记上述步骤得到的胶体金溶液中加入待标记蛋白，搅拌10-30 分钟后，得到的每100ml溶液中加入10ml 10%的牛血清白蛋白，混匀后 8000-12000 rpm离心30分钟，弃上清，沉淀经处理得到胶体金蛋白复合物；D. 胶体金结合垫的制备上述步骤得到的胶体金蛋白复合物均匀的铺在结 合垫上，低温冻干，裁切成长条备用；3) 血吸虫虫卵抗原的制备将血吸虫虫卵抗原研磨后，加入0.85%的生理盐水溶液中，置于-2(TC冷冻 过夜，白天溶解，如此反复冻融5-10次后置于碎冰块中，用超声波破碎3分钟， 反复破碎10次，12000 rpm高速离心30分钟，取上清液即为血吸虫虫卵抗原；4) 硝酸纤维素膜设置检测线和质控线用包被机将吸入到检测线注射泵中 的lmg/ml血吸虫虫卵抗原和吸入到质控线注射泵中lmg/ml的抗人IgG包被到 硝酸纤维素膜上分别形成检测线和质控线，于37。C干燥过夜后备用。所述沉淀是这样处理得到胶体金蛋白复合物的沉淀按照100ml:10ml的比 例，每100ml胶体金用10ml含有1%牛血清白蛋白、0.1%聚乙二醇、pH=8.2的 PBS溶液悬浮。所述样品垫采用玻璃纤维膜或无纺布作为包被载体，胶体金结合垫采用玻 璃纤维膜、无纺布或聚酯膜作为包被载体。所述硝酸纤维素膜采用尼龙膜、羧化纤维素膜或纯纤维素膜替代。 本专利技术血吸虫病快速测定试剂盒的检测方法按照以下步骤操作将待测样 本直接加入到试剂盒的加样孔中，再使用滴管滴加2-3滴稀释液于加样孔中，15 分钟内观察窗内检测线显色即为阳性，检测线不显色为阴性。本专利技术的有益效果是(1) 本专利技术将吸水垫、硝酸纤维素膜、胶体金结合垫和样品垫顺序铺在底 板上，体积小，制作方便；再置于盒体内，体积小、便于携带；(2) 盒体上设有供样品进入的加样孔和供观测结果的观察窗，根据是否显 色判断检测结果，准确可靠，没有人为操作误差；(3) 能大大血吸虫病縮短检测时间，具有快速、简单、现场、不需要昂贵 仪器、不需要对人员进行专业培训等优点；(4) 本专利技术将胶体金粒子标记在捕获抗体上，没有有害物质及放射性物质 的参与，安全可靠，适用于血吸虫病的诊断；(5) 不仅适用于检测人体血液样本中是否存在血吸虫抗体，还能检测牛、 马、猪、兔等动物的血液样本是否存在血吸虫抗体，克服了其他试剂盒检测不 同种属还需要制备不同的试剂盒的缺点；(6) 可批量生产，可单人单份、也可多人单份，适用于临床快速诊断和现 场大数量的快速检测；易于保存，有利于基层单位推广。附图说明图l是实施例l截面图； 图2是实施例2截面图； 图3是本文档来自技高网...

【技术保护点】
血吸虫病快速测定试剂盒，包括底板（１），其特征在于，还包括硝酸纤维素膜（２）、胶体金结合垫（３）、样品垫（４）和吸水垫（５），所述吸水垫（５）、硝酸纤维素膜（２）、胶体金结合垫（３）和样品垫（４）水平方向顺序相接并固定在底板（１）上。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王保宁，刘东泽，唐涪嘉，刘廷勇，包德全，
申请(专利权)人：四川省迈克科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]