嵌合流感疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种嵌合流感病毒血球凝集素(HA)多肽，所述多肽包含与一或多个球状头域序列融合的一或多个茎域序列，所述一或多个茎域序列各自与H1亚型HA(H1 HA)及/或H5亚型HA(H5 HA)的茎域共同序列具有至少60％同源性，所述一或多个球状头域序列各自与H1亚型HA(H1 HA)或H5亚型HA(H5 HA)的球状头域共同序列具有至少60％同源性。少60％同源性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合流感疫苗
相关申请案
[0001]本专利技术主张以下优先权：美国临时申请案美国申请序号(USSN)62/022,328，申请于2020年5月8日。其内容各自以全文引用方式并入本文中。序列表
[0002]本案包含以ACSII格式电子提交的序列表，其内容以全文引用方式并入本文中。所述ACSII复本创建于2021年5月6日，其名为G4590
‑
08600PCT_SeqListing.txt且其档案大小为28千位元组。


[0003]本专利技术涉及嵌合流感病毒血球凝集素(HA)多肽、含有其的免疫原性/疫苗组合物以及其应用。

技术介绍

[0004]用于产生流感疫苗的传统方法为在无特定病原(SPF)鸡胚蛋中培养病毒，且所述方法常常需要超过六个月来进行大批量生产。然而，一些疫苗病毒株在蛋中生长不良，且对鸡蛋过敏的人可能会产生安全问题。已经开发出基于病毒的细胞培养的新型方法来替代基于蛋的方法；但细胞培养方法仍具有产生潜在地有害病毒的风险。为了克服这些问题，替代性策略的研究已表明，基于重组HA的疫苗可诱导抵抗流感病毒感染的中和抗体。然而，特定流感病毒亚型所诱导的抗体通常可能不会有效地中和其他流感亚型。另外，由于病毒持续不断的突变，因此必须每年更新疫苗。
[0005]因此，仍需要研发抵抗广谱流感病毒株的通用疫苗。

技术实现思路

[0006]在一个态样中，本专利技术提供嵌合流感病毒血球凝集素(HA)多肽，所述多肽包含与一或多个球状头域序列融合的一或多个茎域序列，所述一或多个茎域序列各自与H1亚型HA(H1 HA)及/或H5亚型HA(H5 HA)的茎域共同序列具有至少60％同源性，所述一或多个球状头域序列各自与H1亚型HA(H1 HA)或H5亚型HA(H5 HA)的球状头域共同序列具有至少60％同源性。
[0007]在一些实施例中，HA为A型流感HA、B型流感HA或C型流感HA。
[0008]在一些实施例中，同源性为至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。
[0009]在一些实施例中，茎域序列为H1 HA的N端茎区段或H1 HA的C端茎区段；H1 HA的N端茎区段或H1+H5 HA序列的C端茎区段；或H5 HA的N端茎区段或H1+H5 HA序列的C端茎区段。
[0010]在一些实施例中，H1 HA及/或H5 HA的茎域共同序列包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列。
[0011]在一些实施例中，H1 HA或H5 HA的球状头域共同序列包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：11的氨基酸序列。
[0012]在一个实施例中，嵌合流感病毒HA多肽包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：12的氨基酸序列。
[0013]在一些实施例中，HA上的一或多个醣位点经单醣化。在另一实施例中，单醣化HA在各醣位点上仅具有N
‑
乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)。
[0014]在一实施例中，嵌合流感病毒HA多肽用作免疫原。
[0015]在另一态样中，本专利技术提供包含嵌合流感病毒HA多肽及佐剂的免疫原性组合物。在一实施例中，佐剂为醣脂佐剂。
[0016]在另一态样中，本专利技术提供包含编码本专利技术多肽的核酸序列及视情况选用的编码信号肽的核酸序列的重组多核苷酸。在一些实施例中，信号肽包含SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14的序列。
[0017]在另一态样中，本专利技术提供包含本专利技术的重组多核苷酸的载体。亦提供包含本专利技术的载体的宿主细胞。
[0018]在另一态样中，本专利技术提供使个体对流感病毒免疫的方法，所述方法包含向个体投与有效量的本专利技术的嵌合流感病毒血球凝集素(HA)多肽或免疫原性组合物。
[0019]在另一态样中，本专利技术提供预防个体的流感病毒疾病的方法，所述方法包含向个体投与有效量的本专利技术的嵌合流感病毒血球凝集素(HA)多肽或免疫原性组合物。
[0020]在一个实施例中，本文所描述的方法引发CD4
+
及/或CD8
+
T细胞免疫反应。
[0021]在一个实施例中，本文所描述的方法诱导茎特异性抗体，这些茎特异性抗体具有针对H1、H3、H5及H7病毒株及亚型的较高抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、较佳中和活性及较强交叉保护活性。
[0022]在一个实施例中，本文所描述的方法提高疫苗功效，产生更多IFN
‑
γ、IL
‑
4及CD8+记忆T细胞。
附图说明
[0023]图1(A)至(I).具有共同H5球状头及共同H1茎的嵌合H5/1构筑体(cHA)及通过cHA
mg
免疫原接种引发的广泛交叉保护性茎特异性抗体。(A)交换H1/5(H1球状头及H1+H5[HA2]茎)、交换H5/1(H5球状头及H5+H1[HA2]茎)及嵌合H5/1(cHA：H5球状头及H1茎)的构筑体。(B)针对H1N1加利福尼亚/07/2009及H5N1越南/1194/2004病毒的中和活性。(C)接种PBS(对照)、HA+Alu或HA+C34的小鼠中的经HA(黑色条柱)或PBS(白色条柱)对照刺激2天的脾细胞中的产生颗粒酶B(GrzB)的CD8
+
T细胞数目是通过流式细胞分析来评估。(D
‑
I)接种有Al(OH)3佐剂的cHA
fg
及cHA
mg
相对于有C34佐剂的cHA
fg
及cHA
mg
的小鼠的抗体力价是在第42天通过ELISA利用A/加利福尼亚/07/2009 H1N1 HA蛋白(D)、A/布里斯班/59/2007 H1N1 HA蛋白(E)、A/布里斯班/10/2007 H3N2 HA蛋白(F)、A/越南/1194/2004 H5N1 HA蛋白(G)、A/上海/2/2013 H7N9 HA蛋白(H)及A/布里斯班/59/2007(Bris/07)茎HA(第4900号)蛋白(I)作为包被抗原进行量测。端点抗体力价定义为用于产生比由阴性对照(免疫前血清)产生的光学吸亮度高2.5倍的吸亮度的抗血清的最后稀释度。数据是通过使用司徒顿氏t检定(Student
′
t test)及来自Prism的二因子ANOVA来检查；差异视为统计学上显著的，*P＜0.05；**P＜
0.01。资料代表平均值
±
SEM。
[0024]图2(A)至(C).针对表达H1N1、H3N2或H5N1及亚型的HA的目标细胞的来自接种cHA的小鼠的抗血清的ADCC报导体分析。将自用有氢氧化铝或C34佐剂的cHA
fg
或cHA
mg
蛋白免疫的小鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合流感病毒血球凝集素(HA)多肽，其包含与一或多个球状头域序列融合的一或多个茎域序列，所述一或多个茎域序列各自与H1亚型HA(H1 HA)及/或H5亚型HA(H5 HA)的茎域共同序列具有至少60％同源性，所述一或多个球状头域序列各自与H1亚型HA(H1 HA)或H5亚型HA(H5 HA)的球状头域共同序列具有至少60％同源性。2.如权利要求1的多肽，其中所述HA为A型流感HA、B型流感HA或C型流感HA。3.如权利要求1的多肽，其中所述同源性为至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。4.如权利要求1的多肽，其中所述茎域序列为H1 HA的N端茎区段或H1 HA的C端茎区段；H1 HA的N端茎区段或H1+H5 HA序列的C端茎区段；或H5 HA的N端茎区段或H1+H5 HA序列的C端茎区段。5.如权利要求1的多肽，其中所述H1 HA的茎域共同序列包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列。6.如权利要求1的多肽，其中所述H5HA的球状头域共同序列包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：11的氨基酸序列。7.如权利要求1的多肽，其包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：12的氨基酸序列。8.如权利要求l的多肽，其中HA上的一或多个醣位点经单醣化，其中单醣化HA在各醣位点上仅...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁启惠，廖心瑜，王世吉，柯怡安，林国仪，马彻，郑婷仁，
申请(专利权)人：刘扶东，
类型：发明
国别省市：