重组抗体及其用途制造技术

本揭示内容是关于一种对PEDV具有结合亲和力及/或中和活性的重组抗体。依据本揭示内容某些实施方式，该PEDV是基因型1(G1)或基因型2b(G2b)PEDV。本揭示内容还关于利用所述重组抗体来诊断及治疗PEDV感染的方法。组抗体来诊断及治疗PEDV感染的方法。组抗体来诊断及治疗PEDV感染的方法。

【技术实现步骤摘要】
重组抗体及其用途


[0001]本揭示内容是关于诊断及治疗病毒感染的领域。更具体来说，本揭示内容是关于一种新颖的重组抗体，以及该重组抗体于诊断及治疗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染的用途。

技术介绍

[0002]PEDV是一种具有传染性的猪肠道病毒，会使新生仔猪及哺乳仔猪产生猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)，进而影响全球养猪产业。历史较为悠久的基因型1(G1；亦称为低致病基因型)PEDV首次于1970年代晚期在比利时确认，之后数十年成为一种偶发于欧洲及亚洲的地方流行疾病。藉由亲缘比对分析，一种属于基因型2(G2；亦称为高致病基因型，包含局部流行的G2a，以及全球流行的G2b)的新PEDV变异株于2010年在中国首次出现，之后快速遍布北美及亚洲地区。此种新的PEDV变异株造成新生仔猪的高发病率及高死亡率。直到今日，相关领域仍无有效治疗及控制新生仔猪季节性爆发PED的药剂。
[0003]有鉴于此，相关领域亟需一种新颖的用以治疗PEDV感染的药剂，据以降低PEDV感染对猪只健康及相关产业的影响。

技术实现思路

[0004]
技术实现思路
旨在提供本揭示内容的简化摘要，以使阅读者对本揭示内容具备基本的理解。此
技术实现思路
并非本揭示内容的完整概述，且其用意并非在指出本专利技术实施例的重要/关键组件或界定本专利技术的范围。
[0005]本揭示内容的第一方面是关于一种用以诊断及/或治疗PEDV感染的重组抗体。所述重组抗体包含一轻链可变(light chain variable,VL)区及一重链可变(variable heavy chain,VH)区，其中VL区包含一第一轻链互补决定区(complementarity determining region)(CDR
‑
L1)、一第二轻链CDR(CDR
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L2)及一第三轻链CDR(CDR
‑
L3)，且VH区包含一第一重链CDR(CDR
‑
H1)、一第二重链CDR(CDR
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H2)及一第三重链CDR(CDR
‑
H3)。
[0006]依据本揭示内容某些实施方式，CDR
‑
L1包含「ENVGTY」(序列编号：1)的氨基酸序列，CDR
‑
L2包含「GTF」的氨基酸序列，且CDR
‑
L3包含「GQSYNYPFT」(序列编号：2)的氨基酸序列。在该些实施方式中，CDR
‑
H1包含「GYTFTNYM」(序列编号：3)的氨基酸序列，CDR
‑
H2包含「INPSTGYT」(序列编号：4)的氨基酸序列，且CDR
‑
H3包含「ATSTLITGDY」(序列编号：5)的氨基酸序列。
[0007]依据某些较佳的实施方式，VL区包含与序列编号：6具有至少85％序列相似度的氨基酸序列，且VH区包含与序列编号：7具有至少85％序列相似度的氨基酸序列。在一特定实施例中，VL区包含与序列编号：6具有100％序列相似度的氨基酸序列，且该VH区包含与序列编号：7具有100％序列相似度的氨基酸序列。
[0008]依据某些实施方式，所述重组抗体是一单链可变片段(single
‑
chain variable fragment,scFv)。较佳地，所述重组抗体更包含一连接VL区及VH区的连接符。依据某些实施
方式，该连接符包含(GGGGS)3(序列编号：8)的氨基酸序列。
[0009]本揭示内容的第二方面是关于一种藉由一个体的生物检体来诊断该个体是否遭受PEDV感染的方法。本专利技术方法包含利用本揭示内容所述的重组抗体来检测该生物检体中是否存在PEDV的棘(spike,S)蛋白，其中S蛋白存在代表该个体遭受PEDV的感染。
[0010]依据某些实施方式，该PEDV是G1 PEDV。依据某些实施方式，该PEDV是G2b PEDV。
[0011]依据所需目的不同，生物检体(试样)可以是血液检体(例如，全血检体、血清检体或血浆检体)、口腔检体、肠道检体、直肠检体或粪便检体。
[0012]本揭示内容的另一方面是关于一种用以治疗一个体的PEDV感染的方法。本专利技术方法包含对该个体投予一有效量的本揭示内容所述的重组抗体。
[0013]本揭示内容提供一种本专利技术重组抗体于制备一药物的用途，其中该药物是用以治疗一个体的PEDV感染。
[0014]依据某些实施方式，该PEDV是G2b PEDV。
[0015]在参阅下文实施方式后，本专利技术所属
中具有通常知识者当可轻易了解本专利技术的基本精神及其他专利技术目的，以及本专利技术所采用的技术手段与实施方式。
【附图说明】
[0016]为让本专利技术的上述与其他目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，附图的说明如下：
[0017]图1是依据本揭示内容实施例2所绘示的线性图，用以阐述重组scFv与PEDV病毒体(virion)的结合。将PEDV
‑
PT(G2b PEDV)及PEDV
‑
CV777(G1PEDV)的病毒体作为抗原涂布于培养盘后，以连续稀释的scFv进行检测。利用酶联免疫吸附法(enzyme
‑
linked immunosorbent assay,ELISA)来分析结果。将S/P比值绘制为scFv浓度的函数。
[0018]图2是依据本揭示内容实施例4所绘示的照片，其是关于中和试验观察到的细胞病变作用(cytopathic effect,CPE)。将重组scFv与每毫升400TCID
50
的PEDV
‑
PT(G2b PEDV)共同培养2小时后，加至Vero细胞。每24小时观察一次CPE，据以决定本专利技术scFv的中和能力。于结束时间点(72小时)拍摄照片。图A：经病毒感染及投予每毫升25微克的重组scFv的细胞。图B：经病毒感染而未投予重组scFv处理的细胞，作为感染对照组。图C：仅投予磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)的细胞，即未经病毒感染且未投予重组scFv处理的细胞，作为未感染对照组。黑色线条表示长度为100微米。
【具体实施方式】
[0019]为了使本揭示内容的叙述更加详尽与完备，下文针对了本专利技术的实施方式与具体实施例提出了说明性的描述；但这并非实施或运用本专利技术具体实施例的唯一形式。实施方式中涵盖了多个具体实施例的特征以及用以建构与操作这些具体实施例的方法步骤与其顺序。然而，亦可利用其他具体实施例来达成相同或均等的功能与步骤顺序。
[0020]I.定义
[0021]虽然用以界定本专利技术较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组抗体，包含轻链可变(light chain variable,VL)区及一重链可变(variable heavy chain,VH)区，其中所述VL区包含第一轻链互补决定区(complementarity determining region)(CDR
‑
L1)、第二轻链CDR(CDR
‑
L2)及第三轻链CDR(CDR
‑
L3)，且所述VH区包含第一重链CDR(CDR
‑
H1)、第二重链CDR(CDR
‑
H2)及第三重链CDR(CDR
‑
H3)，其中所述CDR
‑
L1、CDR
‑
L2及CDR
‑
L3分别包含ENVGTY(序列编号：1)、GTF及GQSYNYPFT(序列编号：2)的氨基酸序列；以及所述CDR
‑
H1、CDR
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H2及CDR
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H3分别包含GYTFTNYM(序列编号：3)、INPSTGYT(序列编号：4)及ATSTLITGDY(序列编号：5)的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的重组抗体，其中所述VL区包含与序列编号：6具有至少85％序列相似度的氨基酸序列，且所述VH区包含与序列编号：7具有至少85％序列相似度的氨基酸序列。3.如权利要求2所述的重组抗体，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐尚德，张惠雯，张佳瑜，
申请(专利权)人：刘扶东，
类型：发明
国别省市：