抗新型冠状病毒的中和抗体及其制备方法、制剂和用途技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种抗新型冠状病毒的中和抗体及其制备方法、制剂和用途。所述纳米抗体包括如SEQ ID NO.2～4所示的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3。所述纳米抗体与RBD识别结合机制清晰，能够高效、特异地与SARS

【技术实现步骤摘要】
抗新型冠状病毒的中和抗体及其制备方法、制剂和用途


[0001]本专利技术涉及生物
，涉及一种抗新型冠状病毒的中和抗体及其制备方法、制剂和用途，特别涉及抗新型冠状病毒SARS
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2的纳米抗体及其制备方法、制剂、药物组合物、检测试剂盒和用途。

技术介绍

[0002]中和抗体是一类能与病毒颗粒表位结合，通过阻碍病毒侵染而降低病毒感染性的抗体。中和抗体来源广泛，既可以从康复者血浆中获取，也可以通过免疫不同病毒抗原表位获得识别多表位的抗体，其制备工艺相对成熟，研发周期短，因此研发针对病毒的高滴度中和抗体也是预防病毒传播和感染的有效手段。
[0003]严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
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2是2019年年底发现并导致全球传播的新型冠状肺炎疾病(COVID
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19)的病原体。其感染宿主依赖于其刺突蛋白S的受体结构域(RBD)对宿主上皮细胞的血管紧张素转换酶2(ACE2)的识别和结合，随后与细胞膜融合，病毒完成侵染过程。由于其传染性强、传播速度快、致死率较高等特点，且没有完全有效的治疗手段，已成为危害全球公共卫生安全的重要传染性疾病之一，因此针对该病毒的药物开发，预防性疫苗开发及相关抗体的开发显得尤为迫切。
[0004]纳米抗体具有分子量小、穿透性强、易于表达、易于基因改造以及易于结合多个表位等优点。因此此类抗体可作为一种有效中和抗体的候选者，但当前尚无针对SARS
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2的上市纳米抗体药物。

技术实现思路

[0005]为克服现有技术的上述缺点，本专利技术提供了一种抗新型冠状病毒SARS
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2的纳米抗体及其制备方法和用途，所述纳米抗体具有较强的与新型冠状病毒SARS
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2特异性结合的能力(Kd<1x10
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M)及清晰的结合表位信息，所述纳米抗体的应用为新型冠状病毒SARS
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2的诊断和治疗提供更广泛的手段。
[0006]本专利技术提供一种抗新型冠状病毒SARS
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2S蛋白RBD结构域(Receptor
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Binding Domain)的纳米抗体氨基酸序列(SC4)，所述纳米抗体序列中包括三个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其氨基酸序列如下：
[0007]SC4的氨基酸序列：
[0008]QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSDFSSSTMGWYRQAPGKQREFVAISSEGSTSYAGSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLEPEDTAVYYCNVVDRWYDY WGQGTQVTVS(SEQ ID NO.1)。
[0009]本专利技术中，所述纳米抗体包括三个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其氨基酸序列分别如下：
[0010]CDR1序列：GSDFSSST(SEQ ID NO.2)
[0011]CDR2序列：ISSEGST(SEQ ID NO.3)
[0012]CDR3序列：NVVDRWYDY(SEQ ID NO.4)。
[0013]本专利技术所述纳米抗体可以是包含上述CDR1、CDR2和CDR3中的一个或多个的抗体，即所述纳米抗体可以是包含CDR1，或包含CDR2，或包含CDR3，或包含CDR1和CDR2，或包含CDR1和CDR3，或包含CDR2和CDR3，或包含CDR1、CDR2和CDR3。
[0014]在一具体实施方式中，所述纳米抗体至少包括CDR1。
[0015]在一具体实施方式中，所述纳米抗体至少包括CDR2。
[0016]在一具体实施方式中，所述纳米抗体至少包括CDR3。
[0017]本专利技术中，所述进一步包括框架区，所述框架区是任何能够实现本专利技术所述纳米抗体功能的框架区，包括人源的或鼠源的。本专利技术中，所述纳米抗体可以包括以下框架区中的一个或多个：
[0018]FR1序列：QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO.5)；
[0019]FR2序列：MGWYRQAPGKQREFVA(SEQ ID NO.6)；
[0020]FR3序列：SYAGSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLEPEDTAVYYC(SEQ ID NO.7)；
[0021]FR4序列：WGQGTQVTVS(SEQ ID NO.8)。
[0022]本专利技术所述纳米抗体主要识别结合RBD的受体结合基序区域(RBM:Receptor
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Binding Motif)。
[0023]本专利技术进一步提供了与所述纳米抗体相关的生物材料、衍生抗体等。本专利技术一方面提供一种分离的多核苷酸，编码所述抗新型冠状病毒SARS
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2抗体。该核酸序列为：
[0024]CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCGGCGGACTGGTGCAGGCTGGAGGAAGCCTGAGACTGTCCTGTGCCGCCAGCGGCAGCGACTTCAGCTCCTCCACCATGGGCTGGTACAGACAGGCCCCCGGCAAGCAGAGAGAGTTCGTGGCCATCAGCTCCGAGGGCAGCACCTCCTACGCCGGCTCCGTGAAGGGCAGGTTCACAATCAGCAGAGATAACGCCAAGAACACAGTGTACCTGCAGATGAATAGCCTGGAGCCTGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCAATGTGGTGGACAGATGGTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCAGGTGACAGTGAGC(SEQ ID NO.9)。
[0025]本专利技术另一方面提供一种构建体，含有所述分离的多核苷酸。
[0026]在本专利技术某些实施方式中，所述构建体由所述分离的多核苷酸插入到表达载体的多克隆位点构建而成。本专利技术中的表达载体通常指本领域熟知的各种市售表达载体，例如可以是细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。
[0027]本专利技术另一方面提供一种纳米抗体的表达系统，所述表达系统含有所述构建体或基因组中整合有外源的所述多核苷酸。任何适用于表达载体进行表达的细胞都可以作为宿主细胞，例如，所述宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。
[0028]在本专利技术某些实施方式中，宿主细胞选自E.coli MC1061细胞、Trichoplusia ni High Five细胞、BL21(DE3)细胞、Expi293细胞和E.coli SS320细胞中的一种或多种的组合。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列包括如下互补决定区CDR1、CDR2和CDR3中的一个或多个：如SEQ ID NO.2所示的CDR1；如SEQ ID NO.3所示的CDR2；如SEQ ID NO.4所示的CDR3。2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括如下框架区FR1、FR2、FR3和FR4中的一个或多个：如SEQ ID NO.5所示的FR1；如SEQ ID NO.6所示的FR2；如SEQ ID NO.7所示的FR3；如SEQ ID NO.8所示的FR4。3.根据权利要求2所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。4.一种编码根据权利要求1所述的纳米抗体的分离的多核苷酸。5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO.9所示。6.一种构建体，其特征在于，其含有根据权利要求4所述的多核苷酸。7.一种纳米抗体的表达系统，所述表达系统含有所述根据权利要求6所述的构建体或基因组中整合有外源的根据权利要求4或5所述的多核苷酸。8.一种药物组合物，其特征在于，其包含根据权利要求1～3之任一项所述的纳米抗体中的一种或几种，以及药学上可接受的载体。9...

【专利技术属性】
技术研发人员：谈静泉，李典范，迪米特里，
申请(专利权)人：南京晶准生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：